Badanie krwi na obecność przeciwciał związanych z rakiem jajnika (CAAb)

Informacje ogólne

Przeciwciała są specyficzną odpowiedzią na każdy „obcy” antygen i zwykle są wykrywalne w surowicy w ciągu 5-7 dni po pierwszym kontakcie z nim. Istnieją jednak przypadki, w których dochodzi do zahamowania specyficznej odpowiedzi immunologicznej, na przykład w przypadku guza. Do tej pory nie ma doniesień na temat przeciwciał w surowicy, które są związane z rakiem. Stwierdzono, że niektóre guzy po usunięciu chirurgicznym i zbadaniu mają zarówno nacieki limfocytów T, jak i przeciwciała związane z komórkami nowotworowymi. Zakłada się, że te przeciwciała (i inne specyficzne odpowiedzi immunologiczne) powstają w późniejszych stadiach wzrostu guza, jednak nawet w tych przypadkach nie odnotowano przeciwciał w surowicy (prawdopodobnie z powodu ich większości „wchłaniania” przez masę guza) .

Ponieważ mutacje normalnej komórki, które prowadzą do złośliwej masy komórkowej, pociągają za sobą zmiany w strukturze i funkcji komórek, można założyć, że układ odpornościowy rozpoznał niektóre z tych zmian jako determinanty antygenowe, na które należy odpowiedzieć; jeśli tak, to supresja spowodowana przez guz byłaby powodem braku przeciwciał.

Jeśli udałoby się przezwyciężyć tę supresję immunologiczną, in vitro mogłoby to doprowadzić do powstania przeciwciał niewykrywalnych w surowicy (proces ten nazywamy Cimmunologią). Identyfikacja struktur, z którymi wiążą się przeciwciała, i poszukiwanie korelacji między patologią nowotworu a specyficznością przeciwciał – może dostarczyć dodatkowych informacji o guzie – za pomocą badania krwi.

Przyszły test CAAb

Test oparty na Cimmunology składa się z etapu stymulacji in vitro i etapu wykrywania przeciwciał.

Test zostanie wykorzystany do wykrywania przeciwciał związanych z rakiem u pacjentek z rakiem jajnika.

Identyfikacja przeciwciał związanych z rakiem jajnika może dostarczyć klinicyście dodatkowych informacji immunologicznych i antygenowych dotyczących stanu lub stanu medycznego pacjentki.

Proces Cimmunology obejmuje etap pobierania i przetwarzania krwi oraz okres inkubacji (w specjalnej „rurce” stymulacyjnej zwanej CimTube) w wilgotnym inkubatorze o temperaturze 37oC z 5% CO2.

Test do wykrywania specyficznych przeciwciał oparty jest na teście ELISA i obejmuje różne potencjalnie interesujące antygeny.

Odpowiednie informacje medyczne i patologiczne, które zostaną zebrane z kartoteki pacjenta, umożliwią bardziej szczegółową analizę wyników badań.

CELE STUDIÓW

Podstawowy cel:

• Aby znaleźć przeciwciała związane z rakiem

Skuteczność:

• Aby określić zdolność procesu Cimmunology do doprowadzenia do produkcji przeciwciał in vitro, zdolność testów ELISA do wykrycia któregokolwiek z tych przeciwciał oraz ustalenie związku między wynikami testu ELISA a stanem klinicznym/patologicznym pacjenta. Zostanie określona istotność statystyczna wyników testu CAAb.

BADANE POPULACJE I WYBÓR PACJENTÓW

Pacjentki z rakiem jajnika

Badana populacja będzie obejmować osobniki, u których podejrzewa się raka jajnika i które mają być leczone, przed jakimkolwiek zabiegiem chirurgicznym lub jakimkolwiek innym leczeniem przeciwnowotworowym. Podejrzenie kliniczne obejmuje jedno z następujących: Guz w miednicy (potwierdzony badaniem miednicy lub innymi technikami obrazowania) lub wysoki poziom CA-125 u kobiet po menopauzie, wodobrzusze lub spowodowane przypadkowym wykryciem przerzutów odległych. Ostateczna analiza zostanie przeprowadzona wyłącznie w odniesieniu do patologii.

Grupa kontrolna

Grupa kontrolna będzie obejmowała pacjentki na oddziale ginekologicznym (lub innym odpowiednim oddziale opieki), bez wcześniejszej historii raka.

PROJEKT BADANIA

Ogólny opis

Obecne badanie jest porównawczym obserwacyjnym badaniem dwuramiennym, obejmującym wszystkie kolejne pacjentki z rakiem jajnika w czasie trwania badania oraz dopasowane wiekowo osoby kontrolne. Celem pracy jest ocena skuteczności testu CAAb w wykrywaniu przeciwciał związanych z rakiem jajnika.

Pacjenci zostaną poddani badaniu przesiewowemu pod kątem potencjalnego udziału w badaniu, zgodnie z kryteriami włączenia i wyłączenia. Zrekrutowani pacjenci zostaną poproszeni o podpisanie formularza świadomej zgody.

Dane dotyczące pacjentów będą obejmowały parametry stanu klinicznego i patologicznego pacjentów, wyniki etapu hodowli CimTube oraz zestawy eksperymentalne. Skuteczność testu CAAb zostanie oceniona poprzez ocenę istotności statystycznej użytego testu CAAb.

W badaniu wykorzystany zostanie trzyetapowy schemat grupowo-sekwencyjny z dwiema pośrednimi i jedną końcową analizą z wykorzystaniem granic O'Briana-Fleminga. Gromadzenie danych może zostać zatrzymane po pierwszej lub drugiej analizie okresowej, jeśli zostaną osiągnięte granice. Mogłoby to znacznie zmniejszyć liczbę pacjentów i czas badania, jednocześnie nieznacznie zwiększając maksymalną liczbę pacjentów. (Patrz Uwagi dotyczące wielkości próbki poniżej).

Zastosujemy stosunek 1:2 między pacjentami z rakiem a grupą kontrolną, aby zmniejszyć niezbędną liczbę pacjentów z rakiem, która jest głównym czynnikiem ograniczającym.

Sponsor przeprowadzi analizę pośrednią po pierwszej trzeciej i drugiej trzeciej przypadków raka jajnika, a wielkość próby zostanie ponownie obliczona zgodnie z uzyskanymi szacunkami średniej i wariancji testu w obu grupach.

Ponieważ zebrane do tej pory dane dotyczyły wyłącznie raka nabłonkowokomórkowego, nasze badanie skupi się również na raku nabłonkowokomórkowym. Dlatego guzy zrębowe i zarodkowe, które stanowią mniej niż 10% przypadków OC, zostaną odrzucone na podstawie końcowej analizy patologicznej. Ponadto przypadki niezwiązane z jajnikami, które zostały pomylone z rakiem jajnika, obejmują około 10% kobiet poddawanych operacji z powodu OC. Zostaną one również usunięte na podstawie ostatecznej patologii.

W związku z tym do badania zostanie włączonych co najmniej 60 pacjentek w celu uzyskania statystycznie przewidywanej wymaganej wielkości próby obejmującej 50 próbek raka jajnika. Grupa kontrolna będzie liczyła 120 pacjentów.

Procedura badania

W szpitalu:

Najpierw zidentyfikowany pacjent uczestniczący w badaniu musi podpisać formularz świadomej zgody i wypełnić swój formularz kwalifikacyjny; oba powinny być oznaczone kodem kreskowym.

Informacje demograficzne i kliniczne pacjentki pozyskane z dokumentacji medycznej pacjentki, w tym wiek, kraj pochodzenia, historię medyczną oraz wyniki przeprowadzonych badań prowadzących do oceny diagnostycznej raka jajnika (nieistotne w grupie kontrolnej) zostaną zapisane na odpowiednim, słupkowym -kodowane formularze opisów przypadków przed badaniem. Sprawozdania będą przekazywane w formie elektronicznej (specjalna i zabezpieczona strona internetowa) lub w formie papierowej. Wydrukowana kopia akt będzie przechowywana w oddziale. Badanie jest anonimowe, a Klinika zachowa nazwisko pacjenta bez ujawniania go badaczom i sponsorowi badania.

Sponsor badania dostarczy probówki i etykiety z kodami kreskowymi do monitorowania. Lekarz / pielęgniarka / flebotomista pobierze trzy probówki próżniowe z heparyną (20-24 ml), oznaczy je (kod kreskowy) i wypełni pierwszy krok w „Formularzu kontrolnym próbki” (SFF). Probówki z krwią zostaną zapakowane w podwójnie zapieczętowany pojemnik (dostarczy sponsor). Departament powiadomi wyznaczonego nadawcę o konieczności pobrania krwi do 1 godziny od momentu pobrania próbki.

Dla każdej próbki OC zostaną również zwerbowane dwie grupy kontrolne dopasowane wiekowo (+/- 3 lata).

Transport ze szpitala do laboratorium manipulacyjnego:

Krew będzie transportowana do laboratorium w temperaturze pokojowej (18-250C), zgodnie z obowiązującymi przepisami. Czas transportu nie będzie dłuższy niż 6 godzin. Czasy do zapisania w SFF.

W laboratorium zajmującym się krwią:

Laboratorium zajmujące się krwią (które ma znajdować się nie dalej niż 200 km od miejsca pobrania) wyizoluje PBMC (komórki jednojądrzaste krwi obwodowej) i umieści je w hodowli Cimmunology w ciągu 20 godzin od czasu pobrania próbki (czas wypełnienia w SFF).

Szczegółowy protokół i nośnik Cimmunology zostaną dostarczone przez Lab Discoveries do uczestniczących laboratoriów (w stosownych przypadkach). Wszystkie szpitale w Izraelu wyślą próbki krwi do laboratorium w Lab Discoveries. Po etapie hodowli płyn hodowlany zostanie zebrany i zamrożony w temperaturze -80°C w odpowiednio oznakowanych porcjach. Zamrożone próbki zostaną przesłane do laboratorium diagnostycznego w celu wykonania badań na obecność przeciwciał.

W pracowni diagnostycznej:

Testy przeciwciał, takie jak ELISA, zostaną przygotowane przy użyciu różnych antygenów. Próbki zostaną przetestowane pod kątem odpowiedzi na dwa antygeny, które zostały zidentyfikowane w przeszłości, oraz na dodatkowe nowe. Wszystkie dane będą trwale zapisywane bezpośrednio na dedykowanym komputerze. Dla każdej próbki wszystkie wyniki przeciwciał zostaną umieszczone w zakodowanej teczce pacjenta. Wyniki zostaną przeanalizowane przez statystyka posiadającego doświadczenie w badaniach populacji nowotworów.

W szpitalu, po operacji:

2-3 tygodnie po zabiegu CRO zbierze z dokumentacji pacjenta wyniki z laboratorium patologicznego oraz wszelkie inne istotne informacje dotyczące charakteru i stanu guza, który został usunięty podczas operacji. Wyniki te zostaną zapisane na dedykowanej i zabezpieczonej stronie internetowej, a wydrukowany CRF-OC z kodem kreskowym będzie przechowywany w Departamencie.

UWAGI STATYSTYCZNE

Niniejsze badanie jest porównawczym obserwacyjnym badaniem dwuramiennym, obejmującym wszystkie kolejne pacjentki z rakiem jajnika w czasie trwania badania oraz dopasowane wiekowo osoby kontrolne. Głównym celem pracy jest ocena skuteczności testów CAAb. Skuteczność ta będzie mierzona odległością Fishera (często nazywaną „wielkością efektu”) d zdefiniowaną jako d = |m1-m2|/2 Gdzie m1 to średnia wartość testu w grupie kontrolnej, m2 to średnia wartość w grupie kontrolnej pacjentek z rakiem jajnika, |m1-m2| oznacza bezwzględną wartość różnicy (m1-m2), a s jest powszechnym oszacowaniem odchylenia standardowego rozkładu testu w jednej grupie (kontrola lub rak jajnika).

Hipoteza statystyczna

Hipoteza zerowa: Nie ma związku między obecnością lub brakiem OC a CAAb, tj. d=0

Hipoteza alternatywna: Oczekiwana wartość CAAb w populacji chorych na raka różni się od wartości oczekiwanej w populacji kontrolnej, tj. m1 nie jest równe m2. Ponieważ znak różnicy nie jest ważny, test będzie dwustronny.

Uwagi ogólne

Zgodnie z naszymi wcześniejszymi wynikami zakładamy, że

1. Rozkłady wyników testu w każdej grupie są zbliżone do normalnego lub mogą być przekształcone do normalnego przez transformację logarytmiczną.
2. Wariancja rozkładów w obu grupach jest w przybliżeniu równa
3. Mając na uwadze, że jest to badanie pilotażowe, uznamy wyniki za istotne, jeśli dwustronna wartość p wynosi 0,1 lub mniej. Granica 0,1 zamiast 0,05 została wybrana, aby zmniejszyć szanse na przypadkowe wykluczenie niektórych testów potencjalnie informacyjnych.

Decydując się na kontynuację badania, nie zakłada się korekty dla porównań wielokrotnych. Wyniki zostaną jednak przedstawione bez iz poprawką z wykorzystaniem metody FDR Benjaminiego i Hochberga (Benjamini, Hochberg 1995).

Tam, gdzie odpowiednie są granice ufności, poziom ufności wyniesie 95%.

Wielkość próbki

Wielkość próby została obliczona na podstawie odpowiednich informacji z naszego poprzedniego badania dotyczącego peptydów P3 i P1 oraz raka jajnika. W literaturze brak jest informacji na temat przeciwciał związanych z rakiem.

Wielkość próby oblicza się dla trzyetapowego układu grup sekwencyjnych z dwustronną istotnością 0,1 i 0,05, mocą 0,8, dla raka: stosunek kontroli 1:2, dla D 0,5. W obliczeniach wykorzystano standardowe wzory na liczebność próby, niezbędne do porównania średnich wartości w dwóch niezależnych grupach za pomocą testu t. Korekta dla procedury grupowo-sekwencyjnej z testem O'Bien i Fleminga zwiększa liczby o 1,017 i 1,027 dla wartości istotności 0,05 i 0,1, co jest pomijalne dla naszych wielkości prób. (patrz C. Jennison, B.W. Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US s. 30, tabela 2.4).

Obliczenia wykonano za pomocą programu NCSS-PASS.

Ocena punktu końcowego

Analiza efektywności

Obliczona wartość D między 0,3 a 0,5 oznacza, że ​​test jest nieskuteczny i nie można go stosować samodzielnie. Jednak może to być ważne w połączeniu z innymi testami jako część procedury testu wielowymiarowego. Testy z d < 0,3 zostaną uznane za nieskuteczne. Test lub kombinacja testów z d > 0,5 oznacza, że ​​test CAAb jest skuteczny.