Remodelación de las vías respiratorias durante el tratamiento con mepolizumab (REMOMEPO)

1. Justificación científica e hipótesis:

   Los cambios crónicos en las vías respiratorias, como la hipertrofia/hiperplasia del músculo liso, el engrosamiento de la membrana basal reticular y la hiperplasia de las células caliciformes caracterizan el asma grave. La inflamación crónica, y especialmente la eosinofilia y las citoquinas T2 están involucradas en estos cambios estructurales. El aumento de la capa de ASM se ha asociado con eosinofilia, por ejemplo, pero no con el engrosamiento de la RBM, lo que sugiere que se pueden observar patrones diferenciales de remodelación de acuerdo con los patrones inflamatorios. Omalizumab, una terapia anti IgE, puede reducir algunas características de la remodelación de las vías respiratorias, especialmente la RBM y algunos parámetros relacionados con la ASM. No hay datos disponibles sobre los posibles cambios en la remodelación de las vías respiratorias inducidos por mepolizumab.

   El objetivo del estudio es evaluar los cambios en las vías respiratorias, evaluados mediante biopsias bronquiales, inducidos por mepolizumab en pacientes con asma grave que recibirán el tratamiento como parte de su atención estándar.

   Se propone que todos los pacientes con asma remitidos a la clínica de asma participen en la cohorte COBRA (cohorte nacional francesa de asma). El suero y el ADN se recogen en el momento de la inclusión y cada 6 meses. La broncoscopia con fibra óptica (FOB) se realiza de forma rutinaria como parte de la atención estándar para el asma de difícil a grave en nuestro centro durante muchos años, para evaluar el diagnóstico diferencial y el patrón inflamatorio, ya que el óxido nítrico exhalado fraccionado (FeNO) no se realiza de forma rutinaria en Francia. Se realizan BAL y de 4 a 6 biopsias bronquiales.

2. Población de estudio:

   Pacientes con asma grave, derivados al Centro de Asma Severa de los hospitales de Bichat y Bicetre, que reciben mepolizumab según las recomendaciones francesas (eos >300 mm3 en el año anterior, >2 exacerbaciones, a pesar de la terapia óptima del paso 4-5, incluido el uso diario de esteroides).

3. Diseño y métodos del estudio:

   • Diseño general del estudio Estudio prospectivo, observacional en un Centro de Asma Severa: Hospital Bichat (Prof C.Taillé).

     Se incluirán prospectivamente 40 pacientes durante un periodo de 32 meses.

Este estudio tiene como objetivo evaluar:

• Cambios en el engrosamiento de RBM, en el área de ASM después de 6 meses y 12 meses de tratamiento con mepolizumab
• Cambios en los niveles de BAL de mediadores inflamatorios y de remodelación y de componentes de la MEC después de 6 meses y 12 meses de tratamiento con mepolizumab
• Cambios en el número de secciones de PGP9 en la pared bronquial tras 6 meses y 12 meses de tratamiento con mepolizumab
• Relación entre la respuesta clínica a mepolizumab y los cambios de remodelado tras 6 meses y 12 meses de tratamiento con mepolizumab
• Las características demográficas y clínicas del asma (atopia, nivel de control del asma, FEV1…) estarán disponibles en el momento de la inclusión y el seguimiento, para evaluar el efecto clínico del tratamiento con mepolizumab.

Lo siguiente se realizará en la inclusión, 6 meses y 12 meses después de iniciar mepolizumab:

• evaluación clínica (edad, IMC, estado atópico, rinosinusitis crónica, dosis diarias de esteroides, exacerbaciones…)
• El beneficio de mepolizumab se evaluará de acuerdo con la Evaluación global de la eficacia del tratamiento (GETE) del médico.
• prueba de control del asma
• prueba de función pulmonar (FEV1, FEV1/VC, TLC, RV, pre/post salbutamol)
• FOB con BAL y 6 biopsias a la inclusión, 6 meses y 12 meses

• Análisis de sangre para recuento de eosinófilos y conservación de suero.

  • Grupos/brazos de estudio Grupo 1 (prospectivo): pacientes que inician un tratamiento con mepolizumab. Grupo 2 (retrospectivo): para evaluar los cambios en las vías respiratorias que pueden ocurrir "espontáneamente" durante un período de 12 meses, un "grupo histórico" retrospectivo de pacientes incluidos en el estudio ASMATHERM anterior a los que se les realizaron 2 series de biopsias y LBA en un período de 6 a 12 meses. intervalo de un mes, sin exposición a mepolizumab y sin cambio en su tratamiento durante este intervalo, se estudiará como grupo control. Los datos clínicos están disponibles en el momento de la inclusión y después de 12 meses.
  • Principales pruebas o procedimientos Todas las biopsias, BAL y análisis de suero se realizarán en la unidad de laboratorio UMR1152 (Jefe: Dra. Marina Pretolani).

Las biopsias se fijan en formaldehído y se procesan en cera de parafina para estudios inmunohistoquímicos (IHC) y morfométricos. Una biopsia se almacenará a -80 °C para realizar más análisis de RNAseq.

Se medirá el engrosamiento de RBM (morfometría), el área de ASM y la tasa de proliferación de células de ASM (inmunotinción PCNA). La tinción de PGP9 puede evaluar el número de nervios en la pared bronquial.

El número de células inflamatorias (eosinófilos, neutrófilos, mastocitos, linfocitos T evaluados respectivamente por MBP, elastasa, triptasa, expresión de CD4) y ​​secciones vasculares también se enumerarán después de IHC. Se describirá la localización de los eosinófilos en las vías respiratorias.

Se utilizarán preparaciones de citospina de sedimentos de células BAL para evaluar la proporción de eosinófilos y neutrófilos.

Paralelamente, se medirán los niveles de diferentes mediadores proinflamatorios y remodeladores en alícuotas de BAL concentradas x 10, mediante ensayos específicos Elisa y Luminex.

• Plan de prueba

V0: visita de selección

V1: visita de inclusión

• evaluación clinica
• Prueba de control del asma
• Prueba de función pulmonar
• Fibroscopia de fibra óptica con BAL y biopsias bronquiales (tenga en cuenta que si ya se realizó una fibroscopia de fibra óptica con BAL y biopsias bronquiales en el mes anterior a la inclusión, no se repetirá en la inclusión y las muestras de tejido y BAL se recuperarán para su análisis )
• Muestra de sangre
• Se administra el primer tratamiento con Mepolizumab en el hospital.
• Capacitación de inyección del paciente si se elige esta prescripción
• Prescripción de Mepolizumab, administrada en casa durante los próximos 6 meses

V2: visita de 6 meses

• Evaluación de la respuesta clínica por GETE y ACT, evaluación clínica
• Prueba de función pulmonar
• Fibroscopia de fibra óptica con BAL y biopsias bronquiales
• Muestra de sangre
• Si respondedores, continuación del tratamiento con mepolizumab
• Evaluación del cumplimiento (expediente firmado por la enfermera o el paciente después de cada inyección)

V3: visita de 12 meses

• evaluación de la respuesta clínica por GETE y ACT, evaluación clínica
• Prueba de función pulmonar
• Fibroscopia de fibra óptica con BAL y biopsias bronquiales
• Muestra de sangre
• Evaluación del cumplimiento (expediente firmado por la enfermera o el paciente después de cada inyección)