Implikacja Receptora 5-HT7 w Mechanizmach Zapalnych w Stwardnieniu Rozsianym (RESEPTOR 5-HT7)
RESEPTOR 5-HT7: Zainteresowanie receptora serotoniny 5-HT7 jako biomarkera w stwardnieniu rozsianym
Stwardnienie rozsiane jest przewlekłą chorobą autoimmunologiczną związaną z reakcją zapalną szkodliwą dla ośrodkowego układu nerwowego. Zaburzenie równowagi immunologicznej dotyczy komórek Th1 i Th17 w korelacji z zaburzeniem mechanizmów regulatorowych, takich jak komórki Treg. Pomimo wieloletnich badań, mechanizmy pozostają niejasne.
Wydaje się, że serotonina (5-HT) odgrywa zasadniczą rolę w rozwoju chorób zapalnych OUN, aw szczególności w SM. Rzeczywiście, kilka badań wykazało przeciwzapalny potencjał tego neuroprzekaźnika, a także jego wrażliwość w kontekście zapalnym. Co więcej, ostatnie badanie wykazało, że 5-HT może zmniejszać proliferację limfocytów T CD4 i uwalnianie prozapalnych cytokin in vitro. Co ciekawe, wykazano, że leczenie SSRI (selektywny inhibitor wychwytu zwrotnego serotoniny) w zwierzęcym modelu stwardnienia rozsianego na eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia poprawia wyniki kliniczne i sprzyja remisji choroby.
Wśród receptorów serotoninowych, receptor 5-HT7 można uznać za interesujący cel w leczeniu zaburzeń neurologicznych związanych z kontekstem zapalnym. Obecny u ludzi i myszy receptor ten ulega ekspresji na powierzchni wielu komórek, takich jak limfocyty T, makrofagi, komórki dendrytyczne, a także na komórkach OUN, takich jak neurony, astrocyty i mikroglej.
Biorąc pod uwagę znaczenie komórek dodatnich dla receptora 5-HT7, w kontekście zapalnym obserwowanym w stwardnieniu rozsianym, badacze proponują zbadanie ekspresji receptora w próbkach krwi od pacjenta ze stwardnieniem rozsianym.
Przegląd badań
Status
Warunki
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
W poprzednim badaniu translacyjnym (5-HT SEP) badano modulację ekspresji receptora 5-HT7 w funkcji kontekstu immunologicznego w różnych grupach pacjentów z SM:
- Grupa 1: Pacjenci ze stwardnieniem rozsianym z ostrym nawrotem
- Grupa 2: stabilni pacjenci ze stwardnieniem rozsianym leczeni natalizumabem
- Grupa 3: Zdrowi ludzie (z Etablissement Français du Sang) Z komórek krwi różnych grup osób badacze określili procent i intensywność ekspresji receptora na krążących limfocytach za pomocą cytometrii przepływowej.
Badacze wykazali w tym pierwszym badaniu, że receptor 5-HT7 ulega ekspresji głównie na powierzchni limfocytów B w porównaniu z limfocytami T.
Co ciekawe, podczas gdy odsetek limfocytów T (CD4+, CD8+) pozostał niezmieniony między trzema grupami, badacze zaobserwowali, że ekspresja R5-HT7 na powierzchni subpopulacji limfocytów T (Th1, Th2, Th17 i Treg) jest znacząco zwiększone we krwi pacjentów ze stwardnieniem rozsianym leczonych natalizumabem w porównaniu do osób zdrowych i pacjentów ze stwardnieniem rozsianym w fazie nawrotu.
Biorąc pod uwagę dane literaturowe i nasze wstępne wyniki pokazujące potencjał terapeutyczny ligandu 5-HT7R w zwierzęcych modelach SM, jak również regulację w górę ekspresji 5-HT7 u pacjentów leczonych NTZ (badanie 5-HTSEP), badacze chcą pójść dalej z te badania. Głównym celem tego nowego badania translacyjnego jest wykazanie zainteresowania receptora serotoniny 5-HT7 jako biomarkera w terapeutycznym monitorowaniu pacjentów cierpiących na stwardnienie rozsiane.
