Blodprøve for ovariecancer-associerede antistoffer (CAAb)

Generel information

Antistoffer er et specifikt respons på ethvert "fremmed" antigen, og de kan normalt påvises i serumet inden for 5-7 dage efter den første eksponering for det. Der er dog nogle tilfælde, hvor der er en undertrykkelse af det specifikke immunrespons, såsom i tilfælde af en tumor. Til dato er der ingen rapporter om serumantistoffer, der er forbundet med cancer. Nogle tumorer, når de er blevet fjernet og undersøgt kirurgisk, har vist sig at have både infiltrater af T-lymfocytter og antistoffer bundet til tumorcellerne. Disse antistoffer (og andre specifikke immunresponser) antages at blive dannet på senere stadier af tumorvæksten, men selv i disse tilfælde er serumantistoffer ikke blevet rapporteret (sandsynligvis på grund af, at de for det meste "absorberes" af tumormassen) .

Da mutationerne af en normal celle, der fører til en ondartet cellemasse, involverer ændringer i cellernes struktur og funktion, kunne det antages, at immunsystemet har genkendt nogle af disse ændringer som antigene determinanter, der bør reageres imod; hvis ja, ville undertrykkelsen forårsaget af tumoren være årsagen til manglen på antistoffer.

Hvis denne immunsuppression kunne overvindes, in vitro, kan det føre til dannelsen af ​​antistoffer, der ikke kan påvises i serumet (vi kalder denne proces for cimunologi). At identificere de strukturer, som antistofferne binder til, og at lede efter en sammenhæng mellem tumorpatologien og antistoffernes specificitet - kunne give yderligere information om tumoren - via en blodprøve.

Fremtidig CAAb-test

Den cimunologibaserede test består af et in vitro-stimuleringstrin og et antistofdetektionstrin.

Analysen vil blive brugt til at finde kræftassocierede antistoffer hos ovariecancerpatienter.

Identifikation af ovariecancer-associerede antistoffer kunne give klinikeren yderligere immunologisk og antigen information vedrørende patientens tilstand eller medicinske status.

Cimmunologiprocessen består af et blodopsamlings- og behandlingstrin og en inkubationsperiode (i et særligt stimulerings-"rør" kaldet CimTube) i en fugtig, 37oC inkubator med 5% CO2.

Testen til påvisning af specifikke antistoffer er ELISA-baseret og inkluderer forskellige potentielt interessante antigener.

Den relevante medicinske og patologiske information, der skal indsamles fra patientens journal, vil muliggøre en mere detaljeret analyse af testresultaterne.

STUDIEMÅL

Primært mål:

• For at finde kræftassocierede antistoffer

Effektivitet:

• For at bestemme Cimmunologiprocessens evne til at føre til in vitro-antistofproduktion, ELISA-analysernes evne til at detektere et hvilket som helst af disse antistoffer, og at fastslå forholdet mellem ELISA-resultaterne og patientens kliniske/patologiske status. Den statistiske signifikans af CAAb-testresultaterne vil blive bestemt.

STUDIEBEFOLKNINGER OG PATIENTUDVÆLGELSE

Patienter med kræft i æggestokkene

Undersøgelsespopulationen vil omfatte forsøgspersoner, der er mistænkt og vil blive behandlet for kræft i æggestokkene, forud for enhver kirurgisk procedure eller anden anti-cancer behandling. Den kliniske mistanke omfatter en af ​​følgende: Bækkenmasse (ved bækkenundersøgelse eller andre billeddannelsesteknikker) eller høje CA-125-niveauer hos postmenopausale kvinder, ascites eller på grund af tilfældigt fund af fjernmetastaser. Den endelige analyse vil kun blive udført i forhold til patologi.

Kontrolgruppe

Kontrolgruppen vil omfatte patienter på gynækologisk afdeling (eller enhver anden passende behandlingsenhed) uden tidligere kræfthistorie.

STUDERE DESIGN

Overordnet beskrivelse

Det aktuelle studie er et sammenlignende observationsstudie med to arme, der involverer alle på hinanden følgende ovariecancerpatienter i løbet af undersøgelsens varighed og aldersmatchede kontrolpersoner. Formålet med undersøgelsen er at vurdere effektiviteten af ​​CAAb-testen til påvisning af ovariecancer-associerede antistoffer.

Forsøgspersoner vil blive screenet for potentiel deltagelse i undersøgelsen i henhold til inklusions- og eksklusionskriterierne. Patienter, der rekrutteres, vil blive bedt om at underskrive en informeret samtykkeerklæring.

