Estudio diagnóstico de pruebas combinadas de Biomnarker en muestras de lavado broncoalveolar de pacientes inmunocomprometidos

El principal problema en el manejo de infecciones fúngicas invasivas que amenazan la vida en pacientes (pts) con leucemia aguda y pts después de un trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas es la falta de herramientas de diagnóstico sensibles y específicas para identificar patógenos fúngicos de manera confiable y temprana en el curso de la enfermedad. Debido a la neutropenia profunda y al recuento bajo de plaquetas, los procedimientos de diagnóstico invasivos rara vez son factibles a tiempo, por lo que la broncoscopia con BAL es el método de elección para diagnosticar infecciones pulmonares, ya que la sensibilidad de los métodos basados ​​en cultivos de sangre es baja, especialmente en infecciones por hongos. Los métodos indirectos, los llamados marcadores sustitutos, son cada vez más importantes en este entorno clínico. Estos marcadores serológicos, principalmente galactomanano (GM) y recientemente 1(1,3)-β-D-glucano (BDG), han sido validados en ensayos clínicos para muestras de sangre, sin embargo, la importancia clínica de analizar muestras de BAL hasta ahora es solo basado en datos retrospectivos para GM y aún no ha sido informado para BDG.

Por lo tanto, el objetivo de nuestro estudio de diagnóstico prospectivo y multicéntrico es dilucidar las tasas de sensibilidad y especificidad de estos marcadores serológicos en combinación con herramientas moleculares (tanto un ensayo específico de Aspergillus como un ensayo basado en PCR multifúngica), ya que los marcadores serológicos no son específicos de patógenos, y, además, para definir valores de corte específicos de especie para BDG en muestras BAL.

Además, si se detecta material genómico de Aspergillus fumigatus mediante PCR en una muestra clínica, investigamos el ADN fúngico en busca de mutaciones puntuales en el gen cyp51A que median la resistencia contra los triazoles comunes activos contra mohos con una PCR nueva, rápida, sensible y específica, no basada en cultivos. -ensayos y secuenciación para optimizar el tratamiento antifúngico lo antes posible.

Este estudio tiene como objetivo mejorar el diagnóstico temprano, sensible y específico de las infecciones fúngicas pulmonares invasivas y detectar patrones de resistencia a los azoles, lo que podría tener un impacto en el pronóstico de los pacientes hematológicos; por lo tanto, se registrarán los datos del tratamiento antimicótico y el resultado clínico.

Las muestras clínicas (BAL y sangre) de aproximadamente 100 pacientes que padecen leucemia aguda y pacientes después de un alotrasplante de células madre con neutropenia febril e infiltrados pulmonares diagnosticados en una tomografía computarizada de tórax sugestivos de infección por hongos se investigarán después del consentimiento informado de los pacientes en un estudio prospectivo multicéntrico. ensayo. Los pacientes se someterán a procedimientos estandarizados de diagnóstico por imágenes y microbiológicos para la identificación del patógeno infeccioso subyacente. Las muestras de sangre y BAL se analizarán adicionalmente para GM, BDG y con un ensayo de PCR de Aspergillus anidado de diagnóstico, un microarreglo de ADN multifúngico y un ensayo de PCR de resistencia a azoles. Los ensayos moleculares fueron establecidos por nuestro grupo y abarcan la detección de Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus terreus, Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Candida lusitaniae, Candida tropicalis, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Mucor racemosus, Rhizopus microsporus, Scedosporium prolificans, Trichosporon asahii e identificar las tres mutaciones puntuales más comunes que confieren resistencia a triazoles como voriconazol o posaconazol.

Resultados de otros medios de diagnóstico, incluidos los hallazgos de cultivos, así como los datos clínicos de los pacientes (p. la duración de la neutropenia, la enfermedad subyacente y el resultado, incluidos los datos de seguimiento relacionados con el tratamiento antimicótico y la mortalidad atribuible a las infecciones fúngicas) se documentarán, seudonimizarán e incluirán en nuestro banco de datos.

Las alícuotas de BAL y de sangre de 20 pts de control sin inmunosupresión (que padecen enfermedades pulmonares) se recolectarán y analizarán de manera idéntica.

Las definiciones de casos se realizarán de acuerdo con los criterios de la EORTC/MSG de 2008. La duración del estudio será de aproximadamente 24 meses.