Bloedtest voor ovariumkanker-geassocieerde antilichamen (CAAb)

Algemene informatie

Antilichamen zijn een specifieke reactie op elk "vreemd" antigeen en zijn meestal binnen 5-7 dagen na de eerste blootstelling aan het serum detecteerbaar. Er zijn echter enkele gevallen waarin de specifieke immuunrespons wordt onderdrukt, zoals in het geval van een tumor. Tot op heden zijn er geen rapporten over serumantilichamen die in verband worden gebracht met kanker. Van sommige tumoren is gevonden dat ze zowel infiltraten van T-lymfocyten als antilichamen die aan de tumorcellen zijn gebonden, wanneer ze operatief zijn verwijderd en bestudeerd. Aangenomen wordt dat deze antilichamen (en andere specifieke immuunresponsen) in latere stadia van de tumorgroei worden gevormd, maar zelfs in die gevallen zijn er geen serumantilichamen gerapporteerd (waarschijnlijk omdat ze grotendeels worden "geabsorbeerd" door de tumormassa) .

Aangezien de mutaties van een normale cel die leiden tot een kwaadaardige celmassa veranderingen in de structuur en functie van de cellen met zich meebrengen, kan worden aangenomen dat het immuunsysteem enkele van deze veranderingen heeft herkend als antigene determinanten waartegen moet worden gereageerd; zo ja, dan zou de onderdrukking veroorzaakt door de tumor de reden zijn voor het ontbreken van antistoffen.

Als deze immuunsuppressie in vitro zou kunnen worden overwonnen, zou dit kunnen leiden tot de vorming van antilichamen die niet detecteerbaar zijn in het serum (we noemen dit proces Cimmunologie). Het identificeren van de structuren waaraan de antilichamen binden, en het zoeken naar een correlatie tussen de tumorpathologie en de specificiteit van de antilichamen - zou aanvullende informatie over de tumor kunnen opleveren - via een bloedtest.

Toekomstige CAAb-test

De op Cimmunologie gebaseerde test bestaat uit een in vitro stimulatiestap en een antilichaamdetectiestap.

De test zal worden gebruikt om met kanker geassocieerde antilichamen te vinden bij patiënten met eierstokkanker.

Identificatie van met eierstokkanker geassocieerde antilichamen zou de arts kunnen voorzien van aanvullende immunologische en antigene informatie over de toestand of medische status van de patiënt.

Het Cimmunology-proces bestaat uit een bloedafname- en verwerkingsstap en een incubatieperiode (in een speciale stimulatiebuis genaamd CimTube) in een vochtige incubator van 37oC met 5% CO2.

De test voor de detectie van specifieke antilichamen is gebaseerd op ELISA en omvat verschillende potentieel interessante antigenen.

De relevante medische en pathologische informatie, te verzamelen uit het dossier van de patiënt, zal een meer gedetailleerde analyse van de testresultaten mogelijk maken.

STUDIE DOELSTELLINGEN

Hoofddoel:

• Om kanker-geassocieerde antilichamen te vinden

Effectiviteit:

• Om het vermogen van het Cimmunology-proces te bepalen om te leiden tot in vitro antilichaamproductie, het vermogen van de ELISA-assays om een ​​van die antilichamen te detecteren, en om de relatie vast te stellen tussen de ELISA-resultaten en de klinische/pathologische status van de patiënt. De statistische significantie van de CAAb-testresultaten wordt bepaald.

STUDIEPOPULATIES EN PATIËNTSELECTIE

Patiënten met eierstokkanker

De onderzoekspopulatie zal proefpersonen omvatten waarvan wordt vermoed dat ze worden behandeld voor eierstokkanker, voorafgaand aan een chirurgische ingreep of een andere behandeling tegen kanker. De klinische verdenking omvat een van de volgende: bekkenmassa (door bekkenonderzoek of andere beeldvormende technieken), of hoge CA-125-spiegels bij postmenopauzale vrouwen, ascites, of als gevolg van het incidenteel vinden van metastasen op afstand. De uiteindelijke analyse zal alleen worden gedaan met betrekking tot de pathologie.

Controlegroep

De controlegroep bestaat uit patiënten van de afdeling gynaecologie (of een andere geschikte zorgeenheid) zonder voorgeschiedenis van kanker.

STUDIE ONTWERP

Algemene beschrijving

De huidige studie is een vergelijkende observationele studie met twee armen, waarbij alle opeenvolgende patiënten met eierstokkanker tijdens de duur van de studie betrokken waren, en op leeftijd afgestemde controlepersonen. Het doel van de studie is om de effectiviteit van de CAAb-test te beoordelen bij het opsporen van met eierstokkanker geassocieerde antilichamen.

Proefpersonen zullen worden gescreend op mogelijke deelname aan het onderzoek, volgens de inclusie- en exclusiecriteria. Patiënten die worden geworven, zullen worden gevraagd om een ​​formulier voor geïnformeerde toestemming te ondertekenen.

