Bluttest auf Eierstockkrebs-assoziierte Antikörper (CAAb)

Allgemeine Informationen

Antikörper sind eine spezifische Reaktion auf jedes „fremde“ Antigen und sind normalerweise innerhalb von 5–7 Tagen nach der ersten Exposition im Serum nachweisbar. Es gibt jedoch Fälle, in denen die spezifische Immunantwort unterdrückt wird, beispielsweise bei einem Tumor. Bisher gibt es keine Berichte über Serumantikörper, die mit Krebs in Zusammenhang stehen. Bei einigen Tumoren wurde bei chirurgischer Entfernung und Untersuchung festgestellt, dass sie sowohl Infiltrate von T-Lymphozyten als auch an die Tumorzellen gebundene Antikörper aufweisen. Es wird angenommen, dass diese Antikörper (und andere spezifische Immunantworten) in späteren Stadien des Tumorwachstums gebildet werden. Allerdings wurden selbst in diesen Fällen keine Serumantikörper gemeldet (wahrscheinlich, weil sie größtenteils von der Tumormasse „absorbiert“ werden). .

Da die Mutationen einer normalen Zelle, die zu einer bösartigen Zellmasse führen, Veränderungen in der Struktur und Funktion der Zellen mit sich bringen, könnte man davon ausgehen, dass das Immunsystem einige dieser Veränderungen als antigene Determinanten erkannt hat, gegen die reagiert werden sollte; Wenn ja, dann wäre die durch den Tumor verursachte Unterdrückung der Grund für das Fehlen von Antikörpern.

Wenn diese Immunsuppression in vitro überwunden werden könnte, könnte es zur Bildung von Antikörpern kommen, die im Serum nicht nachweisbar sind (wir nennen diesen Prozess Cimmunologie). Die Identifizierung der Strukturen, an die die Antikörper binden, und die Suche nach einem Zusammenhang zwischen der Tumorpathologie und der Spezifität der Antikörper könnten mithilfe einer Blutuntersuchung zusätzliche Informationen über den Tumor liefern.

Zukünftiger CAAb-Test

Der auf der Immunologie basierende Test besteht aus einem In-vitro-Stimulationsschritt und einem Antikörpernachweisschritt.

Der Test wird verwendet, um krebsassoziierte Antikörper bei Patientinnen mit Eierstockkrebs zu finden.

Die Identifizierung von Eierstockkrebs-assoziierten Antikörpern könnte dem Kliniker zusätzliche immunologische und antigenische Informationen über den Zustand oder den medizinischen Status der Patientin liefern.

Der Cimmunology-Prozess besteht aus einem Schritt der Blutentnahme und -verarbeitung sowie einer Inkubationszeit (in einem speziellen Stimulationsröhrchen namens CimTube) in einem feuchten Inkubator mit 37 °C und 5 % CO2.

Der Test zum Nachweis spezifischer Antikörper basiert auf ELISA und umfasst verschiedene potenziell interessante Antigene.

Die aus der Patientenakte zu entnehmenden relevanten medizinischen und pathologischen Informationen ermöglichen eine detailliertere Analyse der Testergebnisse.

LERNZIELE

Hauptziel:

• Um krebsassoziierte Antikörper zu finden

Wirksamkeit:

• Zur Bestimmung der Fähigkeit des Cimmunologie-Prozesses, zur In-vitro-Antikörperproduktion zu führen, der Fähigkeit der ELISA-Tests, diese Antikörper nachzuweisen, und zur Feststellung der Beziehung zwischen den ELISA-Ergebnissen und dem klinischen/pathologischen Status des Patienten. Die statistische Signifikanz der CAAb-Testergebnisse wird bestimmt.

STUDIEREN SIE BEVÖLKERUNGEN UND PATIENTENAUSWAHL

Patienten mit Eierstockkrebs

Die Studienpopulation umfasst Probanden, bei denen der Verdacht auf Eierstockkrebs besteht und die vor einem chirurgischen Eingriff oder einer anderen Krebsbehandlung behandelt werden sollen. Der klinische Verdacht umfasst eine der folgenden Ursachen: Raumforderung im Beckenbereich (durch Untersuchung des Beckens oder andere bildgebende Verfahren) oder hohe CA-125-Werte bei Frauen nach der Menopause, Aszites oder der zufällige Befund einer Fernmetastasierung. Die abschließende Analyse erfolgt nur in Bezug auf die Pathologie.

Kontrollgruppe

Zur Kontrollgruppe gehören Patienten in der gynäkologischen Abteilung (oder einer anderen geeigneten Pflegeeinheit) ohne Vorgeschichte einer Krebserkrankung.

STUDIENDESIGN

Allgemeine Beschreibung

Bei der aktuellen Studie handelt es sich um eine vergleichende zweiarmige Beobachtungsstudie, an der alle aufeinanderfolgenden Eierstockkrebspatientinnen während der Studiendauer sowie altersentsprechende Kontrollpersonen beteiligt sind. Der Zweck der Studie besteht darin, die Wirksamkeit des CAAb-Tests beim Nachweis von Eierstockkrebs-assoziierten Antikörpern zu bewerten.

Die Probanden werden gemäß den Einschluss- und Ausschlusskriterien auf eine mögliche Teilnahme an der Studie überprüft. Rekrutierte Patienten werden gebeten, eine Einverständniserklärung zu unterzeichnen.

Zu den Patientendaten gehören Parameter des klinischen und pathologischen Zustands der Patienten, Ergebnisse des CimTube-Kulturschritts und der Experimentierkits. Die Wirksamkeit des CAAb-Tests wird durch Bewertung der statistischen Signifikanz des verwendeten CAAb-Tests beurteilt.

Die Studie wird ein dreistufiges gruppensequenzielles Design mit zwei Zwischen- und einer Abschlussanalyse unter Verwendung der O'Brian-Fleming'-Grenzen verwenden. Bei Erreichen der Grenzwerte kann die Datenerhebung nach der ersten oder zweiten Zwischenanalyse gestoppt werden. Dies könnte die Zahl der Patienten und die Dauer der Studie erheblich verringern, während sich die maximale Zahl der Patienten nur geringfügig erhöht. (Siehe Überlegungen zur Stichprobengröße weiter unten).

Wir werden ein Verhältnis von 1:2 zwischen Krebs- und Kontrollpatienten verwenden, um die erforderliche Anzahl von Krebspatienten zu verringern, die den Hauptlimitierungsfaktor darstellt.

Der Sponsor führt nach dem ersten und zweiten Drittel der Fälle von Eierstockkrebs eine Zwischenanalyse durch und die Stichprobengröße wird entsprechend den erhaltenen Schätzungen des Mittelwerts und der Varianz des Tests in den beiden Gruppen neu berechnet.

Da die bisher gesammelten Daten nur zu Epithelzellkarzinomen stammten, wird sich unsere Studie auch auf Epithelzellkarzinome konzentrieren. Daher werden Stroma- und Keimzelltumoren, die weniger als 10 % der OC-Fälle ausmachen, auf der Grundlage der endgültigen Pathologieanalyse ausgeschlossen. Darüber hinaus machen etwa 10 % der Frauen, die sich einer Operation wegen OC unterziehen, nicht-eierstockartige Fälle aus, die fälschlicherweise mit einem Eierstockkarzinom verwechselt wurden. Diese werden basierend auf der endgültigen Pathologie ebenfalls gelöscht.

Daher werden mindestens 60 Patientinnen in die Studie aufgenommen, um die statistisch prognostizierte erforderliche Stichprobengröße von 50 Eierstockkrebsproben zu erhalten. Die Kontrollgruppe wird aus 120 Patienten bestehen.

Studienablauf

Im Krankenhaus:

Zunächst muss eine identifizierte Studienpatientin eine Einverständniserklärung unterzeichnen und ihr Zulassungsformular ausfüllen. beide sollten mit einem Barcode versehen sein.

Demografische und klinische Patientendaten aus der Krankenakte des Patienten, einschließlich Alter, Herkunftsland, Krankengeschichte und Ergebnisse durchgeführter Tests, die zur diagnostischen Beurteilung von Eierstockkrebs führen (in der Kontrollgruppe nicht relevant), werden in der entsprechenden Leiste aufgezeichnet -codierte Fallberichtsformulare vor der Studie. Die Berichte werden entweder elektronisch (auf einer speziellen und gesicherten Internetseite) oder in Papierform vorliegen. Eine gedruckte Kopie der Aufzeichnungen wird in der Abteilung aufbewahrt. Die Studie ist anonym und die Abteilung behält den Namen des Patienten, ohne ihn den Prüfärzten und dem Studiensponsor preiszugeben.

Der Studiensponsor stellt die Röhrchen und die Barcode-Etiketten zur Überwachung zur Verfügung. Der Arzt/die Krankenschwester/der Phlebotomist sammelt drei Heparin-Vakuumröhrchen (20–24 ml), beschriftet sie (mit einem Barcode) und füllt den ersten Schritt im „Proben-Follow-up-Formular“ (SFF) aus. Die Röhrchen mit dem Blut werden in einem doppelt versiegelten Behälter verpackt (wird vom Sponsor bereitgestellt). Die Abteilung wird den benannten Spediteur benachrichtigen, das Blut bis zu einer Stunde nach der Probenentnahme abzuholen.

Für jede OC-Probe werden auch zwei altersentsprechende Kontrollpersonen (+/- 3 Jahre) rekrutiert.

Transport vom Krankenhaus zum Handlinglabor:

Das Blut wird bei Raumtemperatur (18–250 °C) gemäß den einschlägigen Vorschriften zum Labor transportiert. Die Transportzeit beträgt nicht mehr als 6 Stunden. Zeiten, die in SFF aufgezeichnet werden sollen.

Im Blutverarbeitungslabor:

Das Blutverarbeitungslabor (nicht weiter als 200 km von der Entnahmestelle entfernt) isoliert PBMC (periphere mononukleäre Blutzellen) und setzt sie innerhalb von 20 Stunden nach der Probenahme (Auffüllzeit in SFF) in eine immunologische Kultur um.

Das detaillierte Protokoll und die Cimmunology-Medien werden von Lab Discoveries den teilnehmenden Laboren (sofern zutreffend) zur Verfügung gestellt. Alle Krankenhäuser in Israel senden die Blutproben an das Labor von Lab Discoveries. Nach dem Kulturschritt wird die Kulturflüssigkeit gesammelt und in entsprechend gekennzeichneten Aliquots bei -80 °C eingefroren. Die gefrorenen Proben werden für Antikörpertests an das Diagnoselabor geschickt.

Im diagnostischen Labor:

Antikörpertests wie der ELISA werden mit verschiedenen Antigenen durchgeführt. Die Proben werden auf ihre Reaktion auf die beiden in der Vergangenheit identifizierten Antigene und auf weitere neue getestet. Alle Daten werden dauerhaft direkt in einem speziellen Computer aufgezeichnet. Für jede Probe werden alle Antikörperergebnisse in die kodierte Patientenakte eingetragen. Die Ergebnisse werden von einem Statistiker mit Erfahrung in Krebspopulationsstudien analysiert.

Im Krankenhaus, nach der Operation:

2-3 Wochen nach der Operation sammelt der CRO aus der Patientenakte die Ergebnisse des Pathologielabors und alle anderen relevanten Informationen über die Art und den Zustand des Tumors, der während der Operation entfernt wurde. Diese Ergebnisse werden auf der speziellen und gesicherten Internetseite aufgezeichnet und ein gedruckter CRF-OC mit Barcode wird in der Abteilung aufbewahrt.

STATISTISCHE ÜBERLEGUNGEN

Bei der vorliegenden Studie handelt es sich um eine vergleichende zweiarmige Beobachtungsstudie, an der alle aufeinanderfolgenden Eierstockkrebspatientinnen während der Studiendauer sowie altersentsprechende Kontrollpersonen beteiligt sind. Der Hauptzweck der Studie besteht darin, die Wirksamkeit der CAAb-Tests zu bewerten. Diese Wirksamkeit wird anhand der Fisher-Distanz (oft als „Effektgröße“ bezeichnet) d gemessen, definiert als d = |m1-m2|/2. Dabei ist m1 der Mittelwert des Tests in den Kontrollen, m2 der Mittelwert in der Patientinnen mit Eierstockkrebs, |m1-m2| bezeichnet den absoluten Wert der Differenz (m1-m2) und s ist die gemeinsame Schätzung der Standardabweichung der Testverteilung in einer Gruppe (Kontrolle oder Eierstockkrebs).

Statistische Hypothese

Nullhypothese: Es gibt keinen Zusammenhang zwischen der Anwesenheit oder Abwesenheit von OC und dem CAAb, d. h. d=0

Alternative Hypothese: Die Erwartung des CAAb in der Krebspopulation unterscheidet sich von der der Kontrollpopulation, d. h. m1 ist nicht gleich m2. Da das Vorzeichen der Differenz keine Rolle spielt, ist der Test zweiseitig.

allgemeine Überlegungen

Nach unseren bisherigen Ergebnissen gehen wir davon aus

1. Die Verteilungen der Testergebnisse in jeder Gruppe liegen nahe am Normalwert oder können durch Log-Transformation in den Normalwert umgewandelt werden.
2. Die Varianz der Verteilungen in den beiden Gruppen ist ungefähr gleich
3. Da es sich hierbei um eine Pilotstudie handelt, betrachten wir die Ergebnisse als signifikant, wenn der zweiseitige p-Wert 0,1 oder weniger beträgt. Die Grenze 0,1 anstelle von 0,05 wurde gewählt, um die Wahrscheinlichkeit eines zufälligen Ausschlusses einiger potenziell informativer Tests zu verringern.

Bei der Entscheidung über die Fortsetzung der Studie wird keine Korrektur für Mehrfachvergleiche angenommen. Allerdings werden die Ergebnisse ohne und mit der Korrektur anhand des FDR-Ansatzes von Benjamini & Hochberg (Benjamini, Hochberg 1995) dargestellt.

Wo Konfidenzgrenzen angemessen sind, liegt das Konfidenzniveau bei 95 %.

Probengröße

Die Stichprobengröße wurde anhand relevanter Informationen aus unserer vorherigen Studie zu den Peptiden P3 und P1 und Eierstockkrebs berechnet. In der Literatur gibt es keine Informationen zu krebsassoziierten Antikörpern.

Die Stichprobengröße wird für ein dreistufiges sequentielles Gruppendesign mit zweiseitiger Signifikanz 0,1 und 0,05, Trennschärfe 0,8, für Krebs: Kontrollverhältnis 1:2, für D von 0,5 berechnet. Bei den Berechnungen wurden die Standardformeln für die Stichprobengröße verwendet, die für den Vergleich der Mittelwerte in zwei unabhängigen Gruppen mittels t-Test erforderlich sind. Die Korrektur für ein gruppensequenzielles Verfahren mit dem O'Bien- und Fleming-Test erhöht die Zahlen um 1,017 und 1,027 für die Signifikanzwerte 0,05 und 0,1, was für unsere Stichprobengrößen vernachlässigbar ist. (siehe C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US S. 30, Tabelle 2.4).

Die Berechnungen wurden mit der NCSS-PASS-Software durchgeführt.

Endpunktbewertung

Wirksamkeitsanalyse

Ein berechneter D zwischen 0,3 und 0,5 markiert einen Test als nicht wirksam für die alleinige Verwendung. Es kann jedoch in Kombination mit anderen Tests im Rahmen des multivariaten Testverfahrens wichtig sein. Tests mit d < 0,3 gelten als nicht wirksam. Ein Test oder eine Kombination von Tests mit d > 0,5 markiert den CAAb-Test als wirksam.