CD133+-kantasolujen intrahepaattinen uudelleenfuusio kirroosipotilailla (Cirrhosis133)

OTSIKKO: Vaiheen I tutkimus erittäin puhdistettujen CD133+-kantasolujen intrahepaattisesta reinfuusiosta potilailla, joilla on loppuvaiheen maksasairaus.

PÄÄTUTKIJA: Roberto M. Lemoli, MD APUTUTKIJAT: Pietro Andreone, MD, Francesca Bonifazi, MD; Lucia Catani, BS; Antonia D'Errico, MD; Michelangelo Fiorentino, MD; Valeria Giudice, MD; Annagiulia Gramenzi, MD; Elisabetta Loggi, BS; Stefania Lorenzini, MD; Francesco Losinno, MD; Maria Rosa Motta, BS; Simonetta Rizzi, BS; Cristina Rossi, MD.

OPISTOKESKUS: Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna - Italia, Unità Operativa di Ematologia yhteistyössä:

Unità Operativa di Semeiotica Medica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patologica Unità Operativa di Immunoematologia e Trasfusionale Unità Operativa di Radiologia

KLIININEN VAIHE: Vaihe I

TAVOITE(T): Ensisijainen:

Arvioida lisääntyvien autologisten erittäin puhdistettujen CD133+-kantasolujen (SC) intrahepaattisen reinfuusion turvallisuutta potilaille, joilla on loppuvaiheen maksasairaus. CD133+ SC:t kerätään etukäteen ja kylmäsäilytetään granulosyyttipesäkkeitä stimuloivalla tekijällä (G-CSF) mobilisaation ja leukafereesin jälkeen. Turvallisuus arvioidaan haittatapahtuman ilmaantuvuudena (luokitus WHO:n mukaan) ja kliinisesti merkittävinä poikkeavina laboratorioarvoina SC:n uudelleeninfuusion jälkeen.

Toissijainen:

Arvioida sellaisten autologisten CD133+-solujen immunomagneettisen valinnan toteutettavuutta, jotka on kerätty leukafereesillä sellaisten potilaiden ääreisverestä (PB), joilla on aiemmin G-CSF:llä mobilisoitunut loppuvaiheen maksasairaus.

Arvioida erittäin puhdistettujen CD133+-solujen intrahepaattisen reinfuusion vaikutuksia potilaiden maksan jäännöstoimintoihin. Erityisesti seurataan seuraavia arvoja: proteiinien synteesi (albumiini), hyytymistekijöiden synteesi (protrombiiniaika, INR, fibrinogeeni, antitrombiini III, tromboplastiiniaika), bilirubinemia, proliferatiivinen aktiivisuus, biosynteesikapasiteetti (kolesteroli, pseudokoliiniesteraasi) .

Arvioida hoidon vaikutuksia valittujen sytokiinien tuotantoon G-CSF:n annon aikana ja erittäin puhdistettujen CD133+ SC:iden maksansisäisen uudelleeninfuusion jälkeen potilaille, joilla on loppuvaiheen maksasairaus.

SUUNNITTELU:

Kaksitoista potilasta otetaan mukaan 18–24 kuukauden kuluessa annoksenmääritysvaiheeseen. Tutkimus on suunniteltu seuraavasti: aluksi G-CSF (Lenograstim, Aventis Pharma tai Filgrastim, Amgen) 7,5 µg/kg/b.i.d. annetaan ihonalaisesti (sc) päivästä 1 siihen asti, kun perifeerisen veren kantasolujen (PBSC) keräys on saatu päätökseen. Luuytimestä (BM) peräisin olevan PBSC:n kerääminen alkaa päivänä + 4 vain, jos CD133+-solujen pitoisuus on > 8/ul, ja sitä jatketaan, kunnes kerätään kohdesoluannos: 0,5 x 106 CD133+-solua/kg. 2 ensimmäistä potilasryhmää; 1 x 106 CD133+-solua/kg kohortille 3 ja 2 x 106 CD133+-solua/kg kohortille 4 (katso määritelmät alla). PB-mononukleaarisoluja, jotka on saatu mobilisoidusta standarditilavuuden leukafereesista, inkuboidaan Macin kolloidisten superparamagneettisten CD133-mikrohelmien kanssa (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Saksa) ja CliniMacs-laitetta käytetään CD133+-solujen positiiviseen valintaan hyvän valmistustavan (GMP) olosuhteissa ( katso liitteet). Kryosäilytys ja varastointi nestetypessä suoritetaan standardimenettelyjen mukaisesti (katso liitteet).

