Цилостазол и его влияние на возобновление мейоза в яичниках человека

Комбинированные оральные контрацептивы (КОК) являются наиболее часто используемой гормональной формой контроля над рождаемостью в Соединенных Штатах: не менее 87% женщин репродуктивного возраста сообщают об использовании оральных контрацептивов в какой-то момент своей жизни (9). Несмотря на их частое использование, частота прекращения приема оральных контрацептивов через шесть и двенадцать месяцев составляет 31 и 47% соответственно (17), при этом распространенными причинами прекращения являются побочные эффекты, такие как аномальное кровотечение, головная боль и увеличение веса.

Кроме того, КОК противопоказаны определенным группам женщин, как указано в Медицинских критериях пригодности Центров по контролю заболеваний (11). Учитывая высокую распространенность пользователей оральных контрацептивов, которые обычно прекращают использование оральных контрацептивов из-за побочных эффектов или которые не подходят для использования в результате основного состояния здоровья, разработка новых оральных негормональных методов, которые в равной степени эффективны для предотвращения беременности, оправдана.

Возможность разработки негормональной контрацепции упоминалась в научной литературе с 1980-х годов, когда классифицировались критические компоненты гаметогенеза ооцитов млекопитающих. Bornslaeger и коллеги обнаружили, что высокие концентрации внутриклеточного цАМФ, важного вторичного мессенджера для многих биологических процессов, ингибируют возобновление мейоза I в ооцитах мышей (3). Более поздние исследования показали, что ингибиторы фосфодиэстеразы 3, способные предотвращать распад цАМФ, способны предотвращать возобновление мейоза в мышиных ооцитах, культивируемых in vitro (6).

С 1980-х годов в дополнительных исследованиях изучались ингибиторы фосфодиэстеразы и их роль в предотвращении созревания ооцитов. Цафрири и его коллеги показали, что ингибиторы фосфодиэстеразы способны избирательно проявлять свои эффекты через типоспецифические изоформы. Это исследование показало, что клетки гранулезы проявляют эффекты через ингибиторы фосфодиэстеразы 4 типа, а ооциты реагируют на сигналы через ингибиторы фосфодиэстеразы 3 типа, так что созревание ооцитов предотвращается в присутствии ингибиторов ФДЭ3, но не влияет на овуляцию (15). Совсем недавно Дженсен и его коллеги исследовали как in vitro, так и in vivo эффекты ингибитора фосфодиэстеразы 3 ORG 9935 на созревание ооцитов у макак-резусов. В этих исследованиях на животных было обнаружено, что in vitro ORG 9935 в концентрации 1,0 мкмоль/л способен полностью ингибировать созревание ооцитов (7).

В моделях in vivo было продемонстрировано аналогичное снижение созревания ооцитов, причем наиболее резкое снижение наблюдалось у обезьян, получавших расширенный режим дозирования ORG 9935 (200 мг/кг/сутки) перед овуляцией (8). Кроме того, изучали частоту наступления беременности у макак, получавших ORG 9935, и сравнивали с контрольной группой. В целом не было статистически значимого снижения частоты наступления беременности у макак, получавших ингибитор ФДЭ3; тем не менее, по-видимому, были обнаружены доказательства реакции на дозу, поскольку ни одно животное не забеременело, у которого уровень ORG 9935 в сыворотке превышал 300 нМ/л (9). Несмотря на четкую дозозависимую реакцию, авторы этого исследования признают, что ФДЭ3-И обладают системными эффектами, которые также ограничивают дозу. При более высоких дозах наблюдались такие побочные эффекты, как тахикардия и артериальная гипотензия.

Ингибиторы фосфодиэстеразы 3 дополнительно изучались in vitro для оценки созревания ооцитов у людей. Ооциты человека, культивированные в присутствии ORG 9935 (1 мкм) в течение 24 часов, продемонстрировали статистически значимое снижение разрушения зародышевых пузырьков (ранний маркер созревания ооцитов) по сравнению с контрольными ооцитами (12). Однако не существует моделей человека in vivo, оценивающих созревание ооцитов после лечения ингибитором фосфодиэстеразы 3.

Цилостазол, одобренный FDA препарат для лечения перемежающейся хромоты, является ингибитором фосфодиэстеразы класса IIIa. Его системные эффекты у человека включают вазодилатацию, снижение агрегации тромбоцитов, снижение уровня триглицеридов и повышение уровня холестерина ЛПВП (4). Клинические испытания на людях не касались показателей фертильности и беременности; однако маркировка продукта производителя сообщает, что у крыс не наблюдалось никаких эффектов на фертильность. Однако совсем недавно были проведены два исследования на животных in vivo, в которых изучалась частота наступления беременности у мышей, получавших цилостазол (1,10). В обоих этих исследованиях было показано, что мыши, получавшие цилостазол, при последующем наблюдении полностью бесплодны; однако, как только препарат был прекращен, все мыши, которые не могли забеременеть во время лечения цилостазолом, впоследствии могли иметь беременность нормального размера помета. Важно отметить, что в исследовании Albarzanchi мыши получали перорально цилостазол в дозе 7,5 или 15 мг перорально в течение трех дней (1). В исследовании Ли, проведенном в Китае, максимальная доза была выше (300 мг/кг) (10). Исходы беременности для обоих исследований были одинаковыми.

Эти исследования демонстрируют два важных аспекта метода контрацепции: эффективность и обратимость. Кроме того, исследователи, опубликовавшие влияние цилостазола на фертильность у мышей, опубликовали реферат, демонстрирующий аналогичный эффект у свиней (2). При приеме цилостазола в дозе 100 мг два раза в день перед овуляцией документально подтвержденных беременностей не было. После прекращения приема исследуемого препарата все свиньи были способны к зачатию.

Учитывая успех ингибиторов фосфодиэстеразы в моделях как in vivo, так и in vitro для предотвращения созревания ооцитов и наступления беременности на животных моделях, разумно дальнейшее изучение этого потенциального метода негормональной оральной контрацепции. Учитывая необходимость проведения многочисленных клинических испытаний FDA, на разработку новых методов контрацепции уходят десятилетия. Однако, поскольку цилостазол является одобренным FDA лекарством с приемлемым профилем побочных эффектов, мы считаем целесообразным завершить первоначальные исследования этого препарата на людях с использованием методики in vivo, проверенной на макаках, модели с тем же временем периовуляторного периода. события как женщины, чтобы установить его возможное использование в качестве негормонального орального контрацептива.

Основная цель исследования - определить, демонстрируют ли женщины, принимающие цилостазол, нарушение созревания ооцитов по сравнению с контрольной парой в прошлом после стимуляции фолликулов яичников. Для целей нашего исследования созревание ооцитов будет оцениваться с использованием стадий созревания ооцитов профазы I, метафазы I и метафазы II. Таким образом, мы будем оценивать процент ооцитов, аспирированных из фолликулов во время контролируемой стимуляции яичников, которые выходят за пределы стадии зародышевых пузырьков (например, GVBD) у женщин, получавших цилостазол, и сравните это с созреванием ооцитов, полученных от тех же женщин, которые ранее подвергались стимуляции фолликулов яичников, не принимая исследуемый препарат.

Мы предполагаем, что у женщин, проходящих лечение одобренной FDA дозой цилостазола 100 мг перорально два раза в день, будет демонстрироваться нарушение созревания ооцитов по сравнению с парными контрольными группами после стимуляции фолликулов яичников.