Blodprov för ovariecancerassocierade antikroppar (CAAb)

Allmän information

Antikroppar är ett specifikt svar på alla "främmande" antigen, och de är vanligtvis detekterbara i serumet inom 5-7 dagar efter den första exponeringen för det. Det finns dock vissa fall där det finns ett undertryckande av det specifika immunsvaret, till exempel i fallet med en tumör. Hittills finns det inga rapporter om serumantikroppar som är associerade med cancer. Vissa tumörer har, när de avlägsnats och studerats kirurgiskt, visat sig ha både infiltrat av T-lymfocyter och antikroppar bundna till tumörcellerna. Dessa antikroppar (och andra specifika immunsvar) antas bildas i senare skeden av tumörtillväxten, men även i dessa fall har serumantikroppar inte rapporterats (troligen på grund av att de mestadels "absorberas" av tumörmassan) .

Eftersom mutationerna i en normal cell som leder till en malign cellmassa innebär förändringar i cellernas struktur och funktion, kan man anta att immunsystemet har känt igen några av dessa förändringar som antigena determinanter som man bör svara mot; i så fall skulle dämpningen orsakad av tumören vara orsaken till bristen på antikroppar.

Om denna immunsuppression kunde övervinnas, in vitro, skulle det kunna leda till bildning av antikroppar som inte är detekterbara i serumet (vi kallar denna process Cimmunology). Att identifiera strukturerna som antikropparna binder till, och leta efter en korrelation mellan tumörpatologin och antikropparnas specificitet – skulle kunna ge ytterligare information om tumören – via ett blodprov.

Framtida CAAB-test

Det cimunologibaserade testet består av ett in vitro-stimuleringssteg och ett antikroppsdetekteringssteg.

Analysen kommer att användas för att hitta cancerassocierade antikroppar hos äggstockscancerpatienter.

Identifiering av äggstockscancerassocierade antikroppar kan ge läkaren ytterligare immunologisk och antigen information om patientens tillstånd eller medicinska status.

Cimmunologiprocessen består av ett bloduppsamlings- och bearbetningssteg och en inkubationsperiod (i ett speciellt stimuleringsrör som kallas CimTube) i en fuktig, 37oC inkubator med 5 % CO2.

Testet för detektion av specifika antikroppar är ELISA-baserat och inkluderar olika potentiellt intressanta antigener.

Den relevanta medicinska och patologiska informationen, som ska samlas in från patientjournalen, kommer att möjliggöra en mer detaljerad analys av testresultaten.

STUDIEMÅL

Huvudmål:

• För att hitta cancerassocierade antikroppar

Effektivitet:

• För att bestämma förmågan hos den immunologiska processen att leda till antikroppsproduktion in vitro, förmågan hos ELISA-analyserna att detektera någon av dessa antikroppar och att fastställa sambandet mellan ELISA-resultaten och patientens kliniska/patologiska status. Den statistiska signifikansen av CAAb-testresultaten kommer att bestämmas.

STUDIEPOPULATIONER OCH PATIENTURVAL

Äggstockscancerpatienter

Studiepopulationen kommer att inkludera ämnen som misstänks och kommer att behandlas för äggstockscancer, före något kirurgiskt ingrepp eller någon annan anti-cancerbehandling. Den kliniska misstanken inkluderar något av följande: Bäckenmassa (genom bäckenundersökning eller andra bildbehandlingstekniker), eller höga CA-125-nivåer hos postmenopausala kvinnor, ascites eller på grund av tillfälliga fynd av fjärrmetastaser. Slutlig analys kommer endast att göras i relation till patologi.

Kontrollgrupp

Kontrollgruppen kommer att inkludera patienter på gynekologiavdelningen (eller någon annan lämplig vårdenhet), utan tidigare cancerhistoria.

STUDERA DESIGN

Övergripande beskrivning

Den aktuella studien är en jämförande observationsstudie med två armar, som involverar alla på varandra följande äggstockscancerpatienter under studiens varaktighet och åldersmatchade kontrollpersoner. Syftet med studien är att bedöma effektiviteten av CAAb-testet för att upptäcka äggstockscancerassocierade antikroppar.

Försökspersoner kommer att screenas för potentiellt deltagande i studien, enligt inklusions- och exkluderingskriterierna. Patienter som rekryteras kommer att uppmanas att underteckna ett informerat samtycke.