Vähintään 4 viikkoa SC-mobilisaation ja keräämisen jälkeen korkeintaan 40 ml yksisoluista suspensiota erittäin puhtaista autologisista CD133+-soluista, jotka on saatu nopean sulatuksen jälkeen, infusoidaan maksavaltimon läpi transfemoraalisella tai transbrakiaalisella arteriografialla. Infuusioaika on alle 15 ml/min trombien muodostumisen välttämiseksi. Koko toimenpide suoritetaan anestesialogisessa valvonnassa. Maksansisäistä antoreittiä pidetään välttämättömänä, jotta vältetään CD133+-solujen mahdollinen massiivinen pernavangitseminen tavanomaisen laskimonsisäisen reinfuusion jälkeen kirroosipotilailla. 24 tunnin kuluessa toimenpiteestä tehdään keliakian vartalon doppler-ultraäänitutkimus suoliliepeen alueen tromboottisten tapahtumien sulkemiseksi pois.

Modifioidun Fibonaccin lisäyssäännön mukaan erittäin puhdistettuja G-CSF-mobilisoituja CD133+-soluja annetaan potilaille alkaen 5x104/kg potilaan painosta ja niitä lisätään joka kolmas potilas. Suurin infusoitu soluannos on 1 x 106/kg (katso alla). Lenograstiimia tai filgrastimia annoksella 5 µg/kg/vrk annetaan sc 3 päivän ajan SC:iden uudelleeninfuusion jälkeen (päivä 0 - päivä +2) niiden laajentamiseksi ja uudelleeninfusoitujen solujen selektiivisen proliferatiivisen edun indusoimiseksi in vivo.

POTILASMÄÄRÄ JA AIKAAIKA: 12 potilasta otetaan mukaan 18–24 kuukauden kuluessa annoksenmääritysvaiheeseen.

DIAGNOOSI- JA SISÄLTÖPERUSTEET: Allekirjoitettu tietoinen suostumus. Ikä >18. Karnofsky-pisteet > 70 % tai WHO <1. Riittävä munuaisten (seerumin kreatiniini < 2 mg/dl) ja keuhkojen (Sat O2 > 96 %) toiminta. Pitkälle edenneen, loppuvaiheen maksasairauden diagnoosi, joka määritellään Mayo-mallilla loppuvaiheen maksasairauden (MELD) pistemäärälle 17–25.

Tutkimukseen otetaan potilaita, joilla on seuraavat maksasairauden etiologiat: krooninen virushepatiitti B, krooninen virushepatiitti C, krooninen virushepatiitti D, alkoholikirroosi, primaarinen sklerosoiva kolangiitti, primaarinen sappikirroosi, Wilsonin tauti, geneettinen hemokromatoosi tai raudan ylikuormitus kirroosi, alkoholittomasta steatohepatiitista johtuva kirroosi. Potilaiden, joilla on alkoholiperäinen maksakirroosi, tulee lopettaa aktiivinen alkoholinkäyttö voidakseen osallistua tutkimukseen.

Kelpoisuus ortotooppiseen maksansiirtoon (OLT) ei ole kliiniseen tutkimukseen osallistumisen vasta-aihe. Potilaita, jotka ovat jonotuslistalla OLT-siirtoon, ei poisteta ja heidät siirretään heti, kun sopiva luovuttaja on saatavilla. Heidän MELD-pisteensä säilyy aiemman SC-infuusion kirjaamana, jos kokeellisen menettelyn jälkeen tilanne paranee.

Kirroosiin liittyvät oireet, kuten askites, perifeerinen turvotus, toistuva maha-suolikanavan verenvuoto, toistuva enkefalopatia, eivät ole merkittäviä vasta-aiheita tutkimukseen sisällyttämiselle. Potilaita voidaan pitää kelpoisina, kun ne ovat kliinisesti stabiileja.

POISKIELTÄMISKRITEERIT: HIV-positiivisuus. Raskaana olevat tai imettävät naiset. Nykyinen hallitsematon infektio. Väliaikainen elinvaurio. Maksakarsinooman diagnoosi. Täydellinen portaalitromboosi. Vaikea hyytymistoiminnan heikkeneminen (PT < 30 %, INR> 2,5, verihiutaleet < 40 x 109/l), mikä olisi vasta-aiheinen arteriografialle. Asteen IV splenomegalia.

Budd-Chiarin oireyhtymä, johon liittyy sovrahepaattinen laskimotromboosi ja tuntemattoman alkuperän kirroosi, ei sisälly tutkimukseen.