5-HT7-reseptorin merkitys multippeliskleroosin tulehdusmekanismeissa (RESEPTOR 5-HT7)
RESEPTOR 5-HT7: 5-HT7-serotoniinireseptorin kiinnostus multippeliskleroosin biomarkkerina
Multippeliskleroosi on krooninen autoimmuunisairaus, johon liittyy keskushermostolle haitallinen tulehdusreaktio. Immunologinen epätasapaino liittyy Th1- ja Th17-soluihin korrelaatiossa säätelymekanismien, kuten Treg-solujen, häiriön kanssa. Vuosien tutkimuksesta huolimatta asiaan liittyvät mekanismit ovat edelleen epäselviä.
Serotoniinilla (5-HT) näyttää olevan keskeinen rooli keskushermoston tulehdussairauksien ja erityisesti MS-taudin kehittymisessä. Itse asiassa useat tutkimukset ovat osoittaneet tämän välittäjäaineen anti-inflammatorisen potentiaalin ja myös sen haavoittuvuuden tulehduksellisessa yhteydessä. Lisäksi äskettäinen tutkimus on osoittanut, että 5-HT voi vähentää CD4 T-solujen proliferaatiota ja proinflammatorisia sytokiineja, jotka vapautuvat in vitro. Mielenkiintoista on, että hoidon, hoidon SSRI:illä (selektiivinen serotoniinin takaisinoton estäjä) MS-taudin eläinmallissa kokeellisessa autoimmuunisessa enkefalomyeliitissä, osoitettiin parantavan kliinistä tulosta ja edistävän taudin remissiota.
Serotoniinireseptoreista 5-HT7-reseptoria voidaan pitää mielenkiintoisena kohteena tulehdukselliseen kontekstiin liittyvien neurologisten häiriöiden hoidossa. Tämä ihmisissä ja hiirissä esiintyvä reseptori ilmentyy useiden solujen, kuten T-lymfosyyttien, makrofagien, dendriittisolujen, sekä keskushermostosolujen, kuten hermosolujen, astrosyyttien ja mikrogliasolujen, pinnalla.
Ottaen huomioon positiivisten solujen tärkeyden 5-HT7-reseptorille multippeliskleroosissa havaitussa tulehduksellisessa yhteydessä tutkijat ehdottavat reseptorin ilmentymisen tutkimista multippeliskleroosipotilaiden verinäytteissä.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Yksityiskohtainen kuvaus
Aiemmassa translaatiotutkimuksessa (5-HT SEP) tutkittiin 5-HT7-reseptorin ilmentymisen modulaatiota immunologisen kontekstin funktiona eri MS-potilaiden ryhmissä:
- Ryhmä 1: MS-potilaat, joilla on akuutti relapsi
- Ryhmä 2: MS-potilaat, jotka ovat vakaat natalitsumabilla
- Ryhmä 3: Terveet ihmiset (Etablissement Français du Sang -yhtiöstä) Tutkijat määrittelivät eri yksilöryhmien verisoluista reseptorin ekspression prosenttiosuuden ja intensiteetin kiertävissä lymfosyyteissä virtaussytometrialla.
Tutkijat osoittivat tässä ensimmäisessä tutkimuksessa, että 5-HT7-reseptori ilmentyy pääasiassa B-lymfosyyttien pinnalla verrattuna T-lymfosyytteihin.
Mielenkiintoista on, että vaikka T-lymfosyyttien (CD4+, CD8+) prosenttiosuus pysyi muuttumattomana kolmen ryhmän välillä, tutkijat havaitsivat, että R5-HT7:n ilmentyminen T-lymfosyyttialapopulaatioiden (Th1, Th2, Th17 ja Treg) pinnalla on merkittävästi. lisääntynyt natalitsumabilla hoidettujen MS-potilaiden veressä verrattuna terveisiin henkilöihin ja MS-potilaisiin, joilla on uusiutuminen.
Ottaen huomioon kirjallisuustiedot ja alustavat tulokset, jotka osoittavat 5-HT7R-ligandin terapeuttisen potentiaalin MS-taudin eläinmalleissa sekä 5-HT7:n ilmentymisen lisääntymisen NTZ-hoidetuilla potilailla (5-HTSEP-tutkimus), tutkijat haluavat mennä pidemmälle näitä tutkimuksia. Tämän uuden translaatiotutkimuksen päätavoitteena on osoittaa 5-HT7-serotoniinireseptorin kiinnostus biomarkkerina multippeliskleroosista kärsivien potilaiden terapeuttisessa seurannassa.
