Investigación del Estrés Oxidativo en Apendicectomía - Abierta Versus Laparoscópica en la Infancia y la Adolescencia (OSAE)

Objetivo del estudio: en el estudio aleatorizado prospectivo planificado, el estrés oxidativo se investigará mediante el análisis de los COV (compuestos orgánicos volátiles) en el aliento exhalado en niños sometidos a cirugía abierta o laparoscópica por apendicitis en el Departamento de Cirugía Pediátrica y del Adolescente de la Universidad Médica. de Graz. Una mejor comprensión resultante de los efectos de la técnica quirúrgica puede a) ser una condición previa para un entorno quirúrgico optimizado y b) posiblemente conducir a recomendaciones de sustancias activas antioxidantes pre o perioperatoriamente y c) ser una base para futuros procedimientos quirúrgicos.

Diseño del estudio: Se trata de un estudio piloto prospectivo aleatorizado en niños y adolescentes sometidos a cirugía por apendicitis aguda. Se excluirán los pacientes con apendicitis complicada y aquellos con un trastorno causado intraoperatoriamente. La operación en el contexto de este estudio es realizada exclusivamente por especialistas del Departamento de Cirugía Pediátrica y del Adolescente de la Universidad Médica de Graz, que realizan técnicas quirúrgicas abiertas y laparoscópicas. Se incluirán 40 pacientes de 6 a 18 años que padezcan apendicitis aguda. Estos se dividen en 2 grupos. Grupo 1 (n = 20) con laparoscópica y grupo 2 (n = 20) con apendicectomía abierta.

Reclutamiento y compensación de los participantes del estudio: Los padres/pacientes son informados del estudio por medio de una hoja de información y se les proporciona una declaración de consentimiento si están interesados. Los participantes no reciben ninguna compensación por participar en el estudio.

Muestreo de COV (compuestos orgánicos volátiles) exhalados usando NTME (microextracción con trampa de aguja) para medir OS (estrés oxidativo): Número de muestras: 2 muestras cada una del aliento exhalado en los tiempos definidos a continuación (en total n = 12). El tiempo de muestreo: t1 antes de la introducción del anestésico (n = 2); t2 después de la introducción del anestésico (n = 2); t3 15 minutos después del corte (n = 2); t4 30 minutos después del corte (n = 2); t5 45 minutos después del corte (n = 2); t6 después de la costura (n = 2).

Análisis de COV exhalados para medir OS: Las muestras de aliento exhalado tomadas se colocan en un inyector de un cromatógrafo de gases en la corriente de gas portador inerte (He). Las sustancias se asignan según su tiempo de retención en el cromatograma y su espectro de masas. Las conexiones desconocidas en el espectro de masas del aire exhalado se utilizan como base para la comparación con una base de datos de referencia.

Muestreo de marcadores sanguíneos para medir OS: a) tiempos de muestreo para WBC, PCR: t1 = 1 muestra preoperatoriamente (antes de la introducción del anestésico) y t2 = 1 muestra después de 24 h. b) tiempos de muestreo para malondialdehído: t1 = 1 muestra antes de la introducción del anestésico y t2 = 1 muestra después de la sutura.

Clasificación histopatológica: el apéndice vermiforme explantado se convierte en la restauración histopatológica en el Instituto de Patología de la Universidad Médica de Graz. Allí se hace la clasificación según los hallazgos histopatológicos en 4 grados de severidad (apendicitis aguda focal, apendicitis aguda supurativa, apendicitis aguda gangrenosa, apendicitis perforada).

Toma de muestras de leucocitos, PCR: Se realizan en el marco de los diagnósticos de rutina debido a la presentación clínica de la AA (apendicitis aguda).

Muestreo de COVs: Se toman 2 muestras de aliento de cada paciente durante la espiración, extraídas del mismo. Para recolectar las muestras, los investigadores utilizan un dispositivo de muestreo automático conectado directamente a un capnómetro. Este sistema funciona con microextracción (NTME) y permite un muestreo automático del aire alveolar, es decir, en la meseta de la curva de CO2. Las muestras se envían al Instituto de Rostock Medical Breath Analysis and Technologies (RoMBAT) como socio colaborador. Este socio fue seleccionado porque ya tiene una amplia experiencia con la metodología y los estudios sobre el estrés oxidativo durante las operaciones.

Muestreo de malondialdehído (MDA): el malondialdehído se analiza en el Instituto Clínico de Diagnóstico de Laboratorio Químico y Médico de la Universidad Médica de Graz mediante el método ultramoderno GC-MS. Para ello, se asigna al paciente a los dos tiempos de medición 2 x 400 μl de plasma EDTA tomado. La segunda muestra solo sirve como medida de seguridad si es necesario repetir las mediciones. Las muestras obtenidas deben congelarse a -80 °C en un plazo de 2 horas. . Posteriormente (a más tardar al día siguiente) las muestras deberán ser analizadas al Instituto.

Evaluación planificada: Las investigaciones estadísticas se realizan con SPSS 23.0®. La representación gráfica de los datos se realiza con GraphPad Prism 7®. Para investigar si las principales variables objetivo (VOC) difieren en el curso entre los dos grupos, se utilizan modelos lineales para mediciones repetidas con el grupo (apendicectomía abierta versus laparoscópica) como factor de sujeto intermedio y el tiempo de medición (t1 a t6) como sujeto interno factor. En el caso de desviaciones de la distribución normal, se toman en consideración las transformaciones. Los objetivos secundarios, es decir, los cambios en los marcadores séricos en los tiempos t1 y t6, se comparan entre los 2 grupos (apendicectomía abierta versus laparoscópica) mediante la prueba U de Mann-Whitney (datos que no se distribuyen normalmente) o la prueba T independiente (con resultados normales). distribución). Para establecer relaciones entre los COV y los marcadores séricos de estrés oxidativo en los tiempos t1 y t6 se realiza un análisis de correlación (según los datos, Pearson o Spearman Rho). Todas las pruebas estadísticas se llevan a cabo en dos lados y todos los valores de p se interpretan de forma puramente exploratoria.