Méthylation de l'ADN et maladies thyroïdiennes auto-immunes (THYRODNA)

La thyroïdite de Hashimoto (HT) et la maladie de Graves (GD) sont connues pour être causées par une réponse immunitaire anormale contre les cellules et les tissus du soi. L'HT implique une destruction auto-immune à médiation cellulaire de la thyroïde conduisant à l'hypothyroïdie. La GD est causée par un processus au cours duquel les cellules immunitaires fabriquent des anticorps stimulants contre le récepteur de la thyréostimuline (TSH) sur la glande thyroïde, entraînant ainsi une hyperthyroïdie. Bien qu'il existe des preuves substantielles que les facteurs génétiques augmentent le risque de développer des maladies auto-immunes, les jumeaux monozygotes restent toujours discordants pour la maladie (la concordance de la maladie n'est jamais de 100%), suggérant ainsi un rôle pour les facteurs environnementaux et l'épigénétique.

L'épigénétique est un nouveau domaine de la biologie qui étudie les mécanismes par lesquels l'environnement interagit avec le génotype pour produire une variété de phénotypes par le biais de modifications de la chromatine qui ne modifient pas directement la séquence d'ADN. Ces modifications ont été associées à une expression génique altérée et à l'extinction d'éléments répétitifs et peuvent être héritées de manière mitotique. Les mécanismes épigénétiques comprennent la méthylation de l'ADN, les modifications des histones ou la régulation post-transcriptionnelle des miARN. La méthylation de l'ADN implique l'addition covalente d'un groupe méthyle à la position carbone-5 dans le dinucléotide CpG à partir du donneur de méthyle S-adénosylméthionine et est médiée par un groupe d'enzymes appelées ADN méthyltransférases (DNMT). Les dinucléotides CpG sont généralement regroupés dans des régions appelées CGI (îlots). Les CGI peuvent être trouvés dans les régions promotrices des gènes, et la méthylation CpG de ces promoteurs de gènes est associée au silençage transcriptionnel. En revanche, les gènes hyperméthylés se sont avérés actifs sur le plan de la transcription.

Jusqu'à présent, un nombre très limité d'études épigénétiques ont été publiées chez des patients atteints d'HT et de GD. Par conséquent, le but de cette étude est d'analyser l'état de méthylation de l'ADN dans les globules blancs (WBC) dans les régions promotrices des sites génomiques qui ont été précédemment identifiés comme des loci de susceptibilité ou des sites pour les maladies thyroïdiennes auto-immunes, telles que le CD40L, FOXP3, CTLA4 , PTPN22, IL2RA, FCRL3 et HLADRB1.

Dans un premier temps, le recrutement des patients et des témoins ainsi que la collecte des échantillons sanguins seront effectués. Un examen physique complet sera également effectué chez tous les participants inclus dans l'étude, et un historique personnel, familial, gestationnel et périnatal détaillé sera également obtenu avant l'inclusion. Des échantillons de sang de tous les participants seront prélevés et centrifugés, puis les globules blancs (WBC), le plasma et le sérum seront séparés et stockés dans un congélateur.

Les analyses de laboratoire suivront. L'ADN sera isolé des leucocytes périphériques à l'aide du kit QIAamp DNA Blood Mini, conformément aux instructions du fabricant. Il sera ensuite traité avec du bisulfite de sodium à l'aide du kit Zymo EZ DNA Methylation-Gold, toujours selon le protocole du fabricant. Par conséquent, les cytosines non méthylées seront converties en uracyles, tandis que les cytosines méthylées resteront inchangées. La quantification de l'état de méthylation de l'ADN au niveau des régions promotrices du gène à l'étude sera effectuée, à l'aide d'amorces spécifiques qui détectent l'ADN modifié, par PCR en temps réel et analyse des courbes de fusion des fragments d'ADN sélectionnés. Les amplicons seront également analysés par électrophorèse et visualisés par trans-illumination ultraviolette.

Une base de données électronique sera construite et une analyse statistique suivra. Les résultats et les conclusions seront publiés dans des revues à comité de lecture et présentés lors de réunions internationales.