Data om patienterna kommer att inkludera parametrar för det kliniska och patologiska tillståndet hos patienterna, resultaten av CimTube-odlingssteget och de experimentella kiten. Effektiviteten av CAAb-testet kommer att bedömas genom att utvärdera den statistiska signifikansen av det använda CAAB-testet.

Studien kommer att använda en trestegs gruppsekventiell design med två interimsanalyser och en slutlig analys med O'Brian-Flemings gränser. Datainsamlingen kan stoppas efter den första eller andra interimsanalysen om gränserna nås. Detta kan avsevärt minska antalet patienter och tiden för studien, samtidigt som det maximala antalet patienter bara ökar något. (Se överväganden om provstorlek nedan).

Vi kommer att använda 1:2-förhållandet mellan cancer- och kontrollpatienter för att minska det nödvändiga antalet cancerpatienter, vilket är den främsta begränsande faktorn.

Sponsorn kommer att genomföra en interimsanalys efter den första tredje och andra tredjedelen av fall av äggstockscancer och provstorleken kommer att beräknas om enligt de erhållna uppskattningarna av medelvärdet och variansen av testet i de två grupperna.

Eftersom data som samlats in hittills endast var från epitelcellscancer, kommer vår studie också att fokusera på epitelcellscancer. Därför kommer stroma- och könscellstumörer, som utgör mindre än 10 % av OC-fallen, att tas bort baserat på den slutliga patologianalysen. Dessutom omfattar icke-äggstocksfall som förväxlades med äggstockscancer cirka 10 % av kvinnor som genomgår operation för OC. Dessa kommer också att tas bort baserat på den slutliga patologin.

Därför kommer minst 60 patienter att inkluderas i studien för att erhålla den statistiskt beräknade nödvändiga provstorleken på 50 äggstockscancerprover. Kontrollgruppen kommer att vara 120 patienter.

Studieprocedur

På sjukhuset:

Först måste en identifierad studiepatient underteckna ett informerat samtyckesformulär och hennes behörighetsformulär ifyllt; båda ska vara streckkodade.

Demografisk och klinisk information om patienten som erhållits från patientens medicinska journal, inklusive ålder, ursprungsland, sjukdomshistoria och resultat av tester gjorda som ledde till diagnostisk utvärdering av äggstockscancer (ej relevant i kontrollgruppen) kommer att registreras på lämplig bar. -kodade fallrapportformulär för förstudie. Rapporterna kommer att vara antingen elektroniska (en dedikerad och säker internetsida) eller via en papperskopia. En papperskopia av journalerna kommer att förvaras på avdelningen. Studien är anonym och avdelningen kommer att behålla patientens namn utan att avslöja det för utredarna och för studiens sponsor.

Studiesponsoren kommer att tillhandahålla rören och streckkodsetiketterna för övervakning. Läkaren/sköterskan/flebotomisten kommer att samla in tre heparinvakuumrör (20-24 ml), märka (streckkod) dem och fylla i det första steget i "Sample follow-up form" (SFF). Rören med blodet kommer att förpackas i en dubbel förseglad behållare (kommer att tillhandahållas av sponsorn). Avdelningen kommer att meddela den utsedda avsändaren att samla in blodet upp till 1 timme från det att det har tagits prov.

För varje OC-prov kommer även två åldersmatchade kontroller (+/- 3 år) att rekryteras.

Transport från sjukhuset till hanteringslabbet:

Blodet kommer att transporteras i rumstemperatur (18-250C), enligt gällande föreskrifter, till laboratoriet. Transporttiden kommer inte att vara mer än 6 timmar. Tider ska registreras i SFF.

I blodhanteringslaboratoriet:

Blodhanteringslaboratoriet (som inte finns längre än 200 km från insamlingsplatsen) kommer att isolera PBMC (Perifera blodmononukleära celler) och placera dem i Cimmunology-kultur inom 20 timmar från provtagningstiden (påfyllningstid i SFF).

Det detaljerade protokollet och Cimmunology media kommer att tillhandahållas av Lab Discoveries till de deltagande laboratorierna (i tillämpliga fall). Alla sjukhus i Israel kommer att skicka blodproverna till laboratoriet vid Lab Discoveries. Efter odlingssteget kommer odlingsvätskan att samlas upp och frysas vid -80, i korrekt märkta alikvoter. De frysta proverna kommer att skickas till diagnoslaboratoriet för antikroppstester.