Tutkijat haluavat ensin tietää, johtuuko R5-HT7:n ilmentymisen lisääntyminen stabiilien MS-potilaiden lymfosyyttipopulaatioiden pinnalla nimenomaan natalitsumabihoidosta vai aiheuttaisivatko myös muut hoidot samanlaisen vaikutuksen. Vastatakseen tähän kysymykseen tutkijat tutkivat reseptorin ilmentymistä paitsi lymfosyyttisolujen pinnalla myös monosyyttien, NK-solujen ja polymorfonukleaarisolujen (solut, joita ei tutkittu ensimmäisessä 5-HTSEP-tutkimuksessa) pinnalla kolmessa ryhmässä. henkilöistä:
- Ryhmä 1: Terveet yksilöt, ns. "kontrolli"-luovuttajat, joiden verinäytteet otetaan EFS:stä (French Blood Establishment)
- Ryhmä 2: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole taudin tulehduksellista aktiivisuutta ja joita hoidetaan tehokkaalla hoidolla (natalitsumabi tai okrelitsumabi)
- Ryhmä 3: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole tulehdussairausaktiivisuutta ja joita hoidetaan kohtalaisen tehokkaalla hoidolla (teriflunomidi tai fumaraatti)
Ryhmä 1 (terveet vapaaehtoiset) on kontrolliryhmä, joka on välttämätön tutkimuksen sujuvan sujumisen ja tulosten tulkinnan kannalta.
Ryhmässä 2 natalitsumabihoitoa on jo tutkittu edellisen 5-HTSEP-tutkimuksen aikana. Tämän uuden tutkimuksen avulla on mahdollista 1) verrata reseptorin ilmentymistä/aktiivisuutta kolmessa ryhmässä 2) tarkistaa tulosten toistettavuus edelliseen tutkimukseen verrattuna 3) arvioida mahdollisia vaihteluita, jotka liittyvät 2 veren hoidon ajalliseen kestoon. näytteet, ensimmäinen ennen natalitsumabi-injektiota, toinen 14 päivää myöhemmin. Toisin kuin 5-HTSEP-tutkimuksessa, jossa analysoitiin yksi näyte 1 kuukausi natalitsumabi-injektion jälkeen, tutkijat haluavat todellakin ottaa nämä kaksi näytettä pitkittäistutkimuksen suorittamiseksi, jonka avulla voidaan tarkkailla natalitsumabin ilmentymisen kehitystä. 5-HT7-reseptori hoidon ajankohdan funktiona.
Ryhmä 3 arvioi, voivatko muut hoidot (teriflunomidi tai fumaraatti) aiheuttaa samanlaisen vaikutuksen kuin natalitsumabihoidon jälkeen, mikä liittyy R5-HT7-ekspression lisääntymiseen lymfosyyttipopulaatioiden pinnalla stabiileilla MS-potilailla.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Orléans, Ranska, 45067
- Chu Orleans
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Miehet ja naiset
- 18-50-vuotiaat,
- Multippeliskleroosilla on jo diagnosoitu ja joka täyttää muutetut Mc Donald -kriteerit
- Stabiili (ei relapsia viimeisen 6 kuukauden aikana ja MRI alle vuoden ikäinen, ei uusia vaurioita) ja vähintään 1 vuoden natalitsumabi-, okrelitsumabi-, teriflunomidi- tai fumaraattihoidolla
- Kohde on lääketieteellisesti sopiva antamaan enintään 50 ml ylimääräistä kokoverta
- Potilas, joka on antanut suostumuksensa osallistua tutkimukseen
Poissulkemiskriteerit:
- HIV-serologia, joka tunnetaan tai löydettiin tämän jakson aikana
- Dementoitunut potilas
- Potilas, jota on hoidettu kortikosteroideilla viimeisen kuukauden aikana
- Sosiaaliturvajärjestelmään kuulumaton henkilö tai edunsaaja
- Yhteistyökyvytön potilas
- Potilas lainsuojelun, holhouksen tai huoltajan alaisuudessa
- Raskaana olevat tai imettävät naiset
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Terveet yksilöt
Ryhmä 1: Terveet yksilöt, ns. "kontrolli"-luovuttajat, joiden verinäytteet otetaan EFS:stä (French Blood Establishment)
|
