Wirkung des Granulozyten-Kolonie-stimulierenden Faktors auf die klinische Schwangerschaftsrate bei Patientinnen mit Endometriose

• Art der Studie: Eine randomisierte, doppelblinde, kontrollierte Studie.
• Studienumgebung: IVF-Einheit im Entbindungsheim der Ain Shams University.

• Studienpopulation: Insgesamt 88 Frauen mit Endometriose werden in die Studie aufgenommen, aufgeteilt in zwei Gruppen:

  • Gruppe A (N=44): Frauen erhalten am Tag der Eizellentnahme während des IVF-Zyklus eine intrauterine Infusion von G-CSF.
  • Gruppe B (N = 44): Frauen erhalten am Tag der Eizellentnahme während des IVF-Zyklus eine intrauterine Placebo-Infusion mit Kochsalzlösung.
• Zuteilung und Verschleierung: Achtundachtzig Umschläge werden fortlaufend nummeriert und in jeden Umschlag wird der entsprechende Buchstabe, der die zugeteilte Gruppe bezeichnet, gemäß der Randomisierungstabelle gesteckt. Beim Eintreffen des ersten Patienten wird der erste Umschlag geöffnet und der Patient entsprechend dem darin enthaltenen Brief zugeteilt
• Randomisierungstabelle:

SN-Gruppe SN-Gruppe SN-Gruppe SN-Gruppe SN-Gruppe SN-Gruppe SN-Gruppe SN-Gruppe

1. A 12 A 23 B 34 B 45 A 56 A 67 B 78 B
2. B 13 A 24 A 35 B 46 A 57 A 68 B 79 A
3. B 14 A 25 B 36 A 47 B 58 B 69 B 80 A
4. B 15 A 26 A 37 A 48 B 59 B 70 A 81 B
5. A 16 A 27 B 38 B 49 B 60 B 71 B 82 A
6. A 17 A 28 A 39 B 50 B 61 A 72 B 83 B
7. A 18 B 29 B 40 B 51 A 62 B 73 A 84 B
8. B 19 B 30 A 41 A 52 A 63 A 74 B 85 B
9. A 20 A 31 A 42 B 53 A 64 B 75 A 86 B
10. A 21 B 32 A 43 A 54 B 65 B 76 B 87 A

11. A 22 B 33 B 44 A 55 A 66 B 77 A 88 A

    • Stichprobengröße: 88 Patienten, 44 in Gruppe A (die Fälle) und 44 in Gruppe B (die Kontrollen).
    • Musterbegründung:

Die erforderliche Stichprobengröße wurde mit der G*Power Software (Universität Düsseldorf, Deutschland) berechnet.

Das primäre Ergebnismaß ist die klinische Schwangerschaftsrate. Derzeit gibt es keine ausreichenden Informationen über die Wirkung des Granulozyten-Kolonie-stimulierenden Faktors auf die klinische Schwangerschaftsrate bei Patientinnen mit Endometriose, die sich einer In-vitro-Fertilisation unterziehen; daher würde die vorliegende explorative Studie auf eine Effektgröße abzielen, die klinisch relevant sein könnte.

Es wird also geschätzt, dass der Einschluss von 44 Patienten in jede der 2 Studiengruppen (insgesamt 88 Patienten) eine Aussagekraft von 80 % (Typ-II-Fehler, 0,2) erreichen würde, um einen statistisch signifikanten Unterschied zwischen den 2 Gruppen in Bezug auf zu erkennen die klinische Schwangerschaftsrate für eine mittlere Effektstärke, die einem w-Koeffizienten von 0,3 entspricht, unter Verwendung eines zweiseitigen Chi-Quadrat-Tests mit 1 Freiheitsgrad und der angestrebten Testkonfidenz auf einem Niveau von 95 % (Fehler 1. Art). 0,05). Die Effektgröße (w) wird wie folgt berechnet:

w = , wobei die Chi-Quadrat-Statistik und N die gesamte Stichprobengröße ist (Chow et al., 2003).

Die angestrebte Effektstärke von w = 0,3 wurde gewählt, da sie als klinisch relevanter Unterschied angesehen werden könnte, der in dieser explorativen Studie gesucht werden sollte.

• Ethische Erwägungen: Vor dem Screening und der Anmeldung wird von allen Teilnehmern eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt. Die Teilnehmer nehmen freiwillig an der Forschung teil und ihre Vertraulichkeit wird respektiert. Die Vorteile der Teilnahme an der Forschung werden allen Teilnehmern erläutert. Die Teilnahme an der Forschung wird den Teilnehmern nach Genehmigung durch die Forschungsethikkommission keinen Schaden zufügen.
• Studienablauf:

Alle Teilnehmer werden folgendem unterzogen:

A) Detaillierte Krankengeschichte einschließlich:

• Persönliche Geschichte
• Menstruationsgeschichte
• Vergangenheit und Geburtsgeschichte

B) Körperliche Untersuchung:

Nach Anamneseerhebung und Erfüllung der Einschluss- und Ausschlusskriterien wird eine klinische Untersuchung durchgeführt, einschließlich: allgemeine Untersuchung des Abdomens und des Beckens.

C) Laboruntersuchungen:

Routineuntersuchungen einschließlich: Nüchtern- und postprandialer Blutzucker und vollständiges Blutbild.