Badacze chcą najpierw wiedzieć, czy wzrost ekspresji R5-HT7 na powierzchni populacji limfocytów u stabilnych pacjentów ze stwardnieniem rozsianym jest spowodowany konkretnie leczeniem natalizumabem, czy też inne terapie również wywołałyby podobny efekt. Aby odpowiedzieć na to pytanie, badacze będą badać ekspresję receptora nie tylko na powierzchni komórek limfocytów, ale także na powierzchni monocytów, komórek NK i komórek wielojądrzastych (komórek niebadanych w pierwszym badaniu 5-HTSEP) w trzech grupach osób:
- Grupa 1: Osoby zdrowe, tak zwani „kontrolni” dawcy, których próbki krwi zostaną pobrane z EFS (Francuski Zakład Krwiodawstwa)
- Grupa 2: Pacjenci ze stabilnym stwardnieniem rozsianym bez aktywności zapalnej choroby leczeni leczeniem o wysokiej skuteczności (Natalizumab lub Okrelizumab)
- Grupa 3: Pacjenci ze stabilną postacią stwardnienia rozsianego bez aktywności choroby zapalnej leczeni umiarkowanie skutecznym leczeniem (teryflunomid lub fumaran)
Grupa 1 (zdrowi ochotnicy) to grupa kontrolna niezbędna do sprawnego przebiegu badania i interpretacji wyników.
W przypadku grupy 2 leczenie natalizumabem było już badane podczas poprzedniego badania 5-HTSEP. To nowe badanie umożliwi 1) porównanie ekspresji/aktywności receptora w trzech grupach 2) sprawdzenie powtarzalności wyników w porównaniu z poprzednim badaniem 3) ocenę wszelkich zmian związanych z czasowością leczenia 2 krwi próbki, pierwszą przed wstrzyknięciem natalizumabu, drugą 14 dni później. Rzeczywiście, w przeciwieństwie do badania 5-HTSEP, w którym analizowano pojedynczą próbkę 1 miesiąc po wstrzyknięciu natalizumabu, badacze chcą pobrać te dwie próbki w celu przeprowadzenia badania podłużnego, umożliwiającego obserwację ewolucji ekspresji receptora 5-HT7 w funkcji czasowości leczenia.
Grupa 3 oceni, czy inne terapie (teriflunomid lub fumaran) mogą wywołać efekt podobny do obserwowanego po leczeniu natalizumabem, który jest związany ze wzrostem ekspresji R5-HT7 na powierzchni populacji limfocytów u stabilnych pacjentów z SM.
Typ studiów
Zapisy (Rzeczywisty)
Kontakty i lokalizacje
Lokalizacje studiów
-
-
-
Orléans, Francja, 45067
- Chu Orleans
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
Akceptuje zdrowych ochotników
Metoda próbkowania
Badana populacja
Opis
Kryteria przyjęcia:
- Mężczyźni i kobiety
- w wieku od 18 do 50 lat,
- Ze stwardnieniem rozsianym już zdiagnozowanym i spełniającym zmodyfikowane kryteria Mc Donalda
- Stabilny (brak nawrotów w ciągu ostatnich 6 miesięcy i MRI młodszy niż rok, bez nowych zmian) i co najmniej 1 rok leczenia natalizumabem, okrelizumabem, teryflunomidem lub fumaranem
- Pacjent jest medycznie zdolny do podania maksymalnie 50 ml dodatkowej krwi pełnej
- Pacjent, który wyraził zgodę na udział w badaniu
Kryteria wyłączenia:
- Serologia HIV znana lub odkryta podczas obecnego epizodu
- Pacjent z demencją
- Pacjent leczony kortykosteroidami w ciągu ostatniego miesiąca
- Osoba niezrzeszona lub niebędąca beneficjentem systemu zabezpieczenia społecznego
- Pacjent niewspółpracujący
- Pacjent objęty ochroną prawną, kuratelą lub kuratelą
- Kobiety w ciąży lub karmiące piersią
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Osoby zdrowe
Grupa 1: Osoby zdrowe, tak zwani „kontrolni” dawcy, których próbki krwi zostaną pobrane z EFS (Francuski Zakład Krwiodawstwa)
