Blodprøve for Ovarian Cancer Associated Antibodies (CAAb)

Generell informasjon

Antistoffer er en spesifikk respons på ethvert "fremmed" antigen, og de kan vanligvis påvises i serumet innen 5-7 dager etter den første eksponeringen for det. Imidlertid er det noen tilfeller der det er en undertrykkelse av den spesifikke immunresponsen, for eksempel i tilfelle av en svulst. Til dags dato er det ingen rapporter om serumantistoffer som er assosiert med kreft. Noen svulster, når de er fjernet og studert kirurgisk, har vist seg å ha både infiltrater av T-lymfocytter og antistoffer bundet til tumorcellene. Disse antistoffene (og andre spesifikke immunresponser) antas å bli dannet på senere stadier av tumorveksten, men selv i disse tilfellene har serumantistoffer ikke blitt rapportert (sannsynligvis på grunn av at de stort sett blir "absorbert" av tumormassen) .

Siden mutasjonene i en normal celle som fører til en ondartet cellemasse innebærer endringer i strukturen og funksjonen til cellene, kan det antas at immunsystemet har gjenkjent noen av disse endringene som antigene determinanter som bør reageres mot; i så fall vil undertrykkelsen forårsaket av svulsten være årsaken til mangelen på antistoffer.

Hvis denne immunundertrykkelsen kunne overvinnes, in vitro, kan det føre til dannelse av antistoffer som ikke er påvisbare i serumet (vi kaller denne prosessen Cimmunology). Å identifisere strukturene som antistoffene binder seg til, og se etter en korrelasjon mellom svulstpatologien og antistoffenes spesifisitet - vil kunne gi ytterligere informasjon om svulsten - via en blodprøve.

Fremtidig CAAB-test

Den immunologibaserte testen består av et in vitro-stimuleringstrinn og et antistoffdeteksjonstrinn.

Analysen vil bli brukt til å finne kreftassosierte antistoffer hos pasienter med eggstokkreft.

Identifikasjon av eggstokkreft-assosierte antistoffer kan gi klinikeren ytterligere immunologisk og antigen informasjon om pasientens tilstand eller medisinske status.

Cimmunology-prosessen består av et blodinnsamlings- og prosesstrinn og en inkubasjonsperiode (i et spesielt stimulerings-"rør" kalt CimTube) i en fuktig, 37oC inkubator med 5 % CO2.

Testen for påvisning av spesifikke antistoffer er ELISA-basert, og inkluderer ulike potensielt interessante antigener.

Den relevante medisinske og patologiske informasjonen, som skal samles inn fra pasientens fil, vil muliggjøre en mer detaljert analyse av testresultatene.

STUDIEMÅL

Hovedmål:

• For å finne kreftassosierte antistoffer

Effektivitet:

• For å bestemme evnen til Cimmunology-prosessen til å føre til in vitro antistoffproduksjon, evnen til ELISA-analysene til å detektere noen av disse antistoffene, og å etablere forholdet mellom ELISA-resultatene og den kliniske/patologiske statusen til pasienten. Den statistiske signifikansen av CAAB-testresultatene vil bli bestemt.

STUDIEBEFOLKNING OG PASIENTUTVALG

Pasienter med eggstokkreft

Studiepopulasjonen vil inkludere forsøkspersoner som er mistenkt og skal behandles for eggstokkreft, før ethvert kirurgisk inngrep eller annen behandling mot kreft. Den kliniske mistanken inkluderer en av følgende: Bekkenmasse (ved bekkenundersøkelse eller andre bildeteknikker), eller høye CA-125-nivåer hos postmenopausale kvinner, ascites eller på grunn av tilfeldig funn av fjernmetastaser. Endelig analyse vil kun bli gjort i forhold til patologi.

Kontrollgruppe

Kontrollgruppen vil omfatte pasienter, ved gynekologisk avdeling (eller annen passende omsorgsenhet), uten tidligere krefthistorie.

STUDERE DESIGN

Overordnet beskrivelse

Den nåværende studien er en sammenlignende observasjonsstudie med to armer, som involverer alle påfølgende eggstokkreftpasienter i løpet av studiens varighet, og alderstilpassede kontrollpersoner. Hensikten med studien er å vurdere effektiviteten til CAAb-testen for å oppdage eggstokkreftassosierte antistoffer.

Forsøkspersoner vil bli screenet for potensiell deltakelse i studien, i henhold til inklusjons- og eksklusjonskriteriene. Pasienter som rekrutteres vil bli bedt om å signere et informert samtykkeskjema.

