Analisi del sangue per anticorpi associati al cancro ovarico (CAAb)

Informazioni generali

Gli anticorpi sono una risposta specifica a qualsiasi antigene "estraneo" e di solito sono rilevabili nel siero entro 5-7 giorni dall'esposizione iniziale ad esso. Tuttavia, ci sono alcuni casi in cui vi è una soppressione della risposta immunitaria specifica, come nel caso di un tumore. Ad oggi, non ci sono segnalazioni di anticorpi sierici associati al cancro. Alcuni tumori, quando rimossi chirurgicamente e studiati, hanno dimostrato di avere sia infiltrati di linfociti T che anticorpi legati alle cellule tumorali. Si presume che questi anticorpi (e altre risposte immunitarie specifiche) si formino nelle fasi successive della crescita del tumore, tuttavia, anche in quei casi, non sono stati riportati anticorpi sierici (probabilmente perché sono per lo più "assorbiti" dalla massa tumorale) .

Poiché le mutazioni di una cellula normale che portano a una massa cellulare maligna comportano cambiamenti nella struttura e nella funzione delle cellule, si potrebbe presumere che il sistema immunitario abbia riconosciuto alcuni di questi cambiamenti come determinanti antigenici contro i quali si dovrebbe reagire; in tal caso, la soppressione causata dal tumore sarebbe la ragione della mancanza di anticorpi.

Se questa soppressione immunitaria potesse essere superata, in vitro, potrebbe portare alla formazione di anticorpi che non sono rilevabili nel siero (noi chiamiamo questo processo Cimmunology). Identificare le strutture a cui si legano gli anticorpi e cercare una correlazione tra la patologia del tumore e la specificità degli anticorpi potrebbe fornire ulteriori informazioni sul tumore attraverso un esame del sangue.

Futuro test CAAb

Il test basato sulla cimmunologia comprende una fase di stimolazione in vitro e una fase di rilevamento degli anticorpi.

Il test verrà utilizzato per trovare anticorpi associati al cancro in pazienti con carcinoma ovarico.

L'identificazione degli anticorpi associati al cancro ovarico potrebbe fornire al medico ulteriori informazioni immunologiche e antigeniche riguardanti le condizioni o lo stato medico della paziente.

Il processo Cimmunology comprende una fase di raccolta e lavorazione del sangue e un periodo di incubazione (in uno speciale "tubo" di stimolazione chiamato CimTube) in un incubatore umido a 37°C con il 5% di CO2.

Il test per la rilevazione di anticorpi specifici è basato su ELISA e comprende diversi antigeni potenzialmente interessanti.

Le informazioni mediche e patologiche rilevanti, da raccogliere dalla cartella del paziente, consentiranno un'analisi più dettagliata dei risultati del test.

OBIETTIVI DI STUDIO

Obiettivo primario:

• Per trovare anticorpi associati al cancro

Efficacia:

• Determinare la capacità del processo Cimmunology di portare alla produzione di anticorpi in vitro, la capacità dei test ELISA di rilevare uno qualsiasi di tali anticorpi e stabilire la relazione tra i risultati ELISA e lo stato clinico/patologico del paziente. Verrà determinata la significatività statistica dei risultati del test CAAb.

POPOLAZIONI DI STUDIO E SELEZIONE DEI PAZIENTI

Pazienti con carcinoma ovarico

La popolazione in studio includerà soggetti sospetti e che saranno trattati per carcinoma ovarico, prima di qualsiasi procedura chirurgica o qualsiasi altro trattamento antitumorale. Il sospetto clinico include uno dei seguenti: massa pelvica (mediante esame pelvico o altre tecniche di imaging), o alti livelli di CA-125 nelle donne in post-menopausa, ascite o a causa del ritrovamento accidentale di metastasi a distanza. L'analisi finale sarà effettuata solo in relazione alla patologia.

Gruppo di controllo

Il gruppo di controllo includerà pazienti, presso il reparto di ginecologia (o qualsiasi altra unità di cura appropriata), senza precedente storia di cancro.

PROGETTAZIONE DI STUDIO

Descrizione generale

L'attuale studio è uno studio osservazionale comparativo a due bracci, che coinvolge tutti i pazienti con carcinoma ovarico consecutivi durante la durata dello studio e soggetti di controllo di pari età. Lo scopo dello studio è valutare l'efficacia del test CAAb nel rilevare gli anticorpi associati al cancro ovarico.

I soggetti saranno selezionati per la potenziale partecipazione allo studio, secondo i criteri di inclusione ed esclusione. Ai pazienti reclutati verrà chiesto di firmare un modulo di consenso informato.