Verinäytteet otetaan kolmelta ryhmältä: Ryhmä 1: Terveet vapaaehtoiset, ns. "kontrolli"-luovuttajat, joiden verinäytteitä tilataan EFS:stä (French Blood Establishment) Ryhmä 2: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole taudin tulehdusaktiivisuutta ja joita hoidetaan tehokkaalla hoidolla (natalitsumabi tai okrelitsumabi) 3: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole tulehduksellista aktiivisuutta ja joita hoidetaan kohtalaisen tehokkaalla hoidolla (teriflunomidi tai fumaraatti) |
|
Vakaat MS-potilaat, joita hoidetaan tehokkaalla hoidolla
Ryhmä 2: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole taudin tulehduksellista aktiivisuutta ja joita hoidetaan tehokkaalla hoidolla (natalitsumabi tai okrelitsumabi)
|
Verinäytteet otetaan kolmelta ryhmältä: Ryhmä 1: Terveet vapaaehtoiset, ns. "kontrolli"-luovuttajat, joiden verinäytteitä tilataan EFS:stä (French Blood Establishment) Ryhmä 2: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole taudin tulehdusaktiivisuutta ja joita hoidetaan tehokkaalla hoidolla (natalitsumabi tai okrelitsumabi) 3: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole tulehduksellista aktiivisuutta ja joita hoidetaan kohtalaisen tehokkaalla hoidolla (teriflunomidi tai fumaraatti) |
|
Vakaat MS-potilaat, joita hoidettiin kohtalaisen tehokkaalla hoidolla
Ryhmä 3: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole tulehdussairausaktiivisuutta ja joita hoidetaan kohtalaisen tehokkaalla hoidolla (teriflunomidi tai fumaraatti)
|
Verinäytteet otetaan kolmelta ryhmältä: Ryhmä 1: Terveet vapaaehtoiset, ns. "kontrolli"-luovuttajat, joiden verinäytteitä tilataan EFS:stä (French Blood Establishment) Ryhmä 2: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole taudin tulehdusaktiivisuutta ja joita hoidetaan tehokkaalla hoidolla (natalitsumabi tai okrelitsumabi) 3: Stabiilit MS-potilaat, joilla ei ole tulehduksellista aktiivisuutta ja joita hoidetaan kohtalaisen tehokkaalla hoidolla (teriflunomidi tai fumaraatti) |
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
5-HT7-reseptorin ilmentyminen kiertävissä soluissa
Aikaikkuna: Päivä 1
|
virtaussytometriatekniikalla kokoverelle suoritamme immunofenotyypityksen määrittääksemme reseptoripositiivisten solujen (5-HT7+-solut) (B-, T- ja NK-lymfosyytit, monosyytit ja polynukleaariset solut) fluoresenssin intensiteetin yksilöiden ryhmiä.
|
Päivä 1
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
5-HT7-reseptorin ilmentyminen eri solupopulaatioiden positiivisen valinnan jälkeen PBMC:stä
Aikaikkuna: Päivä 15
|
Ficoll-gradientin jälkeen osa PBMC:stä (perifeerisen veren mononukleaarisolut) tutkitaan 5-HT7-reseptorin ilmentymistä valitsemalla positiivisesti erilaisia solupopulaatioita (B-lymfosyytit, T-lymfosyytit, monosyytit) käyttämällä magneettihelmiä.
mRNA:n ilmentymisen mittaukset (R5-HT7, 5-HT-synteesientsyymi, 5-HT-kuljettaja sekä tulehduksen/autofagian markkerit) suoritetaan RT-qPCR:llä.
|
Päivä 15
|
|
5-HT7-reseptorin eri isoformien ilmentyminen PBMC:ssä
Aikaikkuna: Päivä 15
|
Ihmisillä on kolme reseptorin isoformia, jotka on saatu vaihtoehtoisella silmukoidulla, 5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d, jotka eroavat C-terminaalisen osan pituuden mukaan.
Tähän mennessä ei ole kuvattu eroja näiden isoformien välillä farmakologisesta ja transduktiopisteestä.
