Исследование окислительного стресса при аппендэктомии - открытая и лапароскопическая в детском и подростковом возрасте (OSAE)

Цель исследования: В запланированном проспективном рандомизированном исследовании окислительный стресс будет изучаться путем анализа ЛОС (летучих органических соединений) в выдыхаемом воздухе у детей, перенесших открытую или лапароскопическую операцию по поводу аппендицита на кафедре детской и подростковой хирургии Медицинского университета. Граца. Полученное в результате лучшее понимание эффектов хирургической техники может: а) стать предварительным условием для оптимизированной хирургической установки, и б) возможно, привести к рекомендациям по применению антиоксидантно-активных веществ до или во время операции, и в) стать основой для будущих хирургических вмешательств.

Дизайн исследования. Это проспективное рандомизированное пилотное исследование с участием детей и подростков, перенесших операцию по поводу острого аппендицита. Пациенты с осложненным аппендицитом и пациенты с интраоперационно вызванным заболеванием будут исключены. Операцию в рамках данного исследования проводят исключительно специалисты отделения детской и подростковой хирургии Медицинского университета Граца, выполняющие как открытые, так и лапароскопические хирургические методики. Включены 40 пациентов в возрасте от 6 до 18 лет, страдающих острым аппендицитом. Они делятся на 2 группы. 1-я группа (n = 20) с лапароскопической и 2-я группа (n = 20) с открытой аппендэктомией.

Набор и вознаграждение участников исследования: родители/пациенты уведомляются об исследовании с помощью информационного листка и при наличии заинтересованности получают заявление о согласии. Участники не получают никакой компенсации за участие в исследовании.

Отбор проб ЛОС (летучих органических соединений) с выдыхаемым воздухом с использованием NTME (микроэкстракция с иглой-ловушкой) для измерения ОС (окислительный стресс): Количество образцов: по 2 образца из выдыхаемого воздуха в моменты времени, указанные ниже (всего n = 12). Время забора проб: t1 до введения анестетика (n = 2); t2 после введения анестетика (n = 2); t3 через 15 минут после разреза (n = 2); t4 через 30 мин после разреза (n = 2); t5 через 45 минут после разреза (n = 2); t6 после шва (n = 2).

Анализ ЛОС в выдыхаемом воздухе для измерения ОС: Образцы выдыхаемого воздуха помещают в инжектор газового хроматографа в поток инертного газа-носителя (He). Вещества распределяются по времени удерживания на хроматограмме и ее масс-спектре. Неизвестные соединения в масс-спектре выдыхаемого воздуха используются как основа для сравнения с эталонной базой данных.

Забор маркеров крови для измерения ОС: а) время забора лейкоцитов, СРБ: t1 = 1 образец до операции (до введения анестетика) и t2 = 1 образец через 24 ч. б) время отбора проб малонового диальдегида: t1 = 1 проба до введения анестетика и t2 = 1 проба после наложения швов.

Гистопатологическая оценка: Эксплантированный червеобразный отросток подвергается гистопатологической реконструкции в Институте патологии Медицинского университета Граца. Классификация производится по данным гистологического исследования на 4 степени тяжести (острый очаговый аппендицит, острый гнойный аппендицит, острый гангренозный аппендицит, перфоративный аппендицит).

Забор лейкоцитов, СРБ: проводится в рамках рутинной диагностики в связи с клинической картиной ОА (острый аппендицит).

Отбор проб ЛОС: у каждого пациента берут 2 пробы дыхания во время выдоха, берут у него. Для сбора образцов исследователи используют автоматическое устройство для отбора проб, подключенное непосредственно к капнометру. Эта система работает с микроэкстракцией (NTME) и позволяет автоматически брать пробы альвеолярного воздуха, то есть на плато кривой CO2. Образцы отправляются в Ростокский институт анализа и технологий медицинского дыхания (RoMBAT) в качестве партнера по сотрудничеству. Этот партнер был выбран потому, что он уже имеет большой опыт работы с методологией и исследованиями окислительного стресса во время операций.

Отбор проб малонового диальдегида (МДА): анализ малонового диальдегида проводится в Клиническом институте медицинской и химической лабораторной диагностики Медицинского университета Граца с помощью ультрасовременного метода ГХ-МС. С этой целью пациенту назначается два раза измерения 2 x 400 мкл плазмы с ЭДТА. Второй образец служит только в качестве меры безопасности, если необходимы повторные измерения. Полученные образцы необходимо подвергнуть глубокой заморозке при температуре -80 °С в течение 2 часов. . Впоследствии (не позднее чем на следующий день) образцы должны быть проанализированы в Институте.

Запланированная оценка: Статистические исследования выполняются с помощью SPSS 23.0®. Графическое представление данных выполняется с помощью GraphPad Prism 7®. Чтобы выяснить, различаются ли основные целевые переменные (VOC) в ходе между двумя группами, линейные модели используются для повторных измерений с группой (открытая или лапароскопическая аппендэктомия) в качестве промежуточного фактора субъекта и времени измерения (t1–t6) в качестве внутреннего субъекта. фактор. В случае отклонений от нормального распределения учитываются преобразования. Вторичные мишени, т. е. изменения сывороточных маркеров в моменты времени t1 и t6, сравнивают между 2 группами (открытая и лапароскопическая аппендэктомия) с помощью U-критерия Манна-Уитни (данные не распределяются нормально) или независимого Т-критерия (с нормальным распределение). Для установления связи между ЛОС и сывороточными маркерами окислительного стресса в моменты времени t1 и t6 проводят корреляционный анализ (в зависимости от данных, Пирсона или Спирмена Ро). Все статистические тесты проводятся с двух сторон, и все p-значения интерпретируются чисто экспериментально.