I dati sui pazienti includeranno i parametri dello stato clinico e patologico dei pazienti, i risultati della fase di coltura di CimTube e i kit sperimentali. L'efficacia del test CAAb sarà valutata valutando la significatività statistica del test CAAb utilizzato.

Lo studio utilizzerà un disegno sequenziale di gruppo in tre fasi con due analisi intermedie e una finale utilizzando i confini di O'Brian-Fleming. La raccolta dei dati può essere interrotta dopo la prima o la seconda analisi intermedia se vengono raggiunti i limiti. Ciò potrebbe ridurre sostanzialmente il numero di pazienti e il tempo dello studio, aumentando solo leggermente il numero massimo di pazienti. (Vedi Considerazioni sulla dimensione del campione di seguito).

Useremo un rapporto 1:2 tra pazienti con cancro e pazienti di controllo per ridurre il numero necessario di pazienti con cancro che è il principale fattore limitante.

Lo sponsor condurrà un'analisi ad interim, seguendo il primo terzo e il secondo terzo dei casi di carcinoma ovarico e la dimensione del campione sarà ricalcolata in base alle stime ottenute della media e della varianza del test nei due gruppi.

Poiché i dati raccolti fino ad oggi provenivano solo dal carcinoma a cellule epiteliali, il nostro studio si concentrerà anche sul carcinoma a cellule epiteliali. Pertanto, i tumori stromali ea cellule germinali, che costituiscono meno del 10% dei casi di OC, verranno eliminati in base all'analisi patologica finale. Inoltre, i casi non ovarici scambiati per carcinoma ovarico comprendono circa il 10% delle donne sottoposte a intervento chirurgico per OC. Anche questi verranno eliminati in base alla patologia finale.

Pertanto, almeno 60 pazienti saranno arruolati nello studio, al fine di ottenere la dimensione del campione necessaria statisticamente proiettata di 50 campioni di cancro ovarico. Il gruppo di controllo sarà di 120 pazienti.

Procedura di studio

Nell'ospedale:

In primo luogo, un paziente dello studio identificato deve firmare un modulo di consenso informato e il suo modulo di idoneità deve essere compilato; entrambi dovrebbero essere codificati a barre.

Le informazioni cliniche e demografiche della paziente acquisite dalla cartella clinica della paziente, inclusi età, paese di origine, anamnesi e risultati dei test effettuati che hanno portato alla valutazione diagnostica del carcinoma ovarico (non rilevanti nel gruppo di controllo) saranno registrate sull'apposita barra - moduli di segnalazione di casi pre-studio codificati. I rapporti saranno elettronici (un sito Internet dedicato e protetto) o tramite una copia cartacea. Una copia cartacea degli atti sarà conservata in reparto. Lo studio è anonimo e il Dipartimento manterrà il nome del paziente senza rivelarlo agli investigatori e allo sponsor dello studio.

Lo sponsor dello studio fornirà le provette e le etichette con codice a barre per il monitoraggio. Il medico/infermiere/flebotomo raccoglierà tre provette sottovuoto di eparina (20-24 ml), le etichetterà (codice a barre) e compilerà la fase iniziale del "Modulo di follow-up del campione" (SFF). Le provette con il sangue saranno confezionate in un doppio contenitore sigillato (sarà fornito dallo sponsor). Il dipartimento avviserà lo spedizioniere designato per raccogliere il sangue fino a 1 ora dal momento in cui è stato campionato.

Per ogni campione di OC verranno reclutati anche due controlli di pari età (+/- 3 anni).

Trasporto dall'ospedale al laboratorio di manipolazione:

Il sangue sarà trasportato a temperatura ambiente (18-250C), secondo le normative pertinenti, al laboratorio. Il tempo di trasporto non sarà superiore a 6 ore. Tempi da registrare in SFF.

Nel laboratorio di manipolazione del sangue:

Il laboratorio di manipolazione del sangue (che deve essere situato a non più di 200 km dal sito di raccolta) isolerà le PBMC (cellule mononucleate del sangue periferico) e le inserirà nella coltura di Cimmunology entro 20 ore dal momento del campionamento (tempo di riempimento in SFF).

Il protocollo dettagliato e i terreni di Cimmunology saranno forniti da Lab Discoveries ai laboratori partecipanti (ove applicabile). Tutti gli ospedali in Israele invieranno i campioni di sangue al laboratorio di Lab Discoveries. Dopo la fase di coltura, il fluido di coltura sarà raccolto e congelato a -80, in aliquote opportunamente etichettate. I campioni congelati saranno inviati al laboratorio diagnostico per i test anticorpali.

