Метилирование ДНК и аутоиммунные заболевания щитовидной железы (THYRODNA)

Известно, что тиреоидит Хашимото (ГТ) и болезнь Грейвса (БГ) вызываются аномальным иммунным ответом против собственных клеток и тканей. ГТ включает клеточно-опосредованное аутоиммунное разрушение щитовидной железы, ведущее к гипотиреозу. БГ вызывается процессом, при котором иммунные клетки вырабатывают стимулирующие антитела против рецептора тиреотропного гормона (ТТГ) в щитовидной железе, что приводит к гипертиреозу. Хотя имеются существенные доказательства того, что генетические факторы увеличивают риск развития аутоиммунных заболеваний, монозиготные близнецы по-прежнему остаются дискордантными по заболеванию (конкордантность по заболеванию никогда не бывает 100%), что предполагает роль факторов окружающей среды и эпигенетики.

Эпигенетика — это новая область биологии, изучающая механизмы, с помощью которых окружающая среда взаимодействует с генотипом, создавая различные фенотипы посредством модификаций хроматина, которые не изменяют напрямую последовательность ДНК. Эти модификации связаны с измененной экспрессией генов и молчанием повторяющихся элементов и могут наследоваться митотически. Эпигенетические механизмы включают метилирование ДНК, модификации гистонов или посттранскрипционную регуляцию микроРНК. Метилирование ДНК включает ковалентное добавление метильной группы к положению углерода-5 в динуклеотиде CpG из донора метила S-аденозилметионина и опосредуется группой ферментов, называемых ДНК-метилтрансферазами (DNMT). Динуклеотиды CpG обычно сгруппированы в области, известные как CGI (островки). CGI можно найти в промоторных областях генов, и CpG-метилирование промоторов этих генов связано с молчанием транскрипции. Напротив, было обнаружено, что гиперметилированные гены транскрипционно активны.

До сих пор было опубликовано очень ограниченное количество эпигенетических исследований у пациентов с АГ и БГ. Таким образом, целью данного исследования является анализ статуса метилирования ДНК в лейкоцитах (лейкоцитах) в промоторных областях геномных сайтов, которые ранее были идентифицированы как локусы или сайты предрасположенности к аутоиммунным заболеваниям щитовидной железы, такие как CD40L, FOXP3, CTLA4. , гены PTPN22, IL2RA, FCRL3 и HLADRB1.

Первоначально будет проведен набор пациентов и контролей, а также сбор образцов крови. Всем участникам, включенным в исследование, также будет проведено полное физическое обследование, и перед включением будет получен подробный личный, семейный, гестационный и перинатальный анамнез. Образцы крови всех участников будут собраны и центрифугированы, а затем лейкоциты (лейкоциты), плазма и сыворотка будут разделены и сохранены в морозильной камере.

Лабораторные анализы будут позже. ДНК будет выделена из периферических лейкоцитов с помощью набора QIAamp DNA Blood Mini Kit в соответствии с инструкциями производителя. Затем он будет обработан бисульфитом натрия с использованием набора Zymo EZ DNA Methylation-Gold, опять же в соответствии с протоколом производителя. Следовательно, неметилированные цитозины будут превращаться в урацилы, тогда как метилированные цитозины останутся неизменными. Будет проведена количественная оценка статуса метилирования ДНК в исследуемых областях промотора гена с использованием специфических праймеров, обнаруживающих модифицированную ДНК, методