Investigação do Estresse Oxidativo na Apendicectomia - Aberta Versus Laparoscópica na Infância e Adolescência (OSAE)

Objetivo do estudo: No estudo prospectivo randomizado planejado, o estresse oxidativo será investigado por meio da análise de VOCs (compostos orgânicos voláteis) na respiração exalada em crianças submetidas a cirurgia aberta ou laparoscópica para apendicite no Departamento de Cirurgia Pediátrica e Adolescente da Universidade de Medicina de Graça. Uma melhor compreensão resultante dos efeitos da técnica cirúrgica pode a) ser uma pré-condição para um cenário cirúrgico otimizado e b) possivelmente levar a recomendações de substâncias ativas antioxidantes pré ou perioperatórias e c) ser uma base para futuros procedimentos cirúrgicos.

Desenho do estudo: Este é um estudo piloto prospectivo randomizado em crianças e adolescentes submetidos à cirurgia devido a apendicite aguda. Serão excluídos os pacientes com apendicite complicada e aqueles com distúrbio causado no intraoperatório. A operação no contexto deste estudo é conduzida exclusivamente por especialistas do Departamento de Cirurgia Pediátrica e Adolescente da Universidade Médica de Graz, que realizam técnicas cirúrgicas abertas e laparoscópicas. Serão incluídos 40 pacientes com idades entre 6 e 18 anos que sofrem de apendicite aguda. Estes são divididos em 2 grupos. Grupo 1 (n = 20) com laparoscopia e grupo 2 (n = 20) com apendicectomia aberta.

Recrutamento e remuneração dos participantes do estudo: Os pais/pacientes são informados sobre o estudo por meio de uma folha de informações e recebem uma declaração de consentimento, caso estejam interessados. Os participantes não recebem nenhuma remuneração por participar do estudo.

Amostragem de VOCs exalados (compostos orgânicos voláteis) usando NTME (microextração de armadilha de agulha) para medição OS (estresse oxidativo): Número de amostras: 2 amostras cada da respiração exalada nos tempos definidos abaixo (no total n = 12). O tempo de amostragem: t1 antes da introdução do anestésico (n = 2); t2 após introdução anestésica (n = 2); t3 15 minutos após o corte (n = 2); t4 30 minutos após o corte (n = 2); t5 45 minutos após o corte (n = 2); t6 após a costura (n = 2).

Análise de VOCs exalados para medição OS: As amostras de ar exalado coletadas são colocadas em um injetor de um cromatógrafo a gás na corrente de gás inerte (He). As substâncias são atribuídas de acordo com seu tempo de retenção no cromatograma e seu espectro de massa. Conexões desconhecidas no espectro de massa da respiração exalada são usadas como base para comparação com um banco de dados de referência.

Amostragem de marcadores sanguíneos para medição OS: a) tempos de amostragem para leucócitos, PCR: t1 = 1 amostra no pré-operatório (antes da introdução anestésica) e t2 = 1 amostra após 24 h. b) tempos de amostragem para malondialdeído: t1 = 1 amostra antes da introdução anestésica e t2 = 1 amostra após a sutura.

Classificação histopatológica: O apêndice vermiforme explantado torna-se a remodelação histopatológica no Instituto de Patologia da Universidade Médica de Graz. Lá a classificação é feita de acordo com os achados histopatológicos em 4 graus de gravidade (apendicite aguda focal, apendicite aguda supurativa, apendicite aguda gangrenosa, apendicite perfurada).

Amostragem de WBCs, PCR: São realizadas no âmbito do diagnóstico de rotina devido à apresentação clínica da AA (apendicite aguda).

Amostragem de VOCs: 2 amostras de respiração são coletadas de cada paciente durante a expiração, retiradas dele. Para coletar as amostras, os investigadores usam um dispositivo de amostragem automático conectado diretamente a um capnômetro. Este sistema funciona com microextração (NTME) e permite uma amostragem automática do ar alveolar, ou seja, no platô da curva de CO2. As amostras são enviadas ao Intitute of Rostock Medical Breath Analysis and Technologies (RoMBAT) como parceiro de cooperação. Este parceiro foi escolhido porque já possui ampla experiência com a metodologia e estudos sobre estresse oxidativo durante as operações.

Amostragem de malondialdeído (MDA): O malondialdeído é analisado no Instituto Clínico para Diagnósticos de Laboratórios Médicos e Químicos da Universidade Médica de Graz por meio do ultramoderno método GC-MS. Para este efeito, o paciente é atribuído aos dois tempos de medição 2 x 400 μl de plasma EDTA tomado. A segunda amostra serve apenas como medida de segurança se forem necessárias medições repetidas. As amostras obtidas devem ser ultracongeladas a -80 °C no prazo de 2 horas. . Posteriormente (o mais tardar no dia seguinte) as amostras devem ser analisadas pelo Instituto.

Avaliação planejada: As investigações estatísticas são realizadas com SPSS 23.0®. A representação gráfica dos dados é realizada com GraphPad Prism 7®. Para investigar se as principais variáveis-alvo (VOCs) diferem no curso entre os dois grupos, modelos lineares são usados ​​para medições repetidas com grupo (apendicectomia aberta versus laparoscópica) como fator de assunto intermediário e tempo de medição (t1 a t6) como assunto interno fator. No caso de desvios da distribuição normal, as transformações são consideradas. Os alvos secundários, ou seja, as mudanças nos marcadores séricos nos tempos t1 e t6, são comparados entre os 2 grupos (apendicectomia aberta versus laparoscópica) pelo teste U de Mann-Whitney (dados não distribuídos normalmente) ou teste T independente (com distribuição). Para estabelecer relações entre os VOCs e os marcadores séricos de estresse oxidativo nos tempos t1 e t6 é realizada uma análise de correlação (dependendo dos dados, Pearson ou Spearman Rho). Todos os testes estatísticos são realizados em dois lados e todos os valores-p são interpretados de forma puramente exploratória.