Dataene om patienterne vil omfatte parametre for patienternes kliniske og patologiske tilstand, resultater af CimTube-dyrkningstrin og de eksperimentelle kits. Effektiviteten af ​​CAAb-testen vil blive vurderet ved at evaluere den statistiske signifikans af den anvendte CAAb-test.

Undersøgelsen vil bruge et tretrins gruppesekventielt design med to mellemliggende og en endelig analyse ved hjælp af O'Brian-Fleming' grænserne. Dataindsamlingen kan stoppes efter den første eller anden foreløbige analyse, hvis grænserne er nået. Dette kan reducere antallet af patienter og undersøgelsestiden væsentligt, mens det maksimale antal patienter kun øges en smule. (Se overvejelser om prøvestørrelse nedenfor).

Vi vil bruge 1:2-forholdet mellem kræft- og kontrolpatienter til at reducere det nødvendige antal kræftpatienter, hvilket er den væsentligste begrænsende faktor.

Sponsoren vil foretage en foreløbig analyse efter den første tredjedel og anden tredjedel af tilfælde af ovariecancer, og prøvestørrelsen vil blive genberegnet i henhold til de opnåede estimater af middelværdien og variansen af ​​testen i de to grupper.

Da de indsamlede data til dato kun var fra epitelcellecarcinom, vil vores undersøgelse også fokusere på epitelcellecarcinom. Derfor vil stromale og kimcelletumorer, som udgør mindre end 10 % af OC-tilfældene, blive droppet baseret på den endelige patologianalyse. Derudover omfatter ikke-ovarietilfælde, der blev forvekslet med ovariecarcinom, cirka 10 % af kvinder, der gennemgår operation for OC. Disse vil også blive droppet baseret på den endelige patologi.

Derfor vil mindst 60 patienter blive indskrevet i undersøgelsen for at opnå den statistisk forventede nødvendige prøvestørrelse på 50 ovariecancerprøver. Kontrolgruppen bliver på 120 patienter.

Studieprocedure

På hospitalet:

Først skal en identificeret undersøgelsespatient underskrive en informeret samtykkeformular, og hendes berettigelsesformular udfyldes; begge skal være stregkodede.

Patientdemografiske og kliniske oplysninger indhentet fra patientens medicinske journal, herunder alder, oprindelsesland, sygehistorie og resultater af test udført, der førte til den diagnostiske evaluering af kræft i æggestokkene (ikke relevant i kontrolgruppen) vil blive registreret på den relevante bar. -kodede, forstudie-caserapportformularer. Rapporterne vil enten være elektroniske (en dedikeret og sikret internetside) eller via en papirkopi. En papirkopi af journalerne vil blive opbevaret i afdelingen. Undersøgelsen er anonym, og afdelingen vil beholde navnet på patienten uden at afsløre det for efterforskerne og undersøgelsens sponsor.

Studiesponsoren vil levere rørene og stregkodeetiketterne til overvågning. Lægen/sygeplejersken/phlebotomist vil indsamle tre heparin-vakuumrør (20-24 ml), mærke (stregkode) dem og udfylde det indledende trin i "Sample follow-up form" (SFF). Rørene med blodet vil blive pakket i en dobbelt forseglet beholder (vil blive leveret af sponsoren). Afdelingen vil give den udpegede afsender besked om at indsamle blodet op til 1 time fra det tidspunkt, hvor det er blevet udtaget.

For hver OC-prøve vil to aldersmatchede kontroller (+/- 3 år) også blive rekrutteret.

Transport fra hospitalet til håndteringslaboratoriet:

Blodet vil blive transporteret ved stuetemperatur (18-250C), i henhold til de relevante regler, til laboratoriet. Transporttiden vil ikke være mere end 6 timer. Tider optages i SFF.

I blodhåndteringslaboratoriet:

Blodhåndteringslaboratoriet (skal ikke placeres længere end 200 km fra indsamlingsstedet) vil isolere PBMC (perifere blodmononukleære celler) og sætte dem i cimunologisk kultur inden for 20 timer fra prøveudtagningstidspunktet (påfyldningstid i SFF).

Den detaljerede protokol og cimunologimedierne vil blive leveret af Lab Discoveries til de deltagende laboratorier (hvor relevant). Alle hospitaler i Israel vil sende blodprøverne til laboratoriet på Lab Discoveries. Efter dyrkningstrinnet vil dyrkningsvæsken blive opsamlet og frosset ved -80°C i korrekt mærkede portioner. De frosne prøver vil blive sendt til det diagnostiske laboratorium for antistoftests.

