Munasarjasyöpään liittyvien vasta-aineiden (CAAb) verikoe

Yleistä tietoa

Vasta-aineet ovat spesifinen vaste mille tahansa "vieraalle" antigeenille, ja ne ovat yleensä havaittavissa seerumista 5-7 päivän kuluessa sille altistumisesta. On kuitenkin tapauksia, joissa spesifinen immuunivaste heikkenee, kuten kasvaimen tapauksessa. Toistaiseksi ei ole raportoitu seerumin vasta-aineista, jotka liittyvät syöpään. Joissakin kasvaimissa on kirurgisesti poistettuina ja tutkittuina havaittu sekä T-lymfosyyttien infiltraatteja että kasvainsoluihin sitoutuneita vasta-aineita. Näiden vasta-aineiden (ja muiden spesifisten immuunivasteiden) oletetaan muodostuvan kasvaimen kasvun myöhemmissä vaiheissa, mutta näissäkään tapauksissa seerumin vasta-aineita ei ole raportoitu (todennäköisesti siksi, että ne enimmäkseen "absorboivat" kasvainmassan) .

Koska normaalin solun mutaatiot, jotka johtavat pahanlaatuiseen solumassaan, sisältävät muutoksia solujen rakenteessa ja toiminnassa, voidaan olettaa, että immuunijärjestelmä on tunnistanut osan näistä muutoksista antigeenisiksi determinantteiksi, joita vastaan ​​tulisi reagoida; jos näin on, niin kasvaimen aiheuttama suppressio olisi syy vasta-aineiden puutteeseen.

Jos tämä immuunisuppressio voitaisiin voittaa in vitro, se voi johtaa vasta-aineiden muodostumiseen, joita ei voida havaita seerumista (kutsumme tätä prosessia simmunologiaksi). Tunnistamalla rakenteet, joihin vasta-aineet sitoutuvat, ja etsimällä korrelaatiota kasvainpatologian ja vasta-aineiden spesifisyyden välillä - voidaan saada lisätietoa kasvaimesta - verikokeen avulla.

Tuleva CAAb-testi

Cimmunologiaan perustuva testi koostuu in vitro -stimulaatiovaiheesta ja vasta-aineen havaitsemisvaiheesta.

Määritystä käytetään syöpään liittyvien vasta-aineiden löytämiseen munasarjasyöpäpotilailta.

Munasarjasyöpään liittyvien vasta-aineiden tunnistaminen voisi tarjota kliinikolle lisää immunologisia ja antigeenisiä tietoja potilaan tilasta tai lääketieteellisestä tilasta.

Cimmunology-prosessi koostuu veren keräys- ja käsittelyvaiheesta ja inkubaatiosta (erityisessä stimulaatioputkessa nimeltä CimTube) kosteassa, 37 oC:n inkubaattorissa, jossa on 5 % CO2:ta.

Testi spesifisten vasta-aineiden havaitsemiseksi on ELISA-pohjainen ja sisältää erilaisia ​​mahdollisesti kiinnostavia antigeenejä.

Potilastiedostosta kerättävät asiaankuuluvat lääketieteelliset ja patologiset tiedot mahdollistavat testitulosten tarkemman analyysin.

OPINTOJEN TAVOITTEET

Ensisijainen tavoite:

• Etsi syöpään liittyviä vasta-aineita

Tehokkuus:

• Sen määrittämiseksi, pystyykö Cimmunology-prosessi johtaa in vitro -vasta-aineiden tuotantoon, ELISA-määritysten kyky havaita mikä tahansa näistä vasta-aineista ja määrittää ELISA-tulosten ja potilaan kliinisen/patologisen tilan välinen suhde. CAAb-testitulosten tilastollinen merkitsevyys määritetään.

