Metilación del ADN y enfermedades tiroideas autoinmunes (THYRODNA)

Se sabe que la tiroiditis de Hashimoto (HT) y la enfermedad de Graves (GD) son causadas por una respuesta inmune anormal contra las células y tejidos propios. La TH implica una destrucción autoinmune mediada por células de la tiroides que conduce al hipotiroidismo. La EG es causada por un proceso en el que las células inmunitarias producen anticuerpos estimulantes contra el receptor de la hormona estimulante de la tiroides (TSH) en la glándula tiroides, lo que lleva al hipertiroidismo. Aunque existe evidencia sustancial de que los factores genéticos aumentan el riesgo de desarrollar enfermedades autoinmunes, los gemelos monocigóticos siguen siendo discordantes para la enfermedad (la concordancia de la enfermedad nunca es del 100%), lo que sugiere un papel de los factores ambientales y la epigenética.

La epigenética es un campo novedoso de la biología que estudia los mecanismos por los cuales el ambiente interactúa con el genotipo para producir una variedad de fenotipos a través de modificaciones en la cromatina que no alteran directamente la secuencia del ADN. Estas modificaciones se han asociado con expresión génica alterada y silenciamiento de elementos repetitivos y pueden heredarse mitóticamente. Los mecanismos epigenéticos incluyen la metilación del ADN, las modificaciones de histonas o la regulación postranscripcional de miARN. La metilación del ADN implica la adición covalente de un grupo metilo a la posición del carbono 5 en el dinucleótido CpG del donante de metilo S-adenosilmetionina y está mediada por un grupo de enzimas llamadas ADN metiltransferasas (DNMT). Los dinucleótidos CpG normalmente se agrupan en regiones conocidas como CGI (islas). Los CGI se pueden encontrar en las regiones promotoras de los genes, y la metilación CpG de estos promotores genéticos está asociada con el silenciamiento transcripcional. Por el contrario, se ha descubierto que los genes hipermetilados son transcripcionalmente activos.

Hasta el momento se ha publicado un número muy limitado de estudios epigenéticos en pacientes con HTA y EG. Por lo tanto, el propósito de este estudio es analizar el estado de metilación del ADN en los glóbulos blancos (WBC) dentro de las regiones promotoras de los sitios genómicos que se han identificado previamente como loci o sitios de susceptibilidad para la enfermedad tiroidea autoinmune, como el CD40L, FOXP3, CTLA4 , genes PTPN22, IL2RA, FCRL3 y HLADRB1.

Inicialmente, se realizará el reclutamiento de pacientes y controles, así como la recolección de muestras de sangre. También se realizará un examen físico completo a todas las participantes incluidas en el estudio, y se obtendrá una historia personal, familiar, gestacional y perinatal detallada antes de su inclusión. Las muestras de sangre de todos los participantes se recolectarán y centrifugarán y luego los glóbulos blancos (WBC), el plasma y el suero se separarán y almacenarán en un congelador profundo.

Los análisis de laboratorio seguirán. El ADN se aislará de los leucocitos periféricos utilizando el QIAamp DNA Blood Mini Kit, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Luego se tratará con bisulfito de sodio usando el Zymo EZ DNA Methylation-Gold Kit, nuevamente de acuerdo con el protocolo del fabricante. Por lo tanto, las citosinas no metiladas se convertirán en uracilos, mientras que las citosinas metiladas permanecerán sin cambios. Se realizará la cuantificación del estado de metilación del ADN en las regiones promotoras del gen en estudio, utilizando cebadores específicos que detectan ADN modificado, mediante PCR en tiempo real y análisis de las curvas de fusión de los fragmentos de ADN seleccionados. Los amplicones también se analizarán mediante electroforesis y se visualizarán mediante transiluminación ultravioleta.

Se construirá una base de datos electrónica y se seguirá con el análisis estadístico. Los resultados y las conclusiones se publicarán en revistas revisadas por pares y se presentarán en reuniones internacionales.