Exame de sangue para anticorpos associados ao câncer de ovário (CAAb)

Informações gerais

Os anticorpos são uma resposta específica a qualquer antígeno "estranho" e geralmente são detectáveis ​​no soro dentro de 5 a 7 dias após a exposição inicial a ele. No entanto, existem alguns casos em que há supressão da resposta imune específica, como no caso de um tumor. Até o momento, não há relatos de anticorpos séricos associados ao câncer. Alguns tumores, quando removidos cirurgicamente e estudados, mostraram ter infiltrados de linfócitos T e anticorpos ligados às células tumorais. Presume-se que esses anticorpos (e outras respostas imunes específicas) sejam formados em estágios posteriores do crescimento do tumor, no entanto, mesmo nesses casos, anticorpos séricos não foram relatados (provavelmente devido a eles serem "absorvidos" pela massa tumoral). .

Uma vez que as mutações de uma célula normal que levam a uma massa celular maligna envolvem alterações na estrutura e função das células, pode-se supor que o sistema imunológico tenha reconhecido algumas dessas alterações como determinantes antigênicos contra os quais se deve responder; se sim, então a supressão causada pelo tumor seria a razão da falta de anticorpos.

Se essa imunossupressão pudesse ser superada, in vitro, poderia levar à formação de anticorpos que não são detectáveis ​​no soro (chamamos esse processo de Cimunologia). Identificar as estruturas às quais os anticorpos se ligam e procurar uma correlação entre a patologia do tumor e a especificidade dos anticorpos - pode fornecer informações adicionais sobre o tumor - por meio de um exame de sangue.

Futuro Teste CAAb

O teste baseado em Cimunologia é composto por uma etapa de estimulação in vitro e uma etapa de detecção de anticorpos.

O ensaio será usado para encontrar anticorpos associados ao câncer em pacientes com câncer de ovário.

A identificação de anticorpos associados ao câncer de ovário pode fornecer ao clínico informações imunológicas e antigênicas adicionais sobre a condição ou estado médico da paciente.

O processo de Cimmunologia é composto por uma etapa de coleta e processamento de sangue e um período de incubação (em um "tubo" de estimulação especial chamado CimTube) em uma incubadora úmida a 37oC com 5% de CO2.

O teste para a detecção de anticorpos específicos é baseado em ELISA e inclui diferentes antígenos potencialmente interessantes.

As informações médicas e patológicas relevantes, a serem coletadas do prontuário do paciente, permitirão uma análise mais detalhada dos resultados dos exames.

OBJETIVOS DO ESTUDO

Objetivo primário:

• Para encontrar anticorpos associados ao câncer

Eficácia:

• Determinar a capacidade do processo de Cimmunologia de levar à produção de anticorpos in vitro, a capacidade dos ensaios ELISA de detectar qualquer um desses anticorpos e estabelecer a relação entre os resultados do ELISA e o estado clínico/patológico do paciente. A significância estatística dos resultados do teste CAAb será determinada.

POPULAÇÕES DE ESTUDO E SELEÇÃO DE PACIENTES

Pacientes com câncer de ovário

A população do estudo incluirá indivíduos suspeitos e que serão tratados para câncer de ovário, antes de qualquer procedimento cirúrgico ou qualquer outro tratamento anti-câncer. A suspeita clínica inclui um dos seguintes: massa pélvica (por exame pélvico ou outras técnicas de imagem), ou altos níveis de CA-125 em mulheres na pós-menopausa, ascite ou devido ao achado incidental de metástase à distância. A análise final será feita apenas em relação à patologia.

Grupo de controle

O grupo de controle incluirá pacientes, no departamento de ginecologia (ou em qualquer outra unidade de atendimento apropriada), sem história prévia de câncer.

DESIGN DE ESTUDO

Descrição geral

O estudo atual é um estudo observacional comparativo de dois braços, envolvendo todos os pacientes consecutivos com câncer de ovário durante a duração do estudo e indivíduos de controle pareados por idade. O objetivo do estudo é avaliar a eficácia do teste CAAb na detecção de anticorpos associados ao câncer de ovário.

Os sujeitos serão triados para possível participação no estudo, de acordo com os critérios de inclusão e exclusão. Os pacientes recrutados serão convidados a assinar um formulário de consentimento informado.