TUTKIMUSPERUSTEET JA POTILASVALINTA

Munasarjasyöpäpotilaat

Tutkimuspopulaatio sisältää henkilöt, joita epäillään munasarjasyövästä ja joita tullaan hoitamaan ennen leikkausta tai muuta syövänvastaista hoitoa. Kliiniseen epäilyyn sisältyy jokin seuraavista: Lantion massa (lantion tutkimuksella tai muilla kuvantamistekniikoilla) tai korkea CA-125-taso vaihdevuodet ohittaneilla naisilla, askites tai satunnainen kaukaisen etäpesäkkeen löytäminen. Lopullinen analyysi tehdään vain patologian osalta.

Kontrolliryhmä

Kontrolliryhmään kuuluvat potilaat gynekologian osastolla (tai missä tahansa muussa asianmukaisessa hoitoyksikössä), joilla ei ole aiempaa syöpähistoriaa.

OPINTUSUUNNITTELU

Yleiskuvaus

Tämä tutkimus on vertaileva havainnollinen kaksihaarainen tutkimus, johon osallistuvat kaikki peräkkäiset munasarjasyöpäpotilaat tutkimuksen keston aikana ja ikään sopivat kontrollihenkilöt. Tutkimuksen tarkoituksena on arvioida CAAb-testin tehokkuutta munasarjasyöpään liittyvien vasta-aineiden havaitsemisessa.

Koehenkilöt seulotaan mahdollisen osallistumisen suhteen tutkimukseen mukaanotto- ja poissulkemiskriteerien mukaisesti. Rekrytoituja potilaita pyydetään allekirjoittamaan tietoinen suostumuslomake.

Potilastietoihin sisältyvät potilaiden kliinisen ja patologisen tilan parametrit, CimTube-viljelyvaiheen tulokset ja koepakkaukset. CAAb-testin tehokkuutta arvioidaan arvioimalla käytetyn CAAb-testin tilastollinen merkitsevyys.

Tutkimuksessa hyödynnetään kolmivaiheista ryhmäperäistä suunnittelua, jossa on kaksi väli- ja yksi loppuanalyysi käyttäen O'Brian-Flemingin rajoja. Tiedonkeruu voidaan lopettaa ensimmäisen tai toisen välianalyysin jälkeen, jos rajat saavutetaan. Tämä voisi vähentää merkittävästi potilaiden määrää ja tutkimuksen kestoa, samalla kun vain hieman lisäisi potilaiden enimmäismäärää. (Katso näytteen kokoa koskevat näkökohdat alla).

Käytämme syöpä- ja kontrollipotilaiden välistä suhdetta 1:2 vähentääksemme tarvittavaa syöpäpotilaiden määrää, mikä on tärkein rajoittava tekijä.

Toimeksiantaja tekee välianalyysin munasarjasyöpätapausten ensimmäisen kolmanneksen ja toisen kolmanneksen jälkeen, ja otoskoko lasketaan uudelleen saatujen arvioiden mukaan kokeen keskiarvosta ja varianssista kahdessa ryhmässä.

Koska tähän mennessä kerätyt tiedot olivat peräisin vain epiteelisolukarsinoomasta, tutkimuksemme keskittyy myös epiteelisolusyöpään. Siksi strooma- ja sukusolukasvaimet, jotka muodostavat alle 10 % OC-tapauksista, hylätään lopullisen patologian analyysin perusteella. Lisäksi noin 10 % naisista, joille tehdään OC-leikkaus, on muita kuin munasarjatapauksia, jotka erehtyivät luultavasti munasarjasyöpään. Nämä hylätään myös lopullisen patologian perusteella.

Siksi tutkimukseen otetaan vähintään 60 potilasta, jotta saadaan tilastollisesti ennustettu tarvittava 50 munasarjasyöpänäytteen näytekoko. Kontrolliryhmä on 120 potilasta.

Tutkimusmenettely

Sairaalassa:

Ensin tunnistetun tutkimuspotilaan on allekirjoitettava tietoinen suostumuslomake ja täytettävä kelpoisuuslomake; molempien tulee olla viivakoodattuja.

Potilaan demografiset ja kliiniset tiedot, jotka on hankittu potilaan lääketieteellisistä tiedostoista, mukaan lukien ikä, alkuperämaa, sairaushistoria ja munasarjasyövän diagnostiseen arviointiin johtaneiden testien tulokset (ei relevanttia kontrolliryhmässä), tallennetaan asianmukaiseen palkkiin. -koodatut, esitutkintoa edeltävät tapausraporttilomakkeet. Raportit ovat joko sähköisiä (omistettu ja suojattu Internet-sivusto) tai paperiversioina. Paperikopiot asiakirjoista säilytetään osastolla. Tutkimus on anonyymi ja osasto säilyttää potilaan nimen paljastamatta sitä tutkijoille ja tutkimuksen rahoittajalle.

Tutkimussponsori toimittaa putket ja viivakooditarrat seurantaa varten. Lääkäri/sairaanhoitaja/flebotomi kerää kolme hepariinityhjiöputkea (20-24 ml), merkitsee ne (viivakoodilla) ja täyttää ensimmäisen vaiheen "Näyteseurantalomakkeessa" (SFF). Putket, joissa on verta, pakataan kaksoissuljettuun astiaan (sponsorin toimittaa). Osasto ilmoittaa nimetylle lähettäjälle ottamaan veren 1 tunnin kuluessa siitä, kun se on otettu.

Jokaiselle OC-näytteelle rekrytoidaan myös kaksi ikäsovitettua kontrollia (+/- 3 vuotta).

Kuljetus sairaalasta Handling Labiin:

Veri kuljetetaan laboratorioon huoneenlämmössä (18-250C) asiaa koskevien määräysten mukaisesti. Kuljetusaika on enintään 6 tuntia. Ajat kirjataan SFF:ään.

Verenkäsittelylaboratoriossa:

Verenkäsittelylaboratorio (sijaitsee enintään 200 km:n päässä keräyspaikasta) eristää PBMC:t (perifeerisen veren mononukleaariset solut) ja sijoittaa ne Cimmunology-viljelmään 20 tunnin kuluessa näytteenottoajasta (täyttöaika SFF:ssä).

Lab Discoveries toimittaa yksityiskohtaisen protokollan ja Cimmunology-alustan osallistuville laboratorioille (tarvittaessa). Kaikki Israelin sairaalat lähettävät verinäytteet Lab Discoveriesin laboratorioon. Viljelyvaiheen jälkeen viljelyneste kerätään ja jäädytetään -80 °C:ssa asianmukaisesti leimatuissa erissä. Pakastetut näytteet lähetetään diagnostiseen laboratorioon vasta-ainetutkimuksia varten.

Diagnostisessa laboratoriossa:

Vasta-ainetestit, kuten ELISA, valmistetaan käyttämällä erilaisia ​​antigeenejä. Näytteistä testataan vaste kahdelle aiemmin tunnistetulle antigeenille ja muiden uusien antigeenien varalta. Kaikki tiedot tallennetaan pysyvästi suoraan erilliselle tietokoneelle. Jokaisen näytteen kaikki vasta-ainetulokset tallennetaan koodattuun potilastiedostoon. Tuloksia analysoi syöpäpopulaatiotutkimuksiin perehtynyt tilastotieteilijä.

Sairaalassa leikkauksen jälkeen:

2-3 viikkoa leikkauksen jälkeen CRO kerää potilaan tiedostoista patologian laboratorion tulokset ja kaikki muut olennaiset tiedot leikkauksen aikana poistetun kasvaimen luonteesta ja tilasta. Nämä tulokset tallennetaan omistetulle ja suojatulle Internet-sivustolle, ja painettu viivakoodattu CRF-OC säilytetään osastolla.

