Анализ крови на антитела, ассоциированные с раком яичников (CAAb)

Общая информация

Антитела представляют собой специфический ответ на любой «чужеродный» антиген, и обычно они выявляются в сыворотке в течение 5-7 дней после первоначального воздействия на него. Однако в некоторых случаях происходит подавление специфического иммунного ответа, например, в случае опухоли. На сегодняшний день нет сообщений о сывороточных антителах, связанных с раком. В некоторых опухолях, удаленных хирургическим путем и изученных, были обнаружены как инфильтраты Т-лимфоцитов, так и антитела, связанные с опухолевыми клетками. Предполагается, что эти антитела (и другие специфические иммунные ответы) образуются на более поздних стадиях роста опухоли, однако даже в этих случаях не сообщалось о сывороточных антителах (вероятно, из-за того, что они в основном «поглощаются» опухолевой массой). .

Поскольку мутации нормальной клетки, которые приводят к злокачественной клеточной массе, связаны с изменениями в структуре и функции клеток, можно предположить, что иммунная система распознала некоторые из этих изменений как антигенные детерминанты, против которых следует реагировать; если это так, то подавление, вызванное опухолью, будет причиной отсутствия антител.

Если бы эту иммунную супрессию можно было преодолеть in vitro, это могло бы привести к образованию антител, которые не обнаруживаются в сыворотке (мы называем этот процесс иммунологией). Идентификация структур, с которыми связываются антитела, и поиск корреляции между патологией опухоли и специфичностью антител могут предоставить дополнительную информацию об опухоли с помощью анализа крови.

Будущий тест CAAb

Иммунологический тест состоит из этапа стимуляции in vitro и этапа обнаружения антител.

Анализ будет использоваться для поиска антител, связанных с раком, у пациентов с раком яичников.

Идентификация антител, связанных с раком яичников, может предоставить клиницисту дополнительную иммунологическую и антигенную информацию о состоянии пациента или медицинском статусе.

Иммунологический процесс состоит из этапа сбора и обработки крови и периода инкубации (в специальной «пробирке» для стимуляции, называемой CimTube) во влажном инкубаторе при температуре 37oC и 5% CO2.

Тест на обнаружение специфических антител основан на ИФА и включает различные потенциально интересные антигены.

Соответствующая медицинская и патологическая информация, которую необходимо собрать из карты пациента, позволит провести более подробный анализ результатов теста.

ЦЕЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основная цель:

• Чтобы найти антитела, ассоциированные с раком

Эффективность:

• Определить способность иммунологического процесса приводить к выработке антител in vitro, способность анализов ELISA обнаруживать любое из этих антител и устанавливать взаимосвязь между результатами ELISA и клиническим/патологическим статусом пациента. Будет определена статистическая значимость результатов теста CAAb.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ПОПУЛЯЦИИ И ОТБОР ПАЦИЕНТОВ

Пациенты с раком яичников

Исследуемая популяция будет включать субъектов, у которых подозревается рак яичников и которые будут лечиться до любой хирургической процедуры или любого другого противоракового лечения. Клиническое подозрение включает одно из следующего: объемное образование в области таза (при гинекологическом осмотре или с помощью других методов визуализации) или высокие уровни СА-125 у женщин в постменопаузе, асцит или случайное обнаружение отдаленных метастазов. Окончательный анализ будет сделан только в отношении патологии.

Контрольная группа

В контрольную группу будут входить пациентки из гинекологического отделения (или любого другого подходящего отделения), у которых ранее не было рака.

ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ

Общее описание

Текущее исследование представляет собой сравнительное обсервационное исследование с двумя группами, в котором участвуют все последовательные пациенты с раком яичников в течение всего периода исследования, а также контрольные субъекты того же возраста. Цель исследования — оценить эффективность теста CAAb в выявлении антител, ассоциированных с раком яичников.

Субъекты будут проверены на предмет потенциального участия в исследовании в соответствии с критериями включения и исключения. Набранных пациентов попросят подписать форму информированного согласия.