Olisi kuitenkin mielenkiintoista kvantifioida ne RTqPCR:llä käyttämällä mRNA:ta kaikista PBMC:istä ja sitten mRNA:ta PBMC:iden pääpopulaatioista, jotka on saatu magneettisella lajittelulla, jotta voidaan arvioida niiden osuus.
|
Päivä 15
|
|
5-HT7-reseptorin toiminnallinen aktiivisuus PBMC:ssä: proteiinitutkimukset
Aikaikkuna: Päivä 15
|
Osa PBMC:istä (perifeerisen veren mononukleaarisolut) viljellään ja stimuloidaan erilaisissa olosuhteissa: LPS-stimulaatio (lipopolysakkaridi), PHA-stimulaatio (fytohemagglutiniini), sekä stimulaatio LPS+PHA tai agonisteilla ja antagonisteilla sekä reseptorin puolueellisilla ligandeilla. .
Stimuloinnin jälkeen solusupernatantit kerätään proteiinimääritysten suorittamiseksi ELISA-tekniikalla (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).
Haluamme mitata pro- ja anti-inflammatoristen sytokiinien (IL-1β, IL-4, TNFα, IL6, IL-17, IFN-y ja IL-10 ja muut kirjallisuustietojen perusteella) tuotantoa arvioidaksemme lääkkeen vaikutusta. kolmen potilasryhmän PBMC-stimuloinnin eri olosuhteet
|
Päivä 15
|
|
5-HT7-reseptorin toiminnallinen aktiivisuus PBMC:ssä: mRNA-ilmentymistutkimukset
Aikaikkuna: Päivä 15
|
Osa PBMC:istä (perifeerisen veren mononukleaarisolut) viljellään ja stimuloidaan erilaisissa olosuhteissa: LPS-stimulaatio (lipopolysakkaridi), PHA-stimulaatio (fytohemagglutiniini), sekä stimulaatio LPS+PHA tai agonisteilla ja antagonisteilla sekä reseptorin puolueellisilla ligandeilla. .
Stimuloinnin jälkeen mRNA:n ilmentymismittaukset (R5-HT7, 5-HT-synteesientsyymi, 5-HT-kuljettaja sekä tulehduksen/autofagian markkerit) suoritetaan qPCR:llä.
|
Päivä 15
|
|
Tulehduksen multippeliskleroosihoidon ja seerumin serotoniinin tuotannon välinen suhde
Aikaikkuna: Päivä 15
|
Ficoll-gradientin jälkeen seerumi kerätään.
Serotoniinitasoja mitataan ja erilaisia pro- ja anti-inflammatorisia välittäjiä, kuten IL-1β, IL-4, TNFα, IL6, IL8, IL-17, IFN-y, GM-CSF ja IL-10 ja muita kirjallisuustietojen perusteella. tullaan tutkimaan.
|
Päivä 15
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Tutkijat
- Päätutkija: Maud PALLIX-GUYOT, Dr, Chu Orleans
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- Sacramento PM, Monteiro C, Dias ASO, Kasahara TM, Ferreira TB, Hygino J, Wing AC, Andrade RM, Rueda F, Sales MC, Vasconcelos CC, Bento CAM. Serotonin decreases the production of Th1/Th17 cytokines and elevates the frequency of regulatory CD4+ T-cell subsets in multiple sclerosis patients. Eur J Immunol. 2018 Aug;48(8):1376-1388. doi: 10.1002/eji.201847525. Epub 2018 Jun 6.
- Yuan XQ, Qiu G, Liu XJ, Liu S, Wu Y, Wang X, Lu T. Fluoxetine promotes remission in acute experimental autoimmune encephalomyelitis in rats. Neuroimmunomodulation. 2012;19(4):201-8. doi: 10.1159/000334095. Epub 2012 Mar 21.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
- Hermoston sairaudet
- Patologiset prosessit
- Autoimmuunisairaudet
- Immuunijärjestelmän sairaudet
- Demyelinisoivat autoimmuunisairaudet, keskushermosto
- Hermoston autoimmuunisairaudet
- Demyelinisoivat sairaudet
- Patologiset tilat, merkit ja oireet
- Multippeliskleroosi
- Tulehdus
- Tutkintatekniikat
- Näytteenkäsittely
- Kliiniset laboratoriotekniikat
- Diagnostiikkatekniikat ja menettelyt
- Diagnoosi
- Puhkaisut
- Kirurgiset toimenpiteet, operatiivinen
- Verinäytteen kokoelma
Muut tutkimustunnusnumerot
- CHRO-2021-07
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .