Diagnostická studie kombinovaného testování biomnarkeru ve vzorcích bronchoalveolární laváže u imunokompromitovaných pacientů

Hlavním problémem při zvládání život ohrožujících invazivních mykotických infekcí u pacientů (pts) s akutní leukémií a pacientů po alogenní transplantaci hematopoetických kmenových buněk je nedostatek citlivých a specifických diagnostických nástrojů pro spolehlivou a časnou identifikaci houbových patogenů v průběhu onemocnění. Vzhledem k hluboké neutropenii a nízkému počtu trombocytů jsou invazivní diagnostické postupy zřídkakdy včas proveditelné, proto je bronchoskopie s BAL metodou volby v diagnostice plicních infekcí, protože citlivost kultivačních metod z krve je nízká, zejména u infekcí plísní. V tomto klinickém prostředí nabývají na významu nepřímé metody, tzv. zástupné markery. Tyto sérologické markery, především galaktomannan (GM) a nově 1(1,3)-β-D-glukan (BDG), byly validovány v klinických studiích pro krevní vzorky, nicméně klinický význam testování vzorků BAL je zatím pouze založeno na retrospektivních datech pro GM a dosud nebylo hlášeno pro BDG.

Cílem naší prospektivní a multicentrické diagnostické studie je proto objasnit míru senzitivity a specificity těchto sérologických markerů v kombinaci s molekulárními nástroji (jak specifický pro Aspergillus, tak test na bázi multifungální PCR), protože sérologické markery nejsou specifické pro patogeny, a dále definovat druhově specifické mezní hodnoty pro BDG ve vzorcích BAL.

Navíc, pokud je genomový materiál Aspergillus fumigatus detekován pomocí PCR v klinickém vzorku, zkoumáme houbovou DNA na bodové mutace v genu cyp51A zprostředkovávající rezistenci proti běžným triazolům aktivním proti plísním pomocí nové rychlé, citlivé a specifické PCR nezaložené na kultuře. -testy a sekvenování pro co nejčasnější optimalizaci antimykotické léčby.

Tato studie si klade za cíl zlepšit časnou, citlivou a specifickou diagnostiku invazivních plicních mykotických infekcí a detekovat vzorce rezistence vůči azolům, což by mohlo ovlivnit prognózu u hematologických pacientů; proto budou zaznamenány údaje o antimykotické léčbě a klinické výsledky.

Klinické vzorky (BAL a krev) od přibližně 100 pacientů trpících akutní leukémií a pacientů po alogenní transplantaci kmenových buněk s febrilní neutropenií a plicními infiltráty diagnostikovanými při CT vyšetření hrudníku s podezřením na plísňovou infekci budou vyšetřeny po informovaném souhlasu pacientů v multicentrickém, prospektivním soud. Lékaři podstoupí standardizované diagnostické zobrazování a mikrobiologické postupy pro identifikaci základního infekčního patogenu. BAL a vzorky krve budou dodatečně testovány na GM, BDG a pomocí diagnostického testu Aspergillus PCR, multifungálního DNA-Microarray a testu PCR rezistence na azol. Molekulární testy byly zavedeny naší skupinou a zahrnují detekci Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus terreus, Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Candida lusitaniae, Candida tropicalis, Fusarium oxysporum, Fusarium, Sporcemosporum, Rhizosporus microsporus prolificans, Trichosporon asahii a identifikují tři nejčastější bodové mutace, které propůjčují rezistenci na triazoly, jako je vorikonazol nebo posakonazol.

Výsledky jiných diagnostických prostředků včetně kultivačních nálezů a také klinická data pacientů (např. trvání neutropenie, základní onemocnění a výsledky včetně následných údajů týkajících se antimykotické léčby a úmrtnosti způsobené plísňovými infekcemi) budou zdokumentovány, pseudonomyzovány a zahrnuty do naší databáze.

BAL a krevní alikvoty 20 kontrolních pacientů bez imunosuprese (trpící plicními chorobami) budou odebrány a testovány identicky.

Definice případů budou provedeny podle kritérií EORTC/MSG z roku 2008. Délka studia bude přibližně 24 měsíců