Maternal mikrokimerisme i lymfeknuder hos spædbørn med galdeatresi på tidspunktet for Kasais operation (K-LNMC)

Ved operation af spædbørn med ikke-syndromatisk galdeatresi (BA, hyppigst forekommende form), bemærker kirurger næsten uvægerligt det fremtrædende fund af flere hævede lymfeknuder på op til 2 cm store i porta hepatis og tyndtarmens mesenterium, hvor de kan udgøre en drue som komplekser. Spædbørn i samme alder, som er laparotomiseret for anden patologi, har normalt ikke sådanne knuder.

Biliær atresi er en sygdom hos den nyfødte, som er dødelig, når den ikke behandles. Histologisk svarer det til en degeneration af intra- og ekstra hepatiske galdegange i et delvist specifikt inflammatorisk infiltrat og progressiv cirrhose.

Ætiologien af ​​denne sjældne, men konstante sygdom (1:8-1:15.000) er ukendt. I øjeblikket i BA ætiologi forskning forfølges to hovedveje:

1. Viralt inducerede perinatale (auto)immune processer er mistænkt. En eksperimentel form for BA kan fremkaldes ved at inficere murine mødre med dsRNA-vira, f.eks. Rhesus-rotavirus eller Reo-virus, mens vaccination af mødre i mus har forhindret eksperimentel BA. Betydningen af ​​γ/δ-T-celle- og IL17/IL 23-vejen for BA er i øjeblikket undersøgt. Men i grupper af syngene dyr, der behandles af den samme batch af vira, har BA en tendens til at være inkonstant, og det er begrænset til ekstrahepatiske galdekanaler, såsom om dyremodellens gyldighed er et problem.
2. Den anden forskningsretning er ikke primært afhængig af forsøg, der involverer nyfødte dyr: Der er indikationer på, at placentabarrieren under graviditeten kan blive permeabel for maternelle lymfocytter (f.eks. ved en fejlagtig dæmpning af T-celletiltrækkende kemokiner i decidualstromaceller) og allerede i 2008 maternelle lymfocytter er blevet påvist i leveren hos BA-spædbørn. Efterfølgende er fænomenet materno-føtal mikrokimerisme kommet i fokus i BA-etiologisk forskning: i sammenhæng med blandede materno-føtale immunreaktioner kan celler af maternel oprindelse misdirigere spædbarnets umodne immunsystem til autoimmunitet eller fungere direkte som effektorer i en graft vs. vært som mode.

Betydningen af ​​mesenteriske og portale lymfeknuder for modning af immunsystemet under graviditet er blevet rapporteret for nylig. Desuden er det blevet påvist, at flowet mellem leveren og portallymfeknuderne er tovejs. Hos mus blev hyppigheden af ​​CD4+ og FoxP3+ regulatoriske T-celler fundet at være forbundet med moderens immunstatus. Vi antog således, at de fremtrædende hævede lymfeknuder hos BA-spædbørn, som kirurger konstant støder på under Kasais operation, kan være nøglen til en bedre forståelse af patofysiologisk vigtige lymfocythandelsmekanismer.

Ved standardoperationen, Kasai-operationen, som i et kapløb med tiltagende levercirrhose giver mening op til en alder på 4 måneder, bliver de nedbrudte rester af de store galdegange i leverhilus (den såkaldte "hilarplade") resekeret , En Roux y-løkke sys på resektionsstedet. Den skal dræne enhver eventuel galdestrøm fra resterende galdekanaler. Den langsigtede succesrate for denne foreløbige kirurgiske helbredelse, som er af moderat teknisk kompleksitet og invasivitet, anslås til ca. 15-20 %. I de resterende kan en delvis succes udskyde nødvendigheden af ​​levertransplantation. Vi undersøgte hos syv på hinanden følgende patienter med histologisk påvist galdeatresi, om der i periportale lymfeknuder var evidens for maternel genetisk materiale.

Metoder :

7 på hinanden følgende patienter med den præoperative diagnose BA blev inkluderet i undersøgelsen. Andre årsager til icterus prolongatus (α1 anti-trypsin mangel, Alagilles syndrom, PFIC etc.) var blevet udelukket blandt metoderne teknisk succesfuld ERCP (5/7 patienter), som viste fravær af intrahepatiske galdegange.

Efter at have indhentet forældrenes informerede samtykke blev 2 ml EDTA fuldblod indsamlet fra mor og spædbarn. Under Kasai's operation blev der udtaget prøver fra en portal og en mesenterial lymfeknude (Hannover Medical Schools etiske udvalgs afstemning nr. 1650/11.12.2012. Efter bipolar dissektion blev de mesenteriske mellemrum lukket med 4-0 Vicryl suturer.

Lymfeknuder blev forstyrret mekanisk, og DNA blev ekstraheret enzymatisk (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Tyskland) som beskrevet tidligere og normaliseret til 30 ug/ml.

Kort tandem gentagelsesanalyse blev realiseret med multiplex PCR for markører LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 som beskrevet. Kort fortalt blev fragmentlængdeanalyse udført i et Abi Prism 310-system med GeneScan 3.11. software til sammenligning af mors og spædbarns blod med lymfeknude-DNA.

Genetiske enkeltnukleotidpolymorfier (SNP'er) blev sporet ved kvantitative realtids PCR-kimæriske analyser. Reaktioner blev udført på en iCycler iQ5 real-time PCR platform (Bio-Rad) ved hjælp af ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo scientific). Specialdesignede primere og prober blev leveret af Sigma-Aldrich. Kontrolreaktioner og normalisering af prøve-DNA blev udført ved at amplificere albumingenet.