De gegevens over de patiënten omvatten parameters van de klinische en pathologische toestand van de patiënten, resultaten van de CimTube-kweekstap en de experimentele kits. De effectiviteit van de CAAb-test zal worden beoordeeld door de statistische significantie van de gebruikte CAAb-test te evalueren.

De studie zal gebruik maken van een driestaps groepssequentieel ontwerp met twee tussentijdse analyses en één eindanalyse met gebruikmaking van de O'Brian-Fleming'-grenzen. De dataverzameling kan worden gestopt na de eerste of tweede tussentijdse analyse als de grenzen zijn bereikt. Dit zou het aantal patiënten en de tijd van het onderzoek aanzienlijk kunnen verminderen, terwijl het maximale aantal patiënten slechts licht zou kunnen toenemen. (Zie overwegingen voor de grootte van de steekproef hieronder).

We zullen een verhouding van 1:2 gebruiken tussen kanker- en controlepatiënten om het noodzakelijke aantal kankerpatiënten te verminderen, wat de belangrijkste beperkende factor is.

De sponsor voert een tussentijdse analyse uit na het eerste derde en tweede derde van de gevallen van eierstokkanker en de steekproefomvang wordt herberekend op basis van de verkregen schattingen van het gemiddelde en de variantie van de test in de twee groepen.

Aangezien de tot nu toe verzamelde gegevens alleen van epitheelcelcarcinoom waren, zal ons onderzoek zich ook richten op epitheelcelcarcinoom. Daarom zullen stroma- en kiemceltumoren, die minder dan 10% van de OC-gevallen uitmaken, worden geschrapt op basis van de uiteindelijke pathologieanalyse. Bovendien omvatten niet-ovariumgevallen die werden aangezien voor ovariumcarcinoom ongeveer 10% van de vrouwen die een operatie voor OC ondergingen. Deze zullen ook worden geschrapt op basis van de uiteindelijke pathologie.

Daarom zullen ten minste 60 patiënten in het onderzoek worden opgenomen om de statistisch geprojecteerde benodigde steekproefomvang van 50 monsters van eierstokkanker te verkrijgen. De controlegroep zal uit 120 patiënten bestaan.

Studie Procedure

In het ziekenhuis:

Eerst moet een geïdentificeerde studiepatiënt een formulier voor geïnformeerde toestemming ondertekenen en haar geschiktheidsformulier invullen; beide moeten een streepjescode hebben.

Demografische en klinische informatie van de patiënt verkregen uit het medisch dossier van de patiënt, inclusief leeftijd, land van herkomst, medische geschiedenis en resultaten van uitgevoerde tests die hebben geleid tot de diagnostische evaluatie van eierstokkanker (niet relevant in de controlegroep) zullen worden geregistreerd op de daarvoor bestemde, balk -gecodeerde, pre-studie case report formulieren. De rapporten zullen elektronisch zijn (een speciale en beveiligde internetsite) of op papier. Op de afdeling wordt een papieren exemplaar bewaard. De studie is anoniem en de afdeling zal de naam van de patiënt behouden zonder deze bekend te maken aan onderzoekers en aan de studiesponsor.

De studiesponsor zorgt voor de buisjes en de streepjescodelabels voor monitoring. De arts/verpleegkundige/flebotomist verzamelt drie heparine-vacuümbuisjes (20-24 ml), labelt ze (streepjescode) en vult de eerste stap in het "Sample follow-up form" (SFF). De buisjes met het bloed worden verpakt in een dubbel gesealde container (wordt verstrekt door de sponsor). De afdeling zal de aangewezen verzender op de hoogte brengen om het bloed binnen 1 uur vanaf het moment dat het is afgenomen op te halen.

Voor elke OC-steekproef zullen ook twee leeftijdsgematchte controles (+/- 3 jaar) worden aangeworven.

Vervoer van het ziekenhuis naar het Handling Lab:

Het bloed wordt volgens de geldende voorschriften op kamertemperatuur (18-25°C) naar het laboratorium vervoerd. De transporttijd is niet meer dan 6 uur. Tijden op te nemen in SFF.

In het bloedbehandelingslaboratorium:

Het bloedbehandelingslaboratorium (niet verder dan 200 km van de verzamelplaats) zal PBMC (perifere mononucleaire bloedcellen) isoleren en ze binnen 20 uur na het bemonsteringstijdstip (vultijd in SFF) in Cimmunology-kweek plaatsen.

Het gedetailleerde protocol en de Cimmunology-media zullen door Lab Discoveries worden verstrekt aan de deelnemende laboratoria (indien van toepassing). Alle ziekenhuizen in Israël sturen de bloedmonsters naar het laboratorium van Lab Discoveries. Na de kweekstap wordt de kweekvloeistof verzameld en ingevroren bij -80°C, in correct gelabelde aliquots. De ingevroren monsters worden naar het diagnostisch laboratorium gestuurd voor antilichaamtesten.

In het diagnostisch laboratorium:

Antilichaamtesten, zoals ELISA, zullen worden bereid met behulp van verschillende antigenen. De monsters zullen worden getest op respons op de twee antigenen die in het verleden zijn geïdentificeerd, en op aanvullende nieuwe. Alle gegevens worden permanent rechtstreeks op een speciale computer geregistreerd. Voor elk monster worden alle antilichaamresultaten in het gecodeerde patiëntendossier gezet. De resultaten zullen worden geanalyseerd door een statisticus met expertise in kankerpopulatiestudies.

In het ziekenhuis, na de operatie:

2-3 weken na de operatie verzamelt de CRO uit het dossier van de patiënt de resultaten van het pathologielaboratorium en alle andere relevante informatie over de aard en toestand van de tumor die tijdens de operatie werd verwijderd. Deze resultaten worden geregistreerd op de speciale en beveiligde internetsite en een gedrukte CRF-OC met streepjescode wordt op de afdeling bewaard.

STATISTISCHE OVERWEGINGEN

De huidige studie is een vergelijkende observationele studie met twee armen, waarbij alle opeenvolgende patiënten met eierstokkanker tijdens de duur van de studie betrokken waren, en op leeftijd afgestemde controlepersonen. Het belangrijkste doel van de studie is om de effectiviteit van de CAAb-testen te beoordelen. Deze effectiviteit wordt gemeten door de Fisher'-afstand (vaak "effectgrootte" genoemd) d gedefinieerd als d = |m1-m2|/2 Waarbij m1 de gemiddelde waarde is van de test bij de controles, is m2 de gemiddelde waarde bij de patiënten met eierstokkanker, |m1-m2| geeft de absolute waarde van het verschil aan (m1-m2), en s is de algemene schatting van de standaarddeviatie van de verdeling van de test in één groep (controle of eierstokkanker).

Statistische hypothese

Nulhypothese: er is geen verband tussen de aan- of afwezigheid van OC en de CAAb, d.w.z. d=0

Alternatieve hypothese: De verwachting van de CAAb in de kankerpopulatie verschilt van die van de controlepopulatie, d.w.z. m1 is niet gelijk aan m2. Aangezien het teken van het verschil niet belangrijk is, zal de test tweezijdig zijn.

Algemene Overwegingen

Volgens onze eerdere resultaten gaan we daar vanuit

1. De distributies van de testresultaten in elke groep liggen dicht bij normaal of kunnen door log-transformatie naar normaal worden getransformeerd.
2. De variantie van de verdelingen in de twee groepen is ongeveer gelijk
3. Aangezien dit een pilotstudie is, zullen we de resultaten als significant beschouwen als de tweezijdige p-waarde 0,1 of minder is. De grens van 0,1 in plaats van 0,05 werd gekozen om de kans op willekeurige uitsluiting van sommige potentieel informatieve tests te verkleinen.

Bij de beslissing over voortzetting van het onderzoek wordt geen correctie voor meervoudige vergelijkingen aangenomen. De resultaten zullen echter worden gepresenteerd zonder en met de correctie met behulp van de FDR van Benjamini & Hochberg-benadering (Benjamini, Hochberg 1995).

Waar betrouwbaarheidsgrenzen van toepassing zijn, is het betrouwbaarheidsniveau 95%.

Steekproefgrootte

De steekproefomvang werd berekend met behulp van relevante informatie uit onze vorige studie over peptiden P3 en P1 en eierstokkanker. Er is geen informatie in de literatuur over kanker-geassocieerde antilichamen.

De steekproefomvang wordt berekend voor een sequentieel groepsontwerp in drie stappen met tweezijdige significantie 0,1 en 0,05, vermogen 0,8, voor kanker: controleverhouding 1:2, voor D van 0,5. Bij de berekeningen werden de standaardformules voor steekproefomvang gebruikt die nodig zijn voor het vergelijken van gemiddelde waarden in twee onafhankelijke groepen door middel van een t-toets. De correctie voor een groepssequentiële procedure met de test van O'Bien en Fleming verhoogt de getallen met 1,017 en 1,027 voor significantiewaarden 0,05 en 0,1, wat verwaarloosbaar is voor onze steekproefomvang. (zie C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 tabel 2.4).

De berekeningen zijn gedaan met behulp van NCSS-PASS-software.

Eindpuntevaluatie

Effectiviteitsanalyse

Een berekende D tussen 0,3 en 0,5 markeert een test als niet effectief om alleen te gebruiken. Het kan echter belangrijk zijn in combinatie met andere tests als onderdeel van de multivariate testprocedure. Testen met d < 0,3 worden als niet-effectief beschouwd. Een test, of een combinatie van tests, met d > 0,5 zal de CAAb-test als effectief beoordelen.