Silostatsoli ja sen vaikutukset meioosin uudelleen alkamiseen ihmisen munasarjassa

Yhdistetyt ehkäisypillerit (COC) ovat yleisimmin käytetty hormonaalinen ehkäisymenetelmä Yhdysvalloissa, ja vähintään 87 % lisääntymisiässä olevista naisista ilmoitti käyttävänsä ehkäisyä jossain vaiheessa elämäänsä (9). Toistuvasta käytöstä huolimatta suun kautta otettavien ehkäisypillereiden käytön keskeyttämisprosentti on kuuden ja kahdentoista kuukauden aikana 31 % ja 47 % (17), ja yleisinä keskeyttämisen syinä ovat epänormaalin verenvuodon, päänsäryn ja painonnousun sivuvaikutukset.

Lisäksi yhdistelmäehkäisytabletit ovat vasta-aiheisia tietyille naisryhmille The Centers for Disease Control Medical - kelpoisuuskriteerien (11) mukaisesti. Koska suun kautta otettavien ehkäisyvalmisteiden käyttäjiä, jotka yleensä lopettavat käytön sivuvaikutusten vuoksi tai joita ei voida käyttää taustalla olevien terveydellisten sairauksien vuoksi, on suuri esiintyvyys, on perusteltua kehittää uusia suun kautta otettavia ei-hormonaalisia menetelmiä, jotka ovat yhtä tehokkaita raskauden ehkäisyssä.

Tieteellisessä kirjallisuudessa on ollut mahdollisuus kehittää ei-hormonaalista ehkäisyä 1980-luvulta lähtien, jolloin nisäkkään munasolun gametogeneesin kriittisiä komponentteja luokiteltiin. Bornslaeger ja kollegat havaitsivat, että korkeat pitoisuudet solunsisäistä cAMP:tä, joka on monien biologisten prosessien tärkeä toissijainen sanansaattaja, estivät meioosi I:n uudelleen käynnistymisen hiiren munasoluissa (3). Myöhemmät tutkimukset osoittivat, että fosfodiesteraasi 3:n estäjät, jotka pystyivät estämään cAMP:n hajoamisen, pystyivät estämään meioosin uudelleen alkamisen in vitro viljellyissä hiiren munasoluissa (6).

1980-luvulta lähtien lisätutkimuksissa on tutkittu fosfodiesteraasi-inhibiittoreita ja niiden roolia munasolujen kypsymisen estämisessä. Tsafriri ja kollegat osoittivat, että fosfodiesteraasi-inhibiittorit pystyivät kohdistamaan vaikutuksensa selektiivisesti tyyppispesifisten isoformien kautta. Tämä tutkimus paljasti, että granulosasolut vaikuttavat tyypin 4 fosfodiesteraasi-inhibiittoreiden kautta ja munasolut reagoivat signaaleihin tyypin 3 fosfodiesteraasi-inhibiittoreiden kautta siten, että munasolujen kypsyminen estyi PDE3-estäjien läsnä ollessa, mutta ovulaatio ei vaikuttanut (15). Viimeksi Jensen ja kollegat tutkivat sekä in vitro että in vivo fosfodiesteraasi 3:n estäjän ORG 9935 vaikutuksia munasolujen kypsymiseen reesusapinoissa. Näissä eläinkokeissa havaittiin, että in vitro ORG 9935 pitoisuudessa 1,0 umol/l kykeni estämään täysin munasolujen kypsymisen (7).

In vivo -mallit osoittivat samanlaista vähentymistä munasolujen kypsymisessä, ja dramaattisin väheneminen apinoissa, joita hoidettiin pidennetyllä ORG 9935 -annosohjelmalla (200 mg/kg/d) ennen ovulaatiota (8). Lisäksi tutkittiin ORG 9935:llä käsiteltyjen makakien raskausasteita ja verrattiin verrokkeihin. Kaiken kaikkiaan PDE3-estäjillä hoidetuilla makakeilla ei havaittu tilastollisesti merkitsevää raskauden vähenemistä; kuitenkin näytti olevan näyttöä annosvasteesta, koska yksikään eläin ei tullut raskaaksi, jonka seerumin ORG 9935 -tasot olivat yli 300 nM/L (9). Selkeästä annosvasteesta huolimatta tämän tutkimuksen kirjoittajat myöntävät, että PDE3-I:llä on systeemisiä vaikutuksia, jotka ovat myös annosta rajoittavia. Suuremmilla annoksilla havaittiin haittavaikutuksia, kuten takykardiaa ja hypotensiota.

