Wpływ czynnika stymulującego tworzenie kolonii granulocytów na kliniczny wskaźnik ciąż u pacjentek z endometriozą

• Rodzaj badania: Randomizowana, podwójnie ślepa, kontrolowana próba.
• Miejsce nauki: oddział in vitro w szpitalu położniczym Uniwersytetu Ain Shams.

• Badana populacja: Łącznie 88 kobiet z endometriozą zostanie włączonych do badania podzielonego na dwie grupy:

  • Grupa A (N=44): kobiety otrzymają wlew domaciczny G-CSF w dniu pobrania komórki jajowej podczas cyklu IVF.
  • Grupa B (N=44): kobiety otrzymają domaciczny wlew placebo z soli fizjologicznej w dniu pobrania komórki jajowej podczas cyklu IVF.
• Przydział i ukrywanie: Osiemdziesiąt osiem kopert zostanie ponumerowanych kolejno, aw każdej kopercie zostanie umieszczona odpowiednia litera oznaczająca przydzieloną grupę zgodnie z tabelą losowania. Po przybyciu pierwszego pacjenta pierwsza koperta zostanie otwarta, a pacjent zostanie przydzielony zgodnie z listem w środku
• Tabela randomizacji:

Grupa SN Grupa SN Grupa SN Grupa SN Grupa SN Grupa SN Grupa SN Grupa SN

1. A 12 A 23 B 34 B 45 A 56 A 67 B 78 B
2. 13 24 35 46 57 68 79
3. B 14 B 25 B 36 B 47 B 58 B 69 B 80 B
4. 15 26 37 48 59 70 81 000
5. 16 27 38 49 60 71 82 82
6. 17 28 39 50 61 72 83 000
7. 18 lat 29 lat 40 lat 51 lat 62 lat 73 lat 84 lat
8. B 19 B 30 B 41 B 52 B 63 B 74 B 85 B
9. 20 31 42 53 64 75 86 000
10. 21 32 43 54 65 76 87 87

11. 22 33 44 55 66 77 88

    • Wielkość próby: 88 pacjentów, 44 w grupie A (przypadki) i 44 w grupie B (kontrola).
    • Przykładowe uzasadnienie:

Wymaganą wielkość próbki obliczono za pomocą oprogramowania G*Power (Universitӓt Düsseldorf, Niemcy).

Podstawową miarą wyniku jest kliniczny wskaźnik ciąż. Obecnie nie ma wystarczających informacji dotyczących wpływu czynnika wzrostu kolonii granulocytów na odsetek ciąż klinicznych u pacjentek z endometriozą poddawanych zapłodnieniu pozaustrojowemu; dlatego niniejsze badanie eksploracyjne byłoby ukierunkowane na wielkość efektu, która mogłaby mieć znaczenie kliniczne.

Tak więc szacuje się, że włączenie 44 pacjentów do każdej z 2 grup badawczych (łącznie 88 pacjentów) pozwoliłoby uzyskać moc 80% (błąd II rodzaju, 0,2), aby wykryć statystycznie istotną różnicę między dwiema grupami pod względem współczynnik ciąż klinicznych dla średniej wielkości efektu odpowiadający współczynnikowi w 0,3 za pomocą dwustronnego testu chi-kwadrat z 1 stopniem swobody i ufnością testu docelowego ustaloną na poziomie 95% (błąd I rodzaju. 0,05). Wielkość efektu (w) oblicza się w następujący sposób:

w = , gdzie jest statystyką chi-kwadrat, a N jest całkowitą wielkością próby (Chow i in., 2003).

Docelowa wielkość efektu w = 0,3 została wybrana, ponieważ można ją uznać za istotną klinicznie różnicę, której należy szukać w tym badaniu eksploracyjnym.

• Względy etyczne: Przed badaniem przesiewowym i rejestracją od wszystkich uczestników zostanie uzyskana pisemna świadoma zgoda. Uczestnicy będą uczestniczyć w badaniu dobrowolnie, a ich poufność będzie uszanowana. Korzyści z udziału w badaniu zostaną wyjaśnione wszystkim uczestnikom. Uczestnictwo w badaniu nie spowoduje szkody dla uczestników po uzyskaniu zgody komisji etycznej badania.
• Procedury badania:

Wszyscy uczestnicy zostaną poddani następującym zabiegom:

A) Szczegółowa historia medyczna obejmująca:

• Historia osobista
• Historia miesiączki
• Przeszłość i historia położnicza

B) Badanie fizykalne:

Po zebraniu wywiadu i spełnieniu kryteriów włączenia i wyłączenia zostanie wykonane badanie kliniczne obejmujące: ogólne badanie jamy brzusznej i miednicy.

C) Badania laboratoryjne:

Rutynowe badania, w tym: stężenie cukru we krwi na czczo i po posiłku oraz pełna morfologia krwi.

D) Indukcja owulacji:

• W 3. dobie cykli spontanicznych u wszystkich pacjentek wystąpi podstawowy profil hormonalny (FSH, LH, E2, TSH i prolaktyna).
• USG przezpochwowe (TV) (U/S) w 3. dniu cykli niestymulowanych zostanie wykonane sondą przezpochwową o częstotliwości 5-9 MHZ. Każda pacjentka, u której wykryto nieprawidłowości macicy, zostanie wykluczona.
• Protokół hiperstymulacji jajników będzie prowadzony zgodnie z protokołem długiego agonisty GnRH, zaczynając od fazy środkowej lutealnej przez codzienne podskórne wstrzykiwanie octanu tryptoreliny (Decapeptyl 0,05 mg, Ferring Pharmaceutical, Kid, Niemcy). Następnie w dniu 3 następnego cyklu hiperstymulacja jajników zostanie rozpoczęta przez codzienne wstrzyknięcie HMG (Menogon 75 lU/amp „Ferring Pharmceutical, Kid, Niemcy” lub Merional 75 IU/amp „IBSA, Szwajcaria”). Dawka początkowa gonadotropin zostanie przepisana zgodnie z wiekiem i masą ciała pacjentek, następnie dawka zostanie dostosowana zgodnie z odpowiedzią jajników, która zostanie oceniona za pomocą folikulometrii przezpochwowej, która zostanie wykonana w szóstym dniu cyklu.
• W zależności od odpowiedzi jajników, co drugi dzień będzie wykonywane TV U/S, aw momencie, gdy pęcherzyk wiodący osiągnie 16mm, codziennie będzie wykonywane TV U/S, aż największy pęcherzyk osiągnie średnicę >18mm. Maksymalny czas trwania HMG nie może przekroczyć 16 dnia.
• HCG (Choriomon 10 000 lU/amp. „IBSA, Szwajcaria”) zostanie podany w celu wywołania owulacji.

E) Sonografia:

USG przezpochwowe zostanie wykonane w dniu podania HCG w celu zmierzenia grubości i kształtu endometrium.

Wzór endometrium zostanie sklasyfikowany jako:

• Proliferacyjny, gdy echogeniczność jest hipoechiczna w stosunku do mięśniówki macicy.
• Okołoowulacyjne, gdy jest trójwarstwowe.
• Wydzielniczy, gdy jest hiperechogeniczny.

F) Pobranie komórki jajowej:

• 36 godzin po wstrzyknięciu HCG głowica zostanie podłączona do systemu ultrasonograficznego. Kierunek belki prowadzącej zostanie sprawdzony. Igła nakłuwająca będzie połączona z aparatem zasysającym przymocowanym pierścieniem mocującym do przedniego i tylnego końca przetwornika dopochwowego, określając w ten sposób kierunek nakłucia odpowiadający wiązce prowadzącej na obrazie ultrasonograficznym.
• Aspiracja zostanie sprawdzona za pomocą probówek. Macica, oba jajniki i naczynia biodrowe zostaną zidentyfikowane poprzez wizualizację w obu płaszczyznach. Należy dokładnie ocenić odległość między górnym biegunem pochwy a jajnikiem (należy zachować ostrożność, aby uniknąć wstawienia jelit lub naczyń).
• Zostanie wykonana głęboka lokalizacja najbliższego dostępnego pęcherzyka (odległość od górnego bieguna pochwy do środka pęcherzyka). Igła zostanie mocno wepchnięta do środka pęcherzyka (ciśnienie aspiracji 90-100 mmHg).

G) IVF-ICSI:

- Docytoplazmatyczna iniekcja plemnika zostanie wykonana na oocytach metafazy II techniką bezpośredniej penetracji, wyniki zapłodnienia zostaną ocenione 16 do 19 godzin po ICSI. Zapłodnienie będzie uważane za normalne przez obecność dwóch przedjądrzy. Degenerację oocytów można rozpoznać po zapadnięciu się zawartości cytoplazmy i oddzieleniu się od strefy. Nieudane zapłodnienie zostanie określone przez brak przedjądrzy.

H) Transfer zarodków:

• Transfer zarodków zostanie wykonany w 5. dobie za pomocą cewnika Cooka pod kontrolą USG w odległości około 1-1,5 cm od dna przez tego samego lekarza ginekologa.
• Liczba przeniesionych zarodków 2-3 zarodki.

W końcu:

βhCG w surowicy zostanie wykonane 12 dni po transferze zarodków i powtórzone po 48 godzinach. a następnie US 6 tygodni po transferze zarodków.

• Interwencje w badaniu: W grupie G-CSF w dniu pobrania oocytów, po pobraniu oocytów, podano 30 mU (300 mcg/0,5 ml) G-CSF (NeupogenTM, Filgastrim, Amgen Inc., Thousand Oaks, CA, USA) powolnym wlewem przezszyjkowym domacicznym z cewnikiem IUI (AINSEGREY, RIMOS, Włochy). W grupie kontrolnej do infuzji domacicznej zamiast G-CSF stosowano normalną sól fizjologiczną.
• Analiza statystyczna: Dane zostaną przeanalizowane przy użyciu IBM© SPSS© Statistics wersja 22 (IBM© Corp., Armonk, NY). Dane liczbowe o rozkładzie normalnym zostaną przedstawione jako średnia i SD, a dane skośne jako mediana i rozstęp międzykwartylowy. Dane jakościowe będą liczbowe i procentowe. Porównanie danych liczbowych o rozkładzie normalnym zostanie wykonane za pomocą testu t dla nieparzystych. Skośne dane zostaną porównane za pomocą testu Manna-Whitneya. Dane kategoryczne zostaną porównane przy użyciu testu chi-kwadrat Pearsona lub dokładnego testu Fishera, jeśli to konieczne. Dwustronna wartość p ˂0,05 zostanie uznana za istotną statystycznie.