Данные о пациентах будут включать параметры клинического и патологического состояния пациентов, результаты этапа культивирования CimTube и экспериментальные наборы. Эффективность теста CAAb будет оцениваться путем оценки статистической значимости используемого теста CAAb.

В исследовании будет использоваться трехэтапный групповой последовательный план с двумя промежуточными и одним окончательным анализом с использованием границ О'Брайана-Флеминга. Сбор данных может быть остановлен после первого или второго промежуточного анализа, если границы достигнуты. Это могло бы существенно уменьшить количество пациентов и время исследования, лишь незначительно увеличив максимальное количество пациентов. (См. раздел «Соображения относительно размера выборки» ниже).

Мы будем использовать соотношение 1:2 между больными раком и контрольной группой, чтобы уменьшить необходимое количество больных раком, которое является основным ограничивающим фактором.

Спонсор проведет промежуточный анализ после первой трети и второй трети случаев рака яичников, и размер выборки будет пересчитан в соответствии с полученными оценками среднего значения и дисперсии теста в двух группах.

Поскольку данные, собранные на сегодняшний день, относятся только к эпителиально-клеточной карциноме, наше исследование также будет сосредоточено на эпителиально-клеточной карциноме. Поэтому стромальные и герминогенные опухоли, которые составляют менее 10% случаев РЯ, будут исключены на основании окончательного анализа патологии. Кроме того, неовариальные случаи, которые были ошибочно приняты за рак яичников, составляют примерно 10% женщин, перенесших операцию по поводу РЯ. Они также будут исключены в зависимости от окончательной патологии.

Таким образом, в исследование будет включено не менее 60 пациентов, чтобы получить статистически прогнозируемый необходимый размер выборки из 50 образцов рака яичников. Контрольную группу составят 120 пациентов.

Процедура исследования

В больнице:

Во-первых, идентифицированный пациент для исследования должен подписать форму информированного согласия и заполнить форму приемлемости; оба должны быть штрих-кодированы.

Демографические и клинические данные пациента, полученные из медицинской карты пациента, включая возраст, страну происхождения, историю болезни и результаты анализов, проведенных для диагностической оценки рака яичников (не относится к контрольной группе), будут записаны на соответствующей полосе. - закодированные формы отчетов о случаях до исследования. Отчеты будут либо электронными (специальный и защищенный интернет-сайт), либо в печатном виде. Бумажная копия протокола будет храниться в отделении. Исследование является анонимным, и Департамент сохранит имя пациента, не раскрывая его исследователям и спонсору исследования.

Спонсор исследования предоставит пробирки и этикетки со штрих-кодом для мониторинга. Врач/медсестра/флеботомист возьмет три вакуумные пробирки с гепарином (20-24 мл), пометит их (штрих-кодом) и заполнит начальный шаг в «Образце формы последующего наблюдения» (SFF). Пробирки с кровью будут упакованы в двойную герметичную тару (предоставляется спонсором). Департамент уведомит назначенного грузоотправителя о необходимости сбора крови в течение 1 часа с момента взятия пробы.

Для каждой выборки OC также будут набраны две контрольные группы того же возраста (+/- 3 года).

Транспортировка из больницы в хендлинг-лабораторию:

Кровь будет транспортироваться в лабораторию при комнатной температуре (18-250С) согласно соответствующим правилам. Время в пути составит не более 6 часов. Время записи в SFF.

В лаборатории по работе с кровью:

Лаборатория по работе с кровью (которая должна быть расположена не дальше 200 км от места сбора) будет выделять РВМС (мононуклеарные клетки периферической крови) и помещать их в иммунологическую культуру в течение 20 часов с момента отбора проб (время заполнения в SFF).

Подробный протокол и среда Cimmunology будут предоставлены Lab Discoveries участвующим лабораториям (где применимо). Все больницы в Израиле будут отправлять образцы крови в лабораторию Lab Discoveries. После этапа культивирования культуральную жидкость собирают и замораживают при температуре -80°С в аликвотах с соответствующей маркировкой. Замороженные образцы будут отправлены в диагностическую лабораторию для анализа на антитела.

В диагностической лаборатории:

Тесты на антитела, такие как ELISA, будут подготовлены с использованием различных антигенов. Образцы будут проверены на реакцию на два антигена, которые были идентифицированы в прошлом, и на дополнительные новые антигены. Все данные будут постоянно записываться непосредственно на специальный компьютер. Для каждого образца все результаты антител будут помещены в закодированную карту пациента. Результаты будут проанализированы статистиком, имеющим опыт изучения онкологических заболеваний.

В больнице, после операции:

Через 2-3 недели после операции ССЗ собирает из истории болезни пациента результаты патологоанатомической лаборатории и любую другую соответствующую информацию о характере и состоянии опухоли, которая была удалена во время операции. Эти результаты будут зарегистрированы на специальном и защищенном интернет-сайте, а распечатанный CRF-OC со штрих-кодом будет храниться в отделении.

СТАТИСТИЧЕСКИЕ СООБРАЖЕНИЯ

Настоящее исследование представляет собой сравнительное обсервационное исследование с двумя группами, в котором участвуют все последовательные пациенты с раком яичников в течение всего периода исследования, а также контрольные субъекты того же возраста. Основной целью исследования является оценка эффективности тестов CAAb. Эта эффективность будет измеряться расстоянием Фишера (часто называемым «величиной эффекта») d, определяемым как d = |m1-m2|/2, где m1 — среднее значение теста в контрольной группе, m2 — среднее значение в контрольной группе. больных раком яичников, |m1-m2| обозначает абсолютную величину разницы (m1-m2), а s — общую оценку стандартного отклонения распределения теста в одной группе (контрольная или рак яичников).

Статистическая гипотеза

Нулевая гипотеза: нет никакой связи между наличием или отсутствием OC и CAAb, т.е. d = 0

Альтернативная гипотеза: ожидаемое значение CAAb в раковой популяции отличается от ожидаемого в контрольной популяции, т. е. m1 не равно m2. Поскольку знак разности не важен, тест будет двусторонним.

Общие Соображения

Согласно нашим предыдущим результатам, мы предполагаем, что

1. Распределения результатов теста в каждой группе близки к нормальному или могут быть преобразованы в нормальное путем логарифмического преобразования.
2. Дисперсия распределений в двух группах примерно одинакова.
3. Имея в виду, что это пилотное исследование, мы будем считать результаты значимыми, если двустороннее значение р равно 0,1 или меньше. Граница 0,1 вместо 0,05 была выбрана для уменьшения вероятности случайного исключения некоторых потенциально информативных тестов.

При принятии решения о продолжении исследования поправка на множественные сравнения не предполагается. Однако результаты будут представлены без коррекции и с коррекцией с использованием метода FDR Бенджамини и Хохберга (Benjamini, Hochberg 1995).

В тех случаях, когда доверительные интервалы подходят, доверительный уровень будет равен 95 %.

Размер образца

Размер выборки был рассчитан с использованием соответствующей информации из нашего предыдущего исследования пептидов P3 и P1 и рака яичников. В литературе нет информации об антителах, ассоциированных с раком.

Размер выборки рассчитывается для трехэтапного последовательного группового дизайна с двусторонней значимостью 0,1 и 0,05, мощностью 0,8, для рака: соотношение контроля 1: 2, для D 0,5. В расчетах использовались стандартные формулы объема выборки, необходимые для сравнения средних значений в двух независимых группах по t-критерию. Поправка на групповую последовательную процедуру с критерием О'Биена и Флеминга увеличивает числа на 1,017 и 1,027 для значений значимости 0,05 и 0,1, что незначительно для наших размеров выборки. (см. C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 таблица 2.4).

Расчеты выполнены с использованием программы NCSS-PASS.

Оценка конечной точки

Анализ эффективности

Рассчитанный D между 0,3 и 0,5 помечает тест как неэффективный для использования отдельно. Однако это может быть важно в сочетании с другими тестами как часть процедуры многомерного тестирования. Тесты с d < 0,3 будут считаться неэффективными. Тест или комбинация тестов с d > 0,5 пометит тест CAAb как эффективный.