Os dados dos pacientes incluirão parâmetros do estado clínico e patológico dos pacientes, resultados da etapa de cultura CimTube e os kits experimentais. A eficácia do teste CAAb será avaliada pela avaliação da significância estatística do teste CAAb utilizado.

O estudo utilizará um projeto sequencial de grupo de três etapas com duas análises intermediárias e uma final usando os limites de O'Brian-Fleming. A coleta de dados pode ser interrompida após a primeira ou segunda análise intermediária se os limites forem atingidos. Isso poderia diminuir substancialmente o número de pacientes e o tempo do estudo, enquanto apenas aumentava ligeiramente o número máximo de pacientes. (Consulte as considerações sobre o tamanho da amostra abaixo).

Usaremos a proporção de 1:2 entre pacientes com câncer e controle para diminuir o número necessário de pacientes com câncer, que é o principal fator limitante.

O patrocinador conduzirá uma análise interina, seguindo o primeiro terço e o segundo terço dos casos de câncer de ovário e o tamanho da amostra será recalculado de acordo com as estimativas obtidas da média e variância do teste nos dois grupos.

Como os dados coletados até o momento foram apenas de carcinoma de células epiteliais, nosso estudo também se concentrará no carcinoma de células epiteliais. Portanto, tumores estromais e de células germinativas, que compreendem menos de 10% dos casos de OC, serão descartados com base na análise final da patologia. Além disso, casos não ovarianos que foram confundidos com carcinoma ovariano compreendem aproximadamente 10% das mulheres submetidas à cirurgia de CO. Estes também serão descartados com base na patologia final.

Portanto, pelo menos 60 pacientes serão incluídos no estudo, a fim de obter o tamanho de amostra necessário estatisticamente projetado de 50 amostras de câncer de ovário. O grupo controle será de 120 pacientes.

Procedimento do estudo

No Hospital:

Primeiro, um paciente identificado no estudo deve assinar um formulário de consentimento informado e seu Formulário de Elegibilidade preenchido; ambos devem ter código de barras.

As informações demográficas e clínicas do paciente adquiridas do arquivo médico do paciente, incluindo idade, país de origem, histórico médico e resultados dos testes realizados para a avaliação diagnóstica do câncer de ovário (não relevante no grupo de controle) serão registradas na barra apropriada formulários de relatório de caso pré-estudo codificados. Os relatórios serão eletrônicos (um site de internet dedicado e seguro) ou por meio de uma cópia impressa. Uma cópia impressa dos registros será mantida no departamento. O estudo é anônimo e o Departamento manterá o nome do paciente sem revelá-lo aos investigadores e ao patrocinador do estudo.

O Patrocinador do Estudo fornecerá os tubos e as etiquetas de código de barras para monitoramento. O médico/enfermeiro/flebotomista irá coletar três tubos de vácuo de heparina (20-24 ml), rotulá-los (código de barras) e preencher a etapa inicial do "Formulário de acompanhamento de amostra" (SFF). Os tubos com o sangue serão acondicionados em recipiente duplamente lacrado (será fornecido pelo patrocinador). O departamento notificará o expedidor designado para coletar o sangue até 1 hora a partir do momento em que foi coletado.

Para cada amostra de OC, dois controles de mesma idade (+/- 3 anos) também serão recrutados.

Transporte do Hospital para o Handling Lab:

O sangue será transportado à temperatura ambiente (18-250C), de acordo com os regulamentos pertinentes, para o laboratório. O tempo de transporte não será superior a 6 horas. Horários a serem registrados em SFF.

No laboratório de manipulação de sangue:

O laboratório de manipulação de sangue (localizado a não mais de 200 km do local de coleta) isolará PBMC (células mononucleares do sangue periférico) e as colocará em cultura de Cimunologia dentro de 20 horas a partir do momento da amostragem (tempo de preenchimento no SFF).

O protocolo detalhado e a mídia de Cimunologia serão fornecidos pela Lab Discoveries aos laboratórios participantes (quando aplicável). Todos os hospitais em Israel enviarão as amostras de sangue para o laboratório da Lab Discoveries. Após a etapa de cultura, o fluido de cultura será coletado e congelado a -80, em alíquotas devidamente identificadas. As amostras congeladas serão enviadas ao laboratório de diagnóstico para testes de anticorpos.

No laboratório de diagnóstico:

Testes de anticorpos, como ELISA, serão preparados usando diferentes antígenos. As amostras serão testadas para resposta aos dois antígenos que foram identificados no passado e para outros novos. Todos os dados serão permanentemente gravados diretamente em um computador dedicado. Para cada amostra, todos os resultados de anticorpos serão colocados no arquivo codificado do paciente. Os resultados serão analisados ​​por um estatístico com experiência em estudos populacionais de câncer.

No Hospital, pós-operatório:

2-3 semanas após a cirurgia, o CRO coletará do arquivo do paciente os resultados do laboratório de patologia e qualquer outra informação relevante quanto à natureza e estado do tumor que foi removido durante a cirurgia. Esses resultados serão registrados no site da Internet dedicado e seguro e um CRF-OC impresso com código de barras será mantido no Departamento.

CONSIDERAÇÕES ESTATÍSTICAS

O presente estudo é um estudo observacional comparativo de dois braços, envolvendo todos os pacientes consecutivos com câncer de ovário durante a duração do estudo e indivíduos de controle pareados por idade. O principal objetivo do estudo é avaliar a eficácia dos testes CAAb. Esta eficácia será medida pela distância de Fisher (muitas vezes chamada de "tamanho do efeito") d definido como d = |m1-m2|/2 Onde m1 é o valor médio do teste nos controles, m2 é o valor médio no pacientes com câncer de ovário, |m1-m2| denota o valor absoluto da diferença (m1-m2), e s é a estimativa comum do desvio padrão da distribuição do teste em um grupo (controle ou câncer de ovário).

Hipótese Estatística

Hipótese Nula: Não há relação entre a presença ou ausência de OC e o CAAb, ou seja, d=0

Hipótese alternativa: A expectativa do CAAb na população com câncer difere da população controle, ou seja, m1 não é igual a m2. Como o sinal da diferença não é importante, o teste será bilateral.

considerações gerais

De acordo com nossos resultados anteriores, assumimos que

1. As distribuições dos resultados dos testes em cada grupo são próximas do Normal ou podem ser transformadas para o Normal por transformação logarítmica.
2. A variância das distribuições nos dois grupos é aproximadamente igual
3. Tendo em vista que este é um estudo piloto, consideraremos os resultados como significativos se o valor-p bilateral for 0,1 ou menos. O limite de 0,1 em vez de 0,05 foi escolhido para diminuir as chances de exclusão aleatória de alguns testes potencialmente informativos.

Ao decidir a continuação do estudo, nenhuma correção para comparações múltiplas é assumida. No entanto, os resultados serão apresentados sem e com a correção usando a abordagem FDR de Benjamini & Hochberg (Benjamini, Hochberg 1995).

Quando os limites de confiança forem apropriados, o nível de confiança será de 95%.

Tamanho da amostra

O tamanho da amostra foi calculado usando informações relevantes de nosso estudo anterior sobre os peptídeos P3 e P1 e câncer de ovário. Não há informações na literatura sobre anticorpos associados ao câncer.

O tamanho da amostra é calculado para um projeto de grupo sequencial de três etapas com significância bilateral 0,1 e 0,05, poder 0,8, para câncer: razão de controle 1:2, para D de 0,5. Os cálculos usaram as fórmulas padrão para tamanho de amostra necessário para comparação de valores médios em dois grupos independentes pelo teste t. A correção para um procedimento sequencial de grupos com o teste de O'Bien e Fleming aumenta os números em 1,017 e 1,027 para valores de significância de 0,05 e 0,1, o que é insignificante para nossos tamanhos de amostra. (ver C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann & Hall (2000) Boca Raton FL US pp30 table 2.4).

Os cálculos foram feitos usando o software NCSS-PASS.

Avaliação de ponto final

Análise de eficácia

Um D calculado entre 0,3 e 0,5 marcará um teste como não eficaz para ser usado sozinho. No entanto, pode ser importante em combinação com outros testes como parte do procedimento de teste multivariado. Testes com d < 0,3 serão considerados ineficazes. Um teste, ou uma combinação de testes, com d > 0,5 marcará o teste CAAb como eficaz.