TILASTOTIEDOT

Tämä tutkimus on vertaileva havainnollinen kaksihaarainen tutkimus, jossa on mukana kaikki peräkkäiset munasarjasyöpäpotilaat tutkimuksen keston aikana ja ikään sopivat kontrollihenkilöt. Tutkimuksen päätarkoituksena on arvioida CAAb-testien tehokkuutta. Tämä tehokkuus mitataan Fisherin etäisyydellä (kutsutaan usein "vaikutuksen kooksi") d, joka määritellään seuraavasti: d = |m1-m2|/2 Missä m1 on testin keskiarvo kontrollissa, m2 on keskiarvo kontrolleissa. munasarjasyöpäpotilaat, |m1-m2| tarkoittaa eron itseisarvoa (m1-m2), ja s on yhteinen arvio kokeen jakauman keskihajonnasta yhdessä ryhmässä (kontrolli- tai munasarjasyöpä).

Tilastollinen hypoteesi

Nollahypoteesi: OC:n läsnäolon tai puuttumisen ja CAAb:n välillä ei ole yhteyttä, eli d=0

Vaihtoehtoinen hypoteesi: CAAb-odotus syöpäpopulaatiossa poikkeaa kontrollipopulaatiosta, eli m1 ei ole yhtä suuri kuin m2. Koska eron etumerkki ei ole tärkeä, testi on kaksipuolinen.

Yleisiä huomioita

Aiempien tulostemme mukaan oletamme, että

1. Testitulosten jakaumat kussakin ryhmässä ovat lähellä normaalia tai ne voidaan muuntaa normaaliksi log-muunnoksella.
2. Jakaumien varianssi molemmissa ryhmissä on suunnilleen yhtä suuri
3. Koska tämä on pilottitutkimus, pidämme tuloksia merkittävinä, jos kaksipuolinen p-arvo on 0,1 tai vähemmän. Sidottu 0,1 valittiin 0,05:n sijaan vähentämään joidenkin mahdollisesti informatiivisten testien satunnaisen poissulkemisen mahdollisuuksia.

Päätettäessä tutkimuksen jatkamisesta ei ole odotettavissa korjausta useisiin vertailuihin. Tulokset esitetään kuitenkin ilman ja korjauksen kanssa käyttämällä Benjamini & Hochbergin FDR-lähestymistapaa (Benjamini, Hochberg 1995).

Kun luottamusrajat ovat tarkoituksenmukaisia, luottamustaso on 95 %.

Otoskoko

Otoskoko laskettiin käyttämällä asiaankuuluvia tietoja edellisestä peptideistä P3- ja P1-tutkimuksesta sekä munasarjasyövästä. Kirjallisuudessa ei ole tietoa syöpään liittyvistä vasta-aineista.

Otoskoko lasketaan kolmivaiheiselle peräkkäiselle ryhmäsuunnittelulle, jonka kaksipuolinen merkitsevyys on 0,1 ja 0,05, teho 0,8, syövän osalta: kontrollisuhde 1:2, D 0,5. Laskelmissa käytettiin otoskoon standardikaavoja, joita tarvitaan kahden itsenäisen ryhmän keskiarvojen vertailuun t-testillä. O'Bienin ja Flemingin testin ryhmäjaksoisen menettelyn korjaus lisää lukuja 1,017:llä ja 1,027:llä merkitsevyysarvoille 0,05 ja 0,1, mikä on merkityksetöntä otoskokoillemme. (katso C. Jennison, B.W. Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 taulukko 2.4).

Laskelmat tehtiin NCSS-PASS-ohjelmistolla.

Päätepisteen arviointi

Tehokkuusanalyysi

Laskettu D välillä 0,3 - 0,5 merkitsee testin tehottomaksi käytettäväksi yksinään. Se voi kuitenkin olla tärkeä yhdessä muiden testien kanssa osana monimuuttujatestimenettelyä. Testit, joissa d < 0,3, katsotaan tehottomiksi. Testi tai testien yhdistelmä, jossa d > 0,5, merkitsee CAAb-testin tehokkaaksi.