Nel laboratorio diagnostico:

I test anticorpali, come l'ELISA, saranno preparati utilizzando diversi antigeni. I campioni saranno testati per la risposta ai due antigeni che sono stati identificati in passato, e per altri nuovi. Tutti i dati verranno registrati permanentemente direttamente su un computer dedicato. Per ogni campione tutti i risultati degli anticorpi verranno inseriti nella cartella clinica codificata del paziente. I risultati saranno analizzati da uno statistico esperto in studi sulla popolazione oncologica.

In Ospedale, post intervento:

A distanza di 2-3 settimane dall'intervento, il CRO raccoglierà dalla cartella del paziente gli esiti del laboratorio di patologia e ogni altra informazione rilevante sulla natura e lo stato del tumore asportato durante l'intervento. Questi risultati saranno registrati sul sito Internet dedicato e protetto e un CRF-OC stampato con codice a barre sarà conservato presso il Dipartimento.

CONSIDERAZIONI STATISTICHE

Il presente studio è uno studio osservazionale comparativo a due bracci, che coinvolge tutti i pazienti con carcinoma ovarico consecutivi durante la durata dello studio e soggetti di controllo di pari età. Lo scopo principale dello studio è valutare l'efficacia dei test CAAb. Questa efficacia sarà misurata dalla distanza di Fisher (spesso chiamata "dimensione dell'effetto") d definita come d = |m1-m2|/2 Dove m1 è il valore medio del test nei controlli, m2 è il valore medio nel pazienti con carcinoma ovarico, |m1-m2| denota il valore assoluto della differenza (m1-m2), ed s è la stima comune della deviazione standard della distribuzione del test in un gruppo (controllo o carcinoma ovarico).

Ipotesi statistica

Ipotesi nulla: non esiste alcuna relazione tra la presenza o l'assenza di OC e il CAAb, ovvero d=0

Ipotesi alternativa: l'aspettativa del CAAb nella popolazione tumorale differisce da quella della popolazione di controllo, cioè m1 non è uguale a m2. Poiché il segno della differenza non è importante, il test sarà bilaterale.

considerazioni generali

In base ai nostri risultati precedenti, assumiamo che

1. Le distribuzioni dei risultati del test in ciascun gruppo sono vicine a Normale o possono essere trasformate in Normale mediante trasformazione logaritmica.
2. La varianza delle distribuzioni nei due gruppi è approssimativamente uguale
3. Tenendo presente che si tratta di uno studio pilota, considereremo i risultati significativi se il valore p a due code è pari o inferiore a 0,1. Il limite 0.1 invece di 0.05 è stato scelto per diminuire le possibilità di esclusione casuale di alcuni test potenzialmente informativi.

Al momento di decidere la continuazione dello studio non si assume alcuna correzione per confronti multipli. Tuttavia, i risultati saranno presentati senza e con la correzione utilizzando l'approccio FDR di Benjamini & Hochberg (Benjamini, Hochberg 1995).

Laddove i limiti di confidenza sono appropriati, il livello di confidenza sarà del 95%.

Misura di prova

La dimensione del campione è stata calcolata utilizzando le informazioni pertinenti del nostro precedente studio sui peptidi P3 e P1 e sul cancro ovarico. Non ci sono informazioni in letteratura riguardanti gli anticorpi associati al cancro.

La dimensione del campione è calcolata per un disegno di gruppo sequenziale in tre fasi con significatività bilaterale 0,1 e 0,05, potenza 0,8, per il cancro: rapporto di controllo 1:2, per D di 0,5. I calcoli hanno utilizzato le formule standard per la dimensione del campione necessarie per confrontare i valori medi in due gruppi indipendenti mediante t-test. La correzione per una procedura sequenziale di gruppo con il test di O'Bien e Fleming aumenta i numeri di 1,017 e 1,027 per i valori di significatività 0,05 e 0,1, che è trascurabile per le dimensioni del nostro campione. (vedi C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 tabella 2.4).

I calcoli sono stati eseguiti utilizzando il software NCSS-PASS.

Valutazione dell'endpoint

Analisi dell'efficacia

Un D calcolato tra 0,3 e 0,5 segnerà un test come non efficace per essere utilizzato da solo. Tuttavia, può essere importante in combinazione con altri test come parte della procedura del test multivariato. I test con d < 0,3 saranno considerati non efficaci. Un test, o una combinazione di test, con d > 0,5 segnerà il test CAAb come efficace.