D) Ovulationsinduktion:

• Am Tag 3 der spontanen Zyklen haben alle Patientinnen ein basales Hormonprofil (FSH, LH, E2, TSH und Prolaktin).
• Transvaginaler (TV) Ultraschall (U/S) am Tag 3 der nicht stimulierten Zyklen wird mit einer transvaginalen Sonde von 5-9 MHz durchgeführt. Jeder Patient, bei dem Uterusanomalien festgestellt werden, wird ausgeschlossen.
• Das ovarielle Hyperstimulationsprotokoll wird gemäß einem langen GnRH-Agonistenprotokoll ab der mittleren Lutealphase durch tägliche subkutane Injektion von Triptorelinacetat (Decapeptyl 0,05 mg, Ferring Pharmaceutical, Kid, Deutschland) durchgeführt. Dann wird am Tag 3 des nächsten Zyklus eine ovarielle Hyperstimulation durch tägliche Injektion von HMG (Menogon 75 IE/Ampere "Ferring Pharmceutical, Kid, Deutschland" oder Merional 75 IE/Ampere "IBSA, Schweiz") begonnen. Die Anfangsdosis von Gonadotropinen wird entsprechend dem Alter und Körpergewicht der Probanden verschrieben, dann wird die Dosis entsprechend der ovariellen Reaktion angepasst, die durch transvaginale Follikulometrie beurteilt wird, die am sechsten Zyklustag durchgeführt wird.
• Entsprechend der ovariellen Reaktion wird jeden zweiten Tag TV U/S durchgeführt und in dem Moment, in dem der führende Follikel 16 mm erreicht, wird täglich TV U/S durchgeführt, bis der größte Follikel einen Durchmesser von > 18 mm erreicht. Die maximale Dauer von HMG darf Tag 16 nicht überschreiten.
• HCG (Choriomon 10.000 lU/amp. „IBSA, Schweiz“) zur Auslösung des Eisprungs verabreicht werden.

E) Sonographie:

Am Tag der HCG-Verabreichung wird eine transvaginale Sonographie durchgeführt, um die Dicke und das Muster des Endometriums zu messen.

Das Endometriummuster wird klassifiziert als:

• Proliferativ, wenn die Echogenität im Verhältnis zum Myometrium echoarm ist.
• Periovulatorisch, wenn es trilaminar ist.
• Sekretorisch, wenn es echoreich ist.

F) Entnahme der Eizelle:

• 36 Stunden nach der HCG-Injektion wird der Schallkopf mit dem Ultraschallsystem verbunden. Die Richtung des Leitstrahls wird überprüft. Die Punktionsnadel wird mit einem Aspirationsgerät verbunden, das mit einem Befestigungsring am vorderen und hinteren Ende des Vaginalschallkopfs befestigt wird, wodurch die Punktionsrichtung entsprechend dem Führungsstrahl auf dem Ultraschallbild definiert wird.
• Die Aspiration wird mit Reagenzgläsern überprüft. Der Uterus, beide Eierstöcke und Darmbeingefäße werden durch die Visualisierung in beiden Ebenen identifiziert. Der Abstand zwischen dem oberen Pol der Vagina und dem Eierstock wird genau beurteilt (es wird darauf geachtet, Darm- oder Gefäßinterposition zu vermeiden).
• Es wird eine Tiefenlokalisierung des nächstgelegenen zugänglichen Follikels (Abstand vom oberen Vaginalpol bis zur Follikelmitte) durchgeführt. Die Nadel wird kräftig in die Mitte des Follikels gedrückt (Aspirationsdruck 90-100 mmHg).

G) IVF- ICSI:

- Eine intrazytoplasmatische Spermieninjektion wird an Metaphase-II-Oozyten unter Verwendung der direkten Penetrationstechnik durchgeführt, die Befruchtungsergebnisse werden 16 bis 19 Stunden nach ICSI bewertet. Die Befruchtung wird durch das Vorhandensein von zwei Vorkernen als normal angesehen. Die Oozytendegeneration wird durch den Zusammenbruch des zytoplasmatischen Inhalts und die Trennung von der Zona identifiziert. Eine fehlgeschlagene Befruchtung wird durch das Fehlen der Vorkerne definiert.

H) Embryotransfer:

• Der Embryotransfer wird am 5. Tag mit einem Kochkatheter unter Ultraschallführung in einem Abstand von etwa 1-1,5 cm vom Fundus durch denselben Gynäkologen durchgeführt.
• Anzahl der übertragenen Embryonen 2-3 Embryonen.

Ich endlich:

Ein Serum-βhCG wird 12 Tage nach dem Embryotransfer durchgeführt und nach 48 Stunden wiederholt. gefolgt von US 6 Wochen nach dem Embryotransfer.

• Studieninterventionen: In der G-CSF-Gruppe wurden am Tag der Oozytenentnahme nach der Oozytenentnahme 30 mU (300 mcg/0,5 ml) G-CSF (NeupogenTM, Filgastrim, Amgen Inc., Thousand Oaks, CA, USA) verabreicht durch langsame transzervikale intrauterine Infusion mit IUI-Katheter (AINSEGREY, RIMOS, Italien). Bei den Kontrollen wurde anstelle von G-CSF normale Kochsalzlösung für die intrauterine Infusion verwendet.
• Statistische Analyse: Die Daten werden mit IBM© SPSS© Statistics Version 22 (IBM© Corp., Armonk, NY) analysiert. Normalverteilte numerische Daten werden als Mittelwert und Standardabweichung und schiefe Daten als Median und Interquartilbereich dargestellt. Qualitative Daten sind Anzahl und Prozentsatz. Der Vergleich normalverteilter numerischer Daten erfolgt mit dem ungepaarten t-Test. Schiefe Daten werden mit dem Mann-Whitney-Test verglichen. Kategoriale Daten werden ggf. mit dem Chi-Quadrat-Test nach Pearson oder dem exakten Test nach Fisher verglichen. Ein zweiseitiger p-Wert ˂0,05 wird als statistisch signifikant angesehen.