Metilazione del DNA e malattie autoimmuni della tiroide (THYRODNA)

È noto che la tiroidite di Hashimoto (HT) e la malattia di Graves (GD) sono causate da una risposta immunitaria anormale contro cellule e tessuti self. L'HT comporta una distruzione autoimmune cellulo-mediata della tiroide che porta all'ipotiroidismo. La GD è causata da un processo in cui le cellule immunitarie producono anticorpi stimolanti contro il recettore dell'ormone stimolante la tiroide (TSH) sulla ghiandola tiroidea, portando così all'ipertiroidismo. Sebbene vi siano prove sostanziali che i fattori genetici aumentino il rischio di sviluppare malattie autoimmuni, i gemelli monozigoti rimangono ancora discordanti per malattia (la concordanza della malattia non è mai del 100%), suggerendo così un ruolo per i fattori ambientali e l'epigenetica.

L'epigenetica è un nuovo campo della biologia che studia i meccanismi mediante i quali l'ambiente interagisce con il genotipo per produrre una varietà di fenotipi attraverso modifiche alla cromatina che non alterano direttamente la sequenza del DNA. Queste modifiche sono state associate all'espressione genica alterata e al silenziamento di elementi ripetitivi e possono essere ereditate mitoticamente. I meccanismi epigenetici includono la metilazione del DNA, le modifiche dell'istone o la regolazione post-trascrizionale del miRNA. La metilazione del DNA comporta l'aggiunta covalente di un gruppo metilico alla posizione del carbonio-5 nel dinucleotide CpG dal donatore di metile S-adenosilmetionina ed è mediata da un gruppo di enzimi chiamati DNA metiltransferasi (DNMT). I dinucleotidi CpG sono tipicamente raggruppati in regioni note come CGI (isole). I CGI possono essere trovati nelle regioni promotrici dei geni e la metilazione CpG di questi promotori genici è associata al silenziamento trascrizionale. Al contrario, i geni ipermetilati sono risultati trascrizionalmente attivi.

Finora è stato pubblicato un numero molto limitato di studi epigenetici su pazienti con HT e GD. Pertanto, lo scopo di questo studio è analizzare lo stato di metilazione del DNA nei globuli bianchi (WBC) all'interno delle regioni del promotore dei siti genomici che sono stati precedentemente identificati come loci di suscettibilità o siti per la malattia autoimmune della tiroide, come CD40L, FOXP3, CTLA4 geni , PTPN22, IL2RA, FCRL3 e HLADRB1.

Inizialmente, verrà effettuato il reclutamento di pazienti e controlli, nonché la raccolta di campioni di sangue. Verrà inoltre eseguito un esame fisico completo in tutti i partecipanti inclusi nello studio e prima dell'inclusione sarà ottenuta anche una dettagliata storia personale, familiare, gestazionale e perinatale. I campioni di sangue di tutti i partecipanti saranno raccolti e centrifugati, quindi i globuli bianchi (globuli bianchi), il plasma e il siero saranno separati e conservati in un congelatore.

Seguiranno analisi di laboratorio. Il DNA sarà isolato dai leucociti periferici utilizzando il kit QIAamp DNA Blood Mini, secondo le istruzioni del produttore. Verrà quindi trattato con bisolfito di sodio utilizzando il kit Zymo EZ DNA Methylation-Gold, sempre secondo il protocollo del produttore. Pertanto, le citosine non metilate saranno convertite in uracil, mentre le citosine metilate rimarranno invariate. Verrà effettuata la quantificazione dello stato di metilazione del DNA nelle regioni del promotore genico oggetto di studio, utilizzando primer specifici che rilevano il DNA modificato, mediante PCR in tempo reale e analisi delle curve di melting dei frammenti di DNA selezionati. Gli ampliconi saranno anche analizzati mediante elettroforesi e visualizzati mediante transilluminazione ultravioletta.

Verrà costruito un Data Base elettronico e seguirà l'Analisi Statistica. Risultati e Conclusioni saranno pubblicati su riviste peer-review e presentati in Incontri Internazionali.