|
Pobieranie krwi odbywać się będzie w trzech grupach: Grupa 1: Zdrowi ochotnicy, tzw. „kontrolni” dawcy, których próbki krwi zostaną zamówione w EFS (French Blood Establishment) Grupa 2: Pacjenci ze stabilnym SM bez aktywności zapalnej choroby leczeni lekami o wysokiej skuteczności (Natalizumab lub Okrelizumab) Grupa 3: Pacjenci ze stabilną postacią stwardnienia rozsianego bez aktywności choroby zapalnej leczeni umiarkowanie skutecznym leczeniem (teryflunomid lub fumaran) |
|
Stabilni pacjenci ze stwardnieniem rozsianym leczeni leczeniem o wysokiej skuteczności
Grupa 2: Pacjenci ze stabilnym stwardnieniem rozsianym bez aktywności zapalnej choroby leczeni leczeniem o wysokiej skuteczności (Natalizumab lub Okrelizumab)
|
Pobieranie krwi odbywać się będzie w trzech grupach: Grupa 1: Zdrowi ochotnicy, tzw. „kontrolni” dawcy, których próbki krwi zostaną zamówione w EFS (French Blood Establishment) Grupa 2: Pacjenci ze stabilnym SM bez aktywności zapalnej choroby leczeni lekami o wysokiej skuteczności (Natalizumab lub Okrelizumab) Grupa 3: Pacjenci ze stabilną postacią stwardnienia rozsianego bez aktywności choroby zapalnej leczeni umiarkowanie skutecznym leczeniem (teryflunomid lub fumaran) |
|
Stabilni pacjenci ze stwardnieniem rozsianym leczeni umiarkowanie skutecznym leczeniem
Grupa 3: Pacjenci ze stabilną postacią stwardnienia rozsianego bez aktywności choroby zapalnej leczeni umiarkowanie skutecznym leczeniem (teryflunomid lub fumaran)
|
Pobieranie krwi odbywać się będzie w trzech grupach: Grupa 1: Zdrowi ochotnicy, tzw. „kontrolni” dawcy, których próbki krwi zostaną zamówione w EFS (French Blood Establishment) Grupa 2: Pacjenci ze stabilnym SM bez aktywności zapalnej choroby leczeni lekami o wysokiej skuteczności (Natalizumab lub Okrelizumab) Grupa 3: Pacjenci ze stabilną postacią stwardnienia rozsianego bez aktywności choroby zapalnej leczeni umiarkowanie skutecznym leczeniem (teryflunomid lub fumaran) |
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Ekspresja receptora 5-HT7 na krążących komórkach
Ramy czasowe: Dzień 1
|
techniką cytometrii przepływowej na krwi pełnej wykonamy immunofenotypowanie w celu określenia intensywności fluorescencji komórek pozytywnych dla receptora (komórek 5-HT7+) (limfocytów B, T i NK, monocytów i komórek wielojądrzastych) w różnych grupy osobników.
|
Dzień 1
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Ekspresja receptora 5-HT7 po pozytywnej selekcji różnych populacji komórek z PBMC
Ramy czasowe: Dzień 15
|
Po gradiencie Ficoll część PBMC (komórek jednojądrzastych krwi obwodowej) zostanie wykorzystana do badania ekspresji receptora 5-HT7 poprzez pozytywną selekcję różnych populacji komórek (limfocyty B, limfocyty T, monocyty) za pomocą kulek magnetycznych.
Pomiary ekspresji mRNA (R5-HT7, enzym syntezy 5-HT, transporter 5-HT oraz markery stanu zapalnego/autofagii) zostaną przeprowadzone metodą RT-qPCR.
|
Dzień 15
|
|
Ekspresja różnych izoform receptora 5-HT7 na PBMC
Ramy czasowe: Dzień 15
|
U ludzi istnieją trzy izoformy, otrzymane przez alternatywny splicing, receptora, 5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d, które różnią się długością ich C-końcowej części.
Do tej pory nie opisano różnic między tymi izoformami z punktu farmakologicznego i transdukcyjnego.