I det diagnostiske laboratorium:

Antistoftests, såsom ELISA, vil blive forberedt under anvendelse af forskellige antigener. Prøverne vil blive testet for respons på de to antigener, der er blevet identificeret tidligere, og for yderligere nye. Alle data vil blive permanent registreret direkte på en dedikeret computer. For hver prøve vil alle antistofresultater blive lagt ind i den kodede patientfil. Resultaterne vil blive analyseret af en statistiker med ekspertise i kræftpopulationsstudier.

På hospitalet efter operationen:

2-3 uger efter operationen vil CRO indsamle resultaterne fra patologilaboratoriet fra patientens journal og enhver anden relevant information om arten og tilstanden af ​​den tumor, der blev fjernet under operationen. Disse resultater vil blive registreret på den dedikerede og sikrede internetside, og en trykt stregkodet CRF-OC vil blive opbevaret i afdelingen.

STATISTISKE OVERVEJELSER

Nærværende undersøgelse er et sammenlignende observationelt to-armsstudie, der involverer alle på hinanden følgende ovariecancerpatienter i løbet af undersøgelsens varighed og aldersmatchede kontrolpersoner. Hovedformålet med undersøgelsen er at vurdere effektiviteten af ​​CAAb-testene. Denne effektivitet vil blive målt ved Fishers afstand (ofte kaldet "effektstørrelse") d defineret som d = |m1-m2|/2 Hvor m1 er middelværdien af ​​testen i kontrollerne, m2 er middelværdien i ovariecancerpatienter, |m1-m2| angiver den absolutte værdi af forskellen (m1-m2), og s er det almindelige estimat for standardafvigelsen af ​​fordelingen af ​​testen i én gruppe (kontrol eller ovariecancer).

Statistisk hypotese

Nulhypotese: Der er ingen sammenhæng mellem tilstedeværelsen eller fraværet af OC og CAAb, dvs. d=0

Alternativ hypotese: Forventningen til CAAb i cancerpopulationen adskiller sig fra kontrolpopulationens forventninger, dvs. m1 er ikke lig med m2. Da forskellens tegn ikke er vigtigt, vil testen være tosidet.

Generelle betragtninger

Ifølge vores tidligere resultater antager vi det

1. Fordelingerne af testresultaterne i hver gruppe er tæt på Normal eller kan transformeres til Normal ved log-transformation.
2. Variansen af ​​fordelingerne i de to grupper er omtrent lige store
3. Med tanke på, at dette er et pilotstudie, vil vi betragte resultaterne som signifikante, hvis den tosidede p-værdi er 0,1 eller mindre. Grænsen 0,1 i stedet for 0,05 blev valgt for at mindske chancerne for tilfældig udelukkelse af nogle potentielt informative tests.

Ved beslutning om fortsættelse af undersøgelsen forudsættes der ingen korrektion for flere sammenligninger. Resultaterne vil dog blive præsenteret uden og med korrektionen ved hjælp af Benjamini & Hochbergs FDR-tilgang (Benjamini, Hochberg 1995).

Hvor konfidensgrænser er passende, vil konfidensniveauet være 95 %.

Prøvestørrelse

Prøvestørrelsen blev beregnet ved hjælp af relevant information fra vores tidligere undersøgelse af peptider P3 og P1 og ovariecancer. Der er ingen information i litteraturen vedrørende cancerassocierede antistoffer.

Prøvestørrelsen beregnes for et tretrins sekventielt gruppedesign med tosidet signifikans 0,1 og 0,05, power 0,8, for cancer: kontrolforhold 1:2, for D på 0,5. Beregningerne brugte standardformlerne for stikprøvestørrelse, der er nødvendige for sammenligning af middelværdier i to uafhængige grupper ved t-test. Korrektionen for en gruppesekventiel procedure med O'Bien og Flemings test øger tallene med 1,017 og 1,027 for signifikansværdier 0,05 og 0,1, hvilket er ubetydeligt for vores stikprøvestørrelser. (se C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 tabel 2.4).

Beregningerne blev udført ved hjælp af NCSS-PASS software.

Slutpunktsevaluering

Effektivitetsanalyse

Et beregnet D mellem 0,3 og 0,5 vil markere en test som ikke effektiv til brug alene. Det kan dog være vigtigt i kombination med andre tests som en del af den multivariate testprocedure. Test med d < 0,3 vil blive betragtet som ikke-effektive. En test eller en kombination af tests med d > 0,5 vil markere CAAB-testen som effektiv.