I det diagnostiska laboratoriet:

Antikroppstester, såsom ELISA, kommer att förberedas med användning av olika antigener. Proverna kommer att testas för svar på de två antigener som har identifierats tidigare, och för ytterligare nya. All data kommer att registreras permanent direkt i en dedikerad dator. För varje prov kommer alla antikroppsresultat att läggas in i den kodade patientfilen. Resultaten kommer att analyseras av en statistiker med expertis inom cancerpopulationsstudier.

På sjukhuset, efter operationen:

2-3 veckor efter operationen kommer CRO att samla in resultaten från patologilabbet och all annan relevant information om arten och tillståndet för tumören som togs bort under operationen från patientens fil. Dessa resultat kommer att registreras på den dedikerade och säkrade webbplatsen och en tryckt streckkodad CRF-OC kommer att förvaras på avdelningen.

STATISTISKA ÖVERVÄGANDEN

Den aktuella studien är en jämförande observationsstudie med två armar, som involverar alla på varandra följande äggstockscancerpatienter under studiens varaktighet och åldersmatchade kontrollpersoner. Huvudsyftet med studien är att bedöma effektiviteten av CAAb-testerna. Denna effektivitet kommer att mätas med Fishers avstånd (ofta kallat "effektstorlek") d definierat som d = |m1-m2|/2 Där m1 är medelvärdet för testet i kontrollerna, m2 är medelvärdet i äggstockscancerpatienter, |m1-m2| anger det absoluta värdet av skillnaden (m1-m2), och s är den vanliga uppskattningen av standardavvikelsen för fördelningen av testet i en grupp (kontroll eller äggstockscancer).

Statistisk hypotes

Nollhypotes: Det finns inget samband mellan närvaron eller frånvaron av OC och CAAb, dvs d=0

Alternativ hypotes: Förväntningen på CAAb i cancerpopulationen skiljer sig från den hos kontrollpopulationen, dvs m1 är inte lika med m2. Eftersom skillnadens tecken inte är viktigt kommer testet att vara dubbelsidigt.

allmänna överväganden

Enligt våra tidigare resultat antar vi det

1. Fördelningen av testresultaten i varje grupp är nära Normal eller kan transformeras till Normal genom log-transformation.
2. Variansen av fördelningarna i de två grupperna är ungefär lika
3. Med tanke på att detta är en pilotstudie kommer vi att betrakta resultaten som signifikanta om det tvåsidiga p-värdet är 0,1 eller mindre. Gränsen 0,1 istället för 0,05 valdes för att minska chanserna för slumpmässig uteslutning av vissa potentiellt informativa tester.

Vid beslut om fortsättning av studien antas ingen korrigering för flera jämförelser. Resultaten kommer dock att presenteras utan och med korrigering med användning av Benjamini & Hochbergs FDR-metod (Benjamini, Hochberg 1995).

Där konfidensgränser är lämpliga kommer konfidensnivån att vara 95 %.

Provstorlek

Provstorleken beräknades med hjälp av relevant information från vår tidigare studie om peptider P3 och P1 och äggstockscancer. Det finns ingen information i litteraturen om cancerassocierade antikroppar.

Provstorleken beräknas för en trestegs sekventiell gruppdesign med tvåsidig signifikans 0,1 och 0,05, effekt 0,8, för cancer: kontrollförhållande 1:2, för D på 0,5. Beräkningarna använde standardformlerna för urvalsstorlek som krävs för jämförelse av medelvärden i två oberoende grupper genom t-test. Korrigeringen för en gruppsekventiell procedur med O'Bien och Flemings test ökar siffrorna med 1,017 och 1,027 för signifikansvärdena 0,05 och 0,1, vilket är försumbart för våra urvalsstorlekar. (se C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 tabell 2.4).

Beräkningarna gjordes med NCSS-PASS programvara.

Slutpunktsutvärdering

Effektivitetsanalys

Ett beräknat D mellan 0,3 och 0,5 kommer att markera ett test som ineffektivt för att användas ensamt. Det kan dock vara viktigt i kombination med andra tester som en del av det multivariata testförfarandet. Tester med d < 0,3 kommer att betraktas som icke-effektiva. Ett test, eller en kombination av tester, med d > 0,5 kommer att markera CAAb-testet som effektivt.