El efecto de mejora de las células endoteliales hepáticas C-kit (+) con deficiencia de Mertk en la esteatohepatitis no alcohólica

I. Antecedentes del estudio La enfermedad hepática grasa no alcohólica (NAFLD) se ha convertido en uno de los trastornos hepáticos más frecuentes a nivel mundial [1]. A pesar de su alta incidencia y gravedad, actualmente no existen agentes terapéuticos efectivos. Los tratamientos existentes se centran en el alivio sintomático, como la hepatoprotección y la reducción de enzimas, en lugar de abordar la patogénesis subyacente [2]. Por lo tanto, dilucidar los mecanismos que impulsan la progresión de la esteatohepatitis no alcohólica relacionada con NAFLD (NASH) y la fibrosis hepática es fundamental para desarrollar estrategias preventivas, mejoradas o incluso curativas, que tengan una importancia estratégica significativa.

1. Paper de las LSEC en la patogénesis de NAFLD:

   Las células endoteliales sinusoidales hepáticas (LSEC), los componentes principales del endotelio hepático sinusoidal, forman una barrera física que regula el intercambio de sustancias entre el parénquima hepático y la circulación. Como células endoteliales altamente especializadas (EC) y las células no parenquimales más abundantes (NPC) en el hígado, los LSEC juegan papeles fundamentales en la fisiopatología hepática [3-4]. Dirigir la función LSEC representa un enfoque prometedor para mitigar la progresión y las complicaciones de NAFLD.

2. Características transcriptómicas heterogéneas de las subpoblaciones LSEC en NAFLD:

   La secuenciación de ARN de células individuales (SCRNA-seq) permite la amplificación y secuenciación de todo el genoma a nivel de células individuales. En el hígado, los hepatocitos (HCS) y NPCs exhiben una marcada heterogeneidad transcriptómica, sumergiendo la zonación metabólica y funcional. Esto resalta el potencial del análisis de un solo células en la comprensión de las enfermedades hepáticas [5]. Sin embargo, los estudios de SCRNA-seq en LSEC en NAFLD permanecen sin explorar.

3. Hipótesis: C-Kit (+)/Gas6 (-)-La subpoblación LSEC exacerba NAFLD a través de la regulación mediada por Gas6/Mertk de la mitofagia Pink1:

Las células progenitoras endoteliales derivadas de la médula ósea (EPC), marcadas por C-KIT (CD117), pueden expresar C-KIT en ECS en condiciones patológicas [6]. Gas6, un ligando para los receptores TAM (Tyro3, ​​AXL, Mertk), activa las cascadas de señalización aguas abajo que regulan la migración celular, la inflamación, la supervivencia y la mitofagia [7]. En NAFLD, Gas6/Mertk exhibe roles específicos de células [8-10]: antiinflamatorio en macrófagos hepáticos; Pro-fibrótico en células estrelladas hepáticas (HSC); Protectivo en hepatocitos (HCS). Sin embargo, el papel de Gas6/Mertk en LSEC durante NAFLD sigue siendo desconocido. La disfunción mitocondrial es un sello distintivo de NAFLD [11], y la mitofagia deteriorada (por ejemplo, deficiencia de Pink1) exacerba la inflamación hepática, la esteatosis y la fibrosis [12]. La evidencia emergente sugiere que Gas6/Mertk mejora la mitofagia para preservar la función mitocondrial. Por ejemplo, los ratones Mertk-/- exhiben disfunción mitocondrial de cardiomiocitos [13], y Gas6 promueve la mitofagia [14].

Nuestros datos preliminares de SCRNA-seq de ratones HFD/ND identificaron un único c-kit (+)/GAS6 (-)-LSEC Subpoblación. Estos LSEC indujeron el deterioro de la mitofagia en HCS/HSC co-cultivados, que se manifiestan como senescencia mitocondrial, estrés oxidativo, activación de HSC, deposición de lípidos de HC e inflamación. Investigar cómo esta subpoblación impulsa la progresión de NAFLD presentará nuevos mecanismos fisiopatológicos y objetivos terapéuticos, formando la base de este estudio.

II. OBJETIVOS DE ESTUDIO para dilucidar los niveles de expresión de los pares de ligando C-Kit y Gas6/Mertk en los tejidos hepáticos de pacientes con NAFLD.

Iii. Procedimientos de estudio

(1) Criterios de inclusión y exclusión

1. Criterios de inclusión: diagnóstico de NAFLD por pautas para la prevención y tratamiento de la enfermedad del hígado graso no alcohólico (edición 2018). Edad de 18 a 65 años.
2. Criterios de exclusión: cirrosis (compensada o descompensada), carcinoma hepatocelular, hepatitis viral activa (VHB, VHC), colangitis biliar primaria, colangitis esclerosa primaria, antecedentes recientes de uso de drogas ilícitas, alcohol ≥20 g/día para las mujeres y ≥30 G/día para los hombres, el embarazo o el embarazo de la corriente, la facultad de mama, la comida severa.

(2) Diseño de estudio

1. Biopsia de hígado y colección de tejidos:

   Biopsia hepática guiada por ultrasonido en 6 pacientes con NAFLD. Evaluación histopatológica (He, tinción de Masson) para Nash y fibrosis (puntuación NAS y Scheuer). Recopilación de datos clínicos y almacenamiento de tejido hepático (-80 ° C).

2. Análisis de expresión de c-kit y mertk:

Inmunofluorescencia Co-tadación de tejidos hepáticos. 3. Análisis estadístico: Compare los niveles de expresión de C-Kit y Mertk en pacientes con NAFLD leves y graves.

(3) Inscripción y flujo de trabajo

1. Recopilación de datos de línea de base:

   ① Parámetros clínicos y drográficos: nombre, sexo, edad, etnia, fecha de nacimiento, altura, peso, inicio de la enfermedad, información de contacto.

   ② Pruebas de laboratorio: CBC, Alt, AST, TBIL, TG, colesterol, glucosa, proteína total, albúmina.

   ③ Evaluaciones clínicas: presión arterial, IMC, ultrasonido abdominal, fibroscan.

2. Protocolo de biopsia:

   • Biopsia hepática percutánea guiada por ultrasonido dentro de 1 mes de inscripción. ② Requisitos de muestras de títulos: ≥3 mm de diámetro, 5-8 mm de longitud. ③Storaz: -80 ° C para el análisis del gen C -Kit y Mertk.

IV. Los resultados esperados aclaran la relación regulatoria entre los LSEC C-KIT (+) y la vía de señalización de Gas6-Mertk en los tejidos hepáticos de pacientes con NAFLD.