Fosfodiesteraasi 3:n estäjiä on lisäksi tutkittu in vitro munasolujen kypsymisen arvioimiseksi ihmisillä. Ihmisen munasolut, joita viljeltiin ORG 9935:n (1 um) läsnä ollessa 24 tunnin ajan, osoittivat tilastollisesti merkitsevää vähentymistä iturakkuloiden hajoamisessa (varhainen munasolun kypsymisen merkki) verrattuna kontrollioosyytteihin (12). Kuitenkaan ei ole olemassa ihmisen in vivo -malleja, jotka arvioivat munasolujen kypsymistä fosfodiesteraasi 3 -estäjähoidon jälkeen.

Silostatsoli, FDA:n hyväksymä lääke jaksottaisen kyynärtuman hoitoon, on luokan IIIa fosfodiesteraasin estäjä. Sen systeemisiä vaikutuksia ihmisillä ovat verisuonten laajeneminen, verihiutaleiden aggregaation väheneminen, triglyseridipitoisuuden lasku ja HDL-kolesterolitason nousu (4). Ihmisillä tehdyissä kliinisissä tutkimuksissa ei käsitelty hedelmällisyyttä ja raskauslukuja; valmistajan tuotemerkinnät kuitenkin raportoivat, että rotilla ei esiintynyt hedelmällisyyteen liittyviä vaikutuksia. Viimeksi kuitenkin tehtiin kaksi in vivo eläintutkimusta, joissa tutkittiin silostatsolilla käsiteltyjen hiirten tiineyden määrää (1, 10). Molemmissa näissä tutkimuksissa silostatsolilla hoidetut hiiret olivat seurannassa täysin hedelmättömiä; kuitenkin, kun lääke lopetettiin, kaikki hiiret, jotka eivät kyenneet raskaaksi silostatsolihoidon aikana, pystyivät myöhemmin saamaan normaalin pentueen koon. On tärkeää mainita, että Albarzanchin tutkimuksessa hiiret saivat PO silostatsolia annoksella 7,5 tai 15 mg PO kolmen päivän ajan (1). Li:n Kiinassa tekemässä tutkimuksessa enimmäisannos oli suurempi (300 mg/kg) (10). Raskaustulokset molemmissa tutkimuksissa olivat samat.

Nämä tutkimukset osoittavat kaksi tärkeää ehkäisymenetelmän näkökohtaa: tehon ja palautuvuuden. Lisäksi tutkijat, jotka julkaisivat Cilostazolin hedelmällisyyteen kohdistuvat vaikutukset hiirillä, julkaisivat abstraktin, joka osoittaa samanlaisen vaikutuksen sioissa (2). Kun ihmiselle annettiin 100 mg silostatsoliannos 2 kertaa ennen ovulaatiota, dokumentoituja raskauksia ei esiintynyt. Tutkimuslääkkeen lopettamisen jälkeen kaikki siat saattoivat tulla raskaaksi.

Ottaen huomioon fosfodiesteraasi-inhibiittoreiden menestys sekä in vivo- että in vitro -malleissa munasolujen kypsymisen ja raskauden estämiseksi eläinmalleissa, on järkevää, että tutkimme edelleen tätä mahdollista ei-hormonaalista oraalista ehkäisymenetelmää. Kun otetaan huomioon monet FDA:n kliiniset tutkimukset, joita on suoritettava, uusien ehkäisymenetelmien kehittäminen kestää vuosikymmeniä. Koska Cilostazol on kuitenkin hyväksytty FDA-lääke, jolla on hyväksyttävä sivuvaikutusprofiili, uskomme, että on tarkoituksenmukaista suorittaa tämän lääkkeen ensimmäiset tutkimukset ihmisillä käyttämällä makakeilla validoitua in vivo -tekniikkaa, mallia, jossa peri-ovulaation ajoitus on sama. naisilla, jotta voidaan varmistaa sen mahdollinen käyttö ei-hormonaalisena ehkäisyvälineenä.

Tutkimustutkimuksen ensisijaisena tavoitteena on selvittää, onko silostatsolia käyttävillä naisilla munasolujen kypsymisen heikkeneminen verrattuna munasarjojen follikkeliastimulaation seuranneisiin historiallisiin verrokkeihin. Tutkimuksemme tarkoituksia varten munasolujen kypsymistä arvioidaan käyttämällä profaasin I, metafaasin I ja metafaasin II munasolujen kypsymisvaiheita. Näin ollen arvioimme munarakkulasta aspiroituneiden munasolujen prosenttiosuutta kontrolloidun munasarjojen stimulaation aikana, jotka etenevät iturakkulavaiheen jälkeen (esim. GVBD) silostatsolia saaneilla naisilla ja vertaa tätä munasolujen kypsymiseen, jotka on saatu samoista naisista, joille tehtiin munasarjojen follikkeliastimulaatio aiemmin ilman tutkimuslääkettä.

Ehdotamme, että naiset, jotka saavat hoitoa FDA:n hyväksymällä annoksella 100 mg PO BID silostatsolia, osoittavat munasolujen kypsymisen heikkenemistä verrattuna munasarjojen follikkeliastimulaation jälkeisiin historiallisiin verrokkeihin.