Dataene om pasientene vil inkludere parametere for den kliniske og patologiske tilstanden til pasientene, resultater av CimTube-kulturtrinn og eksperimentelle sett. Effektiviteten av CAAB-testen vil bli vurdert ved å evaluere den statistiske signifikansen av CAAB-testen som brukes.

Studien vil bruke en tre-trinns gruppe-sekvensiell design med to midlertidige og en endelig analyse ved bruk av O'Brian-Fleming' grenser. Datainnsamlingen kan stoppes etter den første eller andre interimanalysen hvis grensene nås. Dette kan redusere antallet pasienter og tiden for studien betydelig, mens det maksimale antallet pasienter bare øker litt. (Se betraktninger om prøvestørrelse nedenfor).

Vi vil bruke forholdet 1:2 mellom kreft- og kontrollpasienter for å redusere nødvendig antall kreftpasienter som er den viktigste begrensende faktoren.

Sponsoren vil gjennomføre en foreløpig analyse, etter første tredjedel og andre tredjedel av eggstokkrefttilfeller, og prøvestørrelsen vil bli beregnet på nytt i henhold til de oppnådde estimatene av gjennomsnittet og variansen til testen i de to gruppene.

Siden dataene samlet til dags dato kun var fra epitelcellekarsinom, vil vår studie også fokusere på epitelcellekarsinom. Derfor vil stromale og kimcelletumorer, som utgjør mindre enn 10 % av OC-tilfellene, bli henlagt basert på den endelige patologianalysen. I tillegg utgjør ikke-ovarietilfeller som ble forvekslet med ovariekarsinom omtrent 10 % av kvinnene som gjennomgår operasjon for OC. Disse vil også bli droppet basert på den endelige patologien.

Derfor vil minst 60 pasienter bli registrert i studien, for å få den statistisk anslåtte nødvendige prøvestørrelsen på 50 eggstokkreftprøver. Kontrollgruppen vil være på 120 pasienter.

Studieprosedyre

På sykehuset:

Først må en identifisert studiepasient signere et informert samtykkeskjema, og kvalifikasjonsskjemaet fylles ut; begge skal være strekkodede.

Pasientdemografisk og klinisk informasjon innhentet fra pasientens medisinske journal, inkludert alder, opprinnelsesland, medisinsk historie og resultater av tester utført som fører til diagnostisk evaluering av eggstokkreft (ikke relevant i kontrollgruppen) vil bli registrert på den aktuelle baren. -kodede, forstudie-saksrapportskjemaer. Rapportene vil enten være elektroniske (en dedikert og sikret internettside) eller via en papirkopi. En papirkopi av journalene vil bli oppbevart i avdelingen. Studien er anonym og avdelingen vil beholde navnet på pasienten uten å avsløre det for etterforskere og studiesponsor.

Studiesponsoren vil gi rørene og strekkodeetikettene for overvåking. Legen/sykepleieren/flebotomisten vil samle tre heparinvakuumrør (20-24 ml), merke dem (strekkode) og fylle opp det første trinnet i "Sample follow-up form" (SFF). Rørene med blodet vil bli pakket i en dobbel forseglet beholder (vil leveres av sponsoren). Avdelingen vil varsle den utpekte avsenderen om å samle inn blodet inntil 1 time fra det er tatt prøve.

For hver OC-prøve vil to alderstilpassede kontroller (+/- 3 år) også rekrutteres.

Transport fra sykehuset til håndteringslaboratoriet:

Blodet vil bli transportert ved romtemperatur (18-250C), i henhold til gjeldende forskrifter, til laboratoriet. Transporttiden vil ikke være mer enn 6 timer. Tider skal registreres i SFF.

I blodhåndteringslaboratoriet:

Blodhåndteringslaboratoriet (skal plasseres ikke lenger enn 200 km fra innsamlingsstedet) vil isolere PBMC (Perifert blod mononukleære celler) og sette dem inn i Cimmunology kultur innen 20 timer fra prøvetakingstidspunktet (fyllingstid i SFF).

Den detaljerte protokollen og Cimmunology media vil bli levert av Lab Discoveries til de deltakende laboratoriene (der det er aktuelt). Alle sykehus i Israel vil sende blodprøvene til laboratoriet ved Lab Discoveries. Etter kulturtrinnet vil kulturvæsken samles og fryses ved -80°C, i riktig merkede alikvoter. De frosne prøvene vil bli sendt til diagnoselaboratoriet for antistofftester.