Jednak interesujące byłoby ich ilościowe oznaczenie za pomocą RTqPCR przy użyciu mRNA z całkowitych PBMC, a następnie mRNA z głównych populacji PBMC, uzyskanych przez sortowanie magnetyczne, w celu oceny ich proporcji.
|
Dzień 15
|
|
Aktywność funkcjonalna receptora 5-HT7 na PBMC: badania białek
Ramy czasowe: Dzień 15
|
Część PBMC (komórek jednojądrzastych krwi obwodowej) będzie hodowana i stymulowana w różnych warunkach: stymulacja LPS (lipopolisacharyd), stymulacja PHA (fitohemaglutynina), zarówno stymulacja LPS+PHA, jak i agonistami i antagonistami, a także ligandami biasowymi receptora .
Po stymulacji supernatanty komórkowe zostaną pobrane w celu wykonania oznaczeń białek techniką ELISA (ang. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).
Chcemy zmierzyć produkcję cytokin pro i przeciwzapalnych (IL-1β, IL-4, TNFα, IL6, IL-17, IFN-γ i IL-10 i innych na podstawie danych literaturowych), aby ocenić wpływ różne warunki stymulacji PBMC z 3 grupy pacjentów
|
Dzień 15
|
|
Aktywność funkcjonalna receptora 5-HT7 na PBMC: badania ekspresji mRNA
Ramy czasowe: Dzień 15
|
Część PBMC (komórek jednojądrzastych krwi obwodowej) będzie hodowana i stymulowana w różnych warunkach: stymulacja LPS (lipopolisacharyd), stymulacja PHA (fitohemaglutynina), zarówno stymulacja LPS+PHA, jak i agonistami i antagonistami, a także ligandami biasowymi receptora .
Po stymulacji zostaną wykonane pomiary ekspresji mRNA (R5-HT7, enzym syntezujący 5-HT, transporter 5-HT oraz markery stanu zapalnego/autofagii) metodą qPCR.
|
Dzień 15
|
|
Związek między leczeniem stwardnienia rozsianego na stan zapalny i wytwarzanie serotoniny w surowicy
Ramy czasowe: Dzień 15
|
Po gradiencie Ficoll zostanie pobrana surowica.
Zmierzone zostaną poziomy serotoniny oraz różne mediatory pro i przeciwzapalne, takie jak IL-1β, IL-4, TNFα, IL6, IL8, IL-17, IFN-γ, GM-CSF i IL-10 i inne na podstawie danych literaturowych, zostanie zbadany.
|
Dzień 15
|
Współpracownicy i badacze
Śledczy
- Główny śledczy: Maud PALLIX-GUYOT, Dr, Chu Orleans
Publikacje i pomocne linki
Publikacje ogólne
- Sacramento PM, Monteiro C, Dias ASO, Kasahara TM, Ferreira TB, Hygino J, Wing AC, Andrade RM, Rueda F, Sales MC, Vasconcelos CC, Bento CAM. Serotonin decreases the production of Th1/Th17 cytokines and elevates the frequency of regulatory CD4+ T-cell subsets in multiple sclerosis patients. Eur J Immunol. 2018 Aug;48(8):1376-1388. doi: 10.1002/eji.201847525. Epub 2018 Jun 6.
- Yuan XQ, Qiu G, Liu XJ, Liu S, Wu Y, Wang X, Lu T. Fluoxetine promotes remission in acute experimental autoimmune encephalomyelitis in rats. Neuroimmunomodulation. 2012;19(4):201-8. doi: 10.1159/000334095. Epub 2012 Mar 21.
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
Ukończenie studiów (Rzeczywisty)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Dodatkowe istotne warunki MeSH
- Choroby Układu Nerwowego
- Procesy patologiczne
- Choroby Autoimmunologiczne
- Choroby układu odpornościowego
- Demielinizacyjne choroby autoimmunologiczne, OUN
- Choroby Autoimmunologiczne Układu Nerwowego
- Choroby demielinizacyjne
- Stany patologiczne, oznaki i objawy
- Stwardnienie rozsiane
- Zapalenie
- Techniki śledcze
- Prowadzenie okazów
- Techniki laboratoryjne kliniczne
- Techniki i procedury diagnostyczne
- Diagnoza
- Nakłucia
- Procedury chirurgiczne, operacyjny
- Zbiór okazów krwi
Inne numery identyfikacyjne badania
- CHRO-2021-07
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .