Den forbedrede virkning af C-Kit (+) lever endotelceller med Mertk-mangel på ikke-alkoholisk steatohepatitis

I. Undersøgelsesbaggrund Ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) er blevet en af ​​de mest udbredte leverforstyrrelser globalt [1]. På trods af sin høje forekomst og sværhedsgrad findes der i øjeblikket ingen effektive terapeutiske midler. Eksisterende behandlinger fokuserer på symptomatisk lindring, såsom hepatoprotection og enzymreduktion, snarere end at tackle den underliggende patogenese [2]. Derfor er det kritisk at belyse mekanismerne, der driver udviklingen af ​​NAFLD-relaterede ikke-alkoholiske steatohepatitis (NASH) og leverfibrose, for at udvikle forebyggende, forbedrede eller endda helbredende strategier, hvilket har betydelig strategisk betydning.

1. LSECs rolle i NAFLD -patogenese:

   Lever sinusformede endotelceller (LSEC'er), de primære komponenter i leverens sinusformede endotel, danner en fysisk barriere, der regulerer stofudveksling mellem leverparenchyma og cirkulation. Som højt specialiserede endotelceller (EC'er) og de mest rigelige ikke-parenchymale celler (NPC'er) i leveren, spiller LSECS centrale roller i leverpatofysiologi [3-4]. Målretning af LSEC -funktion repræsenterer en lovende tilgang til at afbøde NAFLD -progression og komplikationer.

2. Heterogene transkriptomiske træk ved LSEC -underpopulationer i NAFLD:

   Enkeltcelle-RNA-sekventering (SCRNA-seq) muliggør genom-bred amplifikation og sekventering på enkeltcelleniveau. I leveren udviser hepatocytter (HCS) og NPC'er markant transkriptomisk heterogenitet, der understøtter metabolisk og funktionel zonering. Dette fremhæver potentialet ved enkeltcelleanalyse i forståelsen af ​​leversygdomme [5]. SCRNA-seq-undersøgelser af LSEC'er i NAFLD forbliver imidlertid uudforsket.

3. Hypotese: C-kit (+)/gas6 (-)-LSEC-underpopulation forværrer NAFLD via GAS6/MERTK-medieret regulering af Pink1 Mitophagy:

Knoglemarv-afledte endotelforfaderceller (EPC'er), markeret med C-KIT (CD117), kan udtrykke C-KIT i EC'er under patologiske forhold [6]. Gas6, en ligand for TAM -receptorer (TYRO3, AXL, MERTK), aktiverer nedstrøms signaleringskaskader, der regulerer cellemigration, betændelse, overlevelse og mitofagi [7]. I NAFLD udviser GAS6/MERTK cellespecifikke roller [8-10]: antiinflammatorisk i levermakrofager; Pro-fibrotisk i lever-stellatceller (HSC'er); Beskyttende i hepatocytter (HCS). Imidlertid forbliver gas6/Mertk's rolle i LSEC'er under NAFLD ukendt. Mitochondrial dysfunktion er et kendetegn ved NAFLD [11], og nedsat mitofagi (f.eks. Pink1 -mangel) forværrer leverinflammation, steatosis og fibrose [12]. Emerging -bevis tyder på, at GAS6/MERTK forbedrer mitofagien for at bevare mitokondrisk funktion. For eksempel udviser Mertk-/- mus cardiomyocyt mitokondrial dysfunktion [13], og GAS6 fremmer mitofagi [14].

Vores foreløbige SCRNA-seq-data fra HFD/ND-mus identificerede en unik C-Kit (+)/gas6 (-)-LSEC-subpopulation. Disse LSEC'er inducerede svækkelse af mitofagi i co-dyrkede HCS/HSC'er, manifesterer sig som mitokondrisk senescens, oxidativ stress, HSC-aktivering, HC-lipidaflejring og betændelse. Undersøgelse af, hvordan denne underpopulation driver NAFLD -progression, afslører nye patofysiologiske mekanismer og terapeutiske mål, hvilket danner grundlaget for denne undersøgelse.

Ii. Undersøgelsesmål for at belyse ekspressionsniveauerne for C-KIT og GAS6/MERTK ligand-receptorpar i levervæv fra NAFLD-patienter.

III. Undersøgelsesprocedurer

(1) Inkluderings- og ekskluderingskriterier

1. Inkluderingskriterier: NAFLD-diagnose pr. Retningslinjer for forebyggelse og behandling af ikke-alkoholisk fedtleversygdom (2018-udgave). Alder 18-65 år.
2. Ekskluderingskriterier: Cirrhose (kompenseret eller dekompenseret), hepatocellulært karcinom, aktiv viral hepatitis (HBV, HCV), primær galdecholangitis, primær skleroserende cholangitis, nyere historie med ulovlig stofbrug, alkoholindtagelse ≥20 g/dag for kvinder og ≥30 g/dag for mænd, strøm graviditet eller breastfeeding, alvorlig komitéer.

(2) Undersøgelsesdesign

1. Leverbiopsi og vævsindsamling:

   Ultralydstyret leverbiopsi hos 6 NAFLD-patienter. Histopatologisk evaluering (han, Masson -farvning) for NASH og fibrose (NAS og Scheuer scoring). Klinisk dataindsamling og opbevaring af levervæv (-80 ° C).

2. Ekspressionsanalyse af C-Kit og Mertk:

Immunofluorescens-co-farvning af levervæv. 3. Statistisk analyse: Sammenlign C-KIT- og MERTK-ekspressionsniveauer hos milde og alvorlige NAFLD-patienter.

(3) Tilmelding og arbejdsgang

1. Baseline -dataindsamling:

   ① Demografiske og kliniske parametre: navn, køn, alder, etnicitet, fødselsdato, højde, vægt, sygdomsdebut, kontaktoplysninger.

   ② Laboratorieundersøgelser: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, kolesterol, glukose, total protein, albumin.

   ③Kliniske vurderinger: blodtryk, BMI, abdominal ultralyd, fibroscan.

2. Biopsi -protokol:

   • Ultralydstyret perkutan leverbiopsi inden for 1 måned efter tilmeldingen. Krav til ② Tissue Prøve: ≥3 mm diameter, 5-8 mm længde. ③Storage: -80 ° C for C -KIT og MERTK -genanalyse.

Iv. Forventede resultater afklarer det regulatoriske forhold mellem C-KIT (+) LSEC'er og GAS6-MERTK-signalvejen i NAFLD-patientens levervæv.