I det diagnostiske laboratoriet:

Antistofftester, som ELISA, vil bli utarbeidet ved bruk av forskjellige antigener. Prøvene vil bli testet for respons på de to antigenene som har blitt identifisert tidligere, og for ytterligere nye. Alle data vil bli permanent registrert direkte på en dedikert datamaskin. For hver prøve vil alle antistoffresultater bli lagt inn i den kodede pasientfilen. Resultatene vil bli analysert av en statistiker med ekspertise på kreftpopulasjonsstudier.

På sykehuset, etter operasjonen:

2-3 uker etter operasjonen vil CRO samle resultatene fra patologilaboratoriet fra pasientens fil og all annen relevant informasjon om arten og tilstanden til svulsten som ble fjernet under operasjonen. Disse resultatene vil bli registrert på den dedikerte og sikrede internettsiden, og en trykt strekkodet CRF-OC vil bli oppbevart i avdelingen.

STATISTISKE HENSYN

Denne studien er en sammenlignende observasjonsstudie med to armer, som involverer alle påfølgende eggstokkreftpasienter i løpet av studiens varighet, og alderstilpassede kontrollpersoner. Hovedformålet med studien er å vurdere effektiviteten til CAAB-testene. Denne effektiviteten vil bli målt ved Fishers avstand (ofte kalt "effektstørrelse") d definert som d = |m1-m2|/2 Der m1 er middelverdien av testen i kontrollene, m2 er middelverdien i eggstokkreftpasienter, |m1-m2| angir den absolutte verdien av forskjellen (m1-m2), og s er det vanlige estimatet for standardavviket for fordelingen av testen i en gruppe (kontroll eller eggstokkreft).

Statistisk hypotese

Nullhypotese: Det er ingen sammenheng mellom tilstedeværelse eller fravær av OC og CAAb, dvs. d=0

Alternativ hypotese: Forventningen til CAAb i kreftpopulasjonen er forskjellig fra kontrollpopulasjonen, dvs. m1 er ikke lik m2. Siden fortegnet på forskjellen ikke er viktig, vil testen være tosidig.

Generelle betraktninger

I følge våre tidligere resultater antar vi det

1. Fordelingen av testresultatene i hver gruppe er nær Normal eller kan transformeres til Normal ved log-transformasjon.
2. Variansen av fordelingene i de to gruppene er omtrent like
3. Med tanke på at dette er en pilotstudie vil vi vurdere resultatene som signifikante dersom den tosidige p-verdien er 0,1 eller mindre. Grensen 0,1 i stedet for 0,05 ble valgt for å redusere sjansene for tilfeldig ekskludering av noen potensielt informative tester.

Ved avgjørelse om fortsettelse av studien forutsettes det ingen korreksjon for flere sammenligninger. Resultatene vil imidlertid bli presentert uten og med korreksjonen ved å bruke FDR av Benjamini & Hochberg tilnærming (Benjamini, Hochberg 1995).

Der det er hensiktsmessige konfidensgrenser, vil konfidensnivået være 95 %.

Prøvestørrelse

Prøvestørrelsen ble beregnet ved å bruke relevant informasjon fra vår tidligere studie om peptider P3 og P1 og eggstokkreft. Det er ingen informasjon i litteraturen om kreftassosierte antistoffer.

Prøvestørrelsen beregnes for en tre-trinns sekvensiell gruppedesign med tosidig signifikans 0,1 og 0,05, potens 0,8, for kreft: kontrollforhold 1:2, for D på 0,5. Beregningene brukte standardformlene for utvalgsstørrelse som er nødvendig for sammenligning av gjennomsnittsverdier i to uavhengige grupper ved t-test. Korrigeringen for en gruppesekvensiell prosedyre med O'Bien og Flemings test øker tallene med 1,017 og 1,027 for signifikansverdier 0,05 og 0,1, som er ubetydelig for våre utvalgsstørrelser. (se C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 tabell 2.4).

Beregningene ble gjort ved hjelp av NCSS-PASS programvare.

Endepunktevaluering

Effektivitetsanalyse

En beregnet D mellom 0,3 og 0,5 vil markere en test som ikke effektiv for bruk alene. Det kan imidlertid være viktig i kombinasjon med andre tester som en del av den multivariate testprosedyren. Tester med d < 0,3 vil bli vurdert som ikke-effektive. En test, eller en kombinasjon av tester, med d > 0,5 vil markere CAAB-testen som effektiv.