BAFF-var som en biomarkør for respons på B-depletiv behandling ved systemisk lupus erythematosus og reumatoid arthritis (PREDICT)

BAGGRUND

Systemisk lupus erythematosus (SLE) og reumatoid arthritis (RA) er multisystem immunmedieret sygdom karakteriseret ved en kompleks patogenese, hvor en unormal aktivering af det humorale immunrespons, med overproduktion af autoantistoffer, har vist sig at spille en central rolle.

B-lymfocytstimulator (BAFF) er et cytokin- og lægemiddelmål, der primært produceres af monocytter og neutrofiler. Det er afgørende for B-celleaktivering, differentiering og overlevelse. Overekspression af BAFF blev påvist at være forbundet med et mere alvorligt mønster af SLE og korrelere med hyppigere positivitet for anti-Sm (OR 1,7; 95 % CI 1,3, 2,2), anti-dsDNA med høj titer (OR 1,5; 95 % CI 1,1, 2,2), lavere C3 (OR 1,3; 95 % CI 1,0, 1,8), højere proteinuri (OR 1,8; 95 % CI 1,4, 2,4) og øget risiko for opblussen (HR 1,86; 95 % CI 1,29, 2,68). På samme måde er høje niveauer af BAFF blevet observeret i blod og ledvæske hos RA-patienter og blev påvist at korrelere med højere sygdomsaktivitet i RA.

Belimumab og rituximab er den prototypiske form for B-celle-målrettede behandlinger, der i øjeblikket er godkendt til henholdsvis SLE og RA.

Belimumab, et fuldt humaniseret monoklonalt antistof rettet mod BAFF, er det første biologiske lægemiddel, der er licenseret og godkendt til brug i kombination med standard immunsuppressiva i SLE. Data fra RCT'er viste, at højere sygdomsaktivitet, anti-dsDNA-positivitet, lavt komplement og kortikosteroidbehandling kan forudsige en højere fordel for belimumab. Men omkring 40 % af forsøgspersonerne opnåede ikke et tilstrækkeligt svar.

Rituximab (RTX) er et kimært monoklonalt antistof, der selektivt hæmmer CD20-receptoren på overfladen af ​​B-lymfocytter. Brugen af ​​RTX, fortrinsvis i kombination med methotrexat, er indiceret til patienter med RA, der ikke reagerer på behandling med traditionelle immunsuppressiva. Selvom større effektivitet blev registreret hos patienter med positivitet for autoantistoffer (f.eks. reumatoid faktor og anti-citrullineret peptid), også i dette tilfælde reagerer omkring 30-40% af patienterne utilstrækkeligt.

En variant af TNFSF13B-genet, der koder for BAFF (BAFF-var), især almindelig på tværs af Sardinien (allelfrekvens, 26,5 %) og gradvist mindre almindelig i det sydlige (5,7 % i Italien, 5,0 % i Spanien og Portugal) og det nordlige Europa (1,8 % i Storbritannien og Sverige), var forbundet med autoimmune sygdomme, herunder SLE og RA. Den kausale variant blev identificeret som en insertions-deletionsvariant, hvilket gav et kortere transkript, der undslap mikroRNA-hæmning og øget produktion af opløseligt BAFF, som igen opregulerede humoral immunitet. Især var BAFF-var forbundet med øget niveau af opløseligt BAFF (effektstørrelse 0,77 standardafvigelser (SD); P= 8,47 x10-150), IgG (0,31 SD, p=1,68x10-12), IgA (0,31 SD, p=7,64x10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70x10-8), samt øget antal af totalt B-celler (0,18 SD, P=4,23x10-12) og adskillige undertyper, herunder CD24+CD27+ (omfattende u-switched og switched hukommelse ) (0,22 SD, P=2,94x10-10) som den stærkt associerede. Yderligere demonstrerede transkriptomdata BAFF-var som et ekspressionskvantitativt træk-locus, der øger TNFSF13B-ekspression (P = 2,37 × 10-13). Imidlertid kunne de forhøjede mRNA-niveauer kun forklare 24-27% af effekten på protein, hvilket indikerer, at en stigning i translationsniveau sandsynligvis også var involveret. I denne henseende indikerer data, at BAFF-var hæver opløselige BAFF-niveauer ved at favorisere produktionen af ​​et kortere transkript, der er mindre hæmmet af mikroRNA, såsom miR-15a6.

At kende BAFF-vars effektive indflydelse på de immunologiske, molekylære og kliniske modifikationer induceret af BAFF-hæmning har en afgørende betydning i fremtiden for en personlig medicin til SLE- og RA-patienter.

FORMÅL

• Primært mål: At udforske det immunologiske grundlag for en potentiel rolle for BAFF-var som en prognostisk biomarkør for respons på belimumab eller rituximab i behandlingen af ​​henholdsvis SLE- og RA-patienter. Mere detaljeret sigter undersøgelsen på at evaluere, om tilstanden af ​​BAFF-var-bærer påvirker de lægemiddelrelaterede modifikationer af immunologiske og molekylære variabler, såsom: (a) opløseligt BAFF (BAFF'er) cytokin, (b) mRNA-BAFF (c) ) miRNA-15a (d) B-celle subpopulationer.
• Sekundære mål: At udforske effekten af ​​BAFF-var på den kliniske responsrate på belimumab eller rituximab, vurderet ved forskellige udfaldsmål.

FORSKNINGSDESIGN OG METODOLOGI

• Undersøgelsesdesign: Det foreslåede projekt er en observationel longitudinel undersøgelse
• Population: Fordeling af BAFF-var og modifikationer på immunologiske, molekylære og kliniske variabler, efter start af behandling med anti-BAFF-middel, vil blive analyseret på en real-life monocentrisk sardinsk kohorte af SLE- og RA-patienter. I denne henseende repræsenterer sardinerne den bedst egnede population til denne type analyser på grund af den højere frekvens af BAFF-var; faktisk forventes tilstanden af ​​BAFF-var-bærer hos 50-60% af patienterne. Omkring 30 på hinanden følgende SLE- og 30 på hinanden følgende RA-patenter, der henvises til den reumatologiske enhed ved afdelingen for medicinske videnskaber og folkesundhed på universitetet og universitetsklinikken i Cagliari, vil blive rekrutteret.
• Dataindsamling: Demografisk (f.eks. køn, alder ved indskrivning, debutalder og diagnose), klinisk (f.eks. kumulative og aktive sygdomsmanifestationer, klinimetriske mål), serologiske (f.eks. autoantistoffer, herunder anti-dsDNA, C3 og C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) og terapeutiske (f.eks. tidligere og nuværende terapier) vil blive indsamlet.
• BAFF-genotypning: Ved BAFF-genotypning vil fuldblodsprøver blive indsamlet i EDTA ved tilmeldingen. gDNA'et vil blive ekstraheret ved udsaltningsmetoden i henhold til standardprotokol. Customs TaqMan-assay (Thermo Fisher Scientific), der er specielt designet til at genotype BAFF-varianterne af interesse, vil blive brugt med allelspecifik Real Time PCR i alle prøver.
• B-celle fænotypning: Flowcytometri vil blive brugt til at profilere B-celle subpopulationer i de 30 tilmeldte SLE patienter. Antallet af B-celler (CD45+CD19+), såvel som det absolutte og relative antal B-transitional (CD24+CD38+), antistofudskillende (ASC, CD27+CD38+), B-hukommelsesskiftet (CD27+IgD-), B-hukommelse ikke-switched (CD27+IgD+), B-naive (IgD+CD27-CD24-) og B regulatoriske (CD24+CD27+) celler vil blive vurderet ved Lyse-No-Wash protokol ved hjælp af BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• Opløselig BAFF: det vil blive målt ved enzym-linked immunosorbent assay (ELISA)
• Genekspressionsundersøgelse: mRNA vil blive ekstraheret fra fuldblod af Trizol Reagent, og den kvantitative analyse af mRNA-BAFF og miRNA-15a vil blive udført ved Real-Time PCR ved brug af specifikke TaqMan-prober, efter revers transkription i cDNA.
• Statistisk analyse. Statistisk analyse vil blive udført ved hjælp af SPSS® statistisk software. Sammenligning af gennemsnitlige niveauer af sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a og forskellige B-celle fænotyper mellem BAFF-var + og BAFF-var - patienter ved hvert besøg vil blive udført ved T- Student test eller Mann Whitney test, hvis det er relevant. Sammenligning af den gennemsnitlige forskel i niveauer af sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a og B-celle subpopulationer mellem BAFF-var + og BAFF-var - patienter ved de forskellige besøgsintervaller vil blive udført ved T- Student test eller Mann Whitney test , hvis passende. Effekten af ​​BAFF-var på modifikation af niveauerne af de immunologiske og molekylære variabler ovenfor vil blive yderligere vurderet ved multipel regression, herunder som uafhængige variabler, samtidige behandlinger og baseline sygdomstræk. Fishers eksakte test og logistisk regressionsanalyse vil blive udført for at sammenligne responsraten, som vurderet ved forskellige effektmål, hos BAFF-var + og BAFF-var - patienter.