Ampliación versátil Detección de una sola molécula en biopsia líquida (VerSiLiB)

La detección robusta de moléculas individuales en fluidos biológicos complejos es el objetivo final en el campo del análisis de biomarcadores de enfermedades.

Convencionalmente, para permitir el análisis cuantitativo de moléculas individuales en volúmenes macroscópicos, la concentración previa del analito y la partición de la muestra en compartimentos fL-nL se ha combinado con la amplificación de los eventos de reconocimiento específicos. En estas configuraciones, la detección positiva o negativa de la señal de fluorescencia se activa mediante reacciones enzimáticas que ocurren en cada compartimento.

La lectura binaria basada en estadísticas de Poisson cuantifica concentraciones ultrabajas de moléculas de analito. Este enfoque se ha adoptado para el análisis de ácidos nucleicos en la PCR digital actual y también está disponible para proteínas en una técnica denominada ELISA digital.

El objetivo de VerSiLiB es desarrollar una estrategia de amplificación sin enzimas para el análisis de analitos de proteínas y ácidos nucleicos con una plataforma digital única que ofrece medios para acceder a información adicional sobre analitos objetivo que no se puede lograr con las tecnologías actuales. El método se basa en una novedosa amplificación de transporte mediada por afinidad, en la que la interacción de afinidad del analito objetivo con un ligando específico unido a un transportador de nanopartículas magnéticas se acompaña de un rápido desplazamiento de trazadores fluorescentes que sirven como indicadores. Al aplicar un campo magnético externo, los marcadores se transportan desde el lado de almacenamiento del marcador (donde están oscuros) al lado activo del marcador (donde se vuelven brillantes) solo si el analito objetivo está presente en el pequeño compartimento de reacción. Se prepararán nanoestructuras plasmónicas adaptadas en los lados activos y de almacenamiento del compartimento para hacer que el marcador sea oscuro o brillante. El objetivo es realizar la validación de tecnología para la novedosa plataforma de amplificación de proteogenómica VerSiLiB en el tratamiento del cáncer utilizando muestras de biopsia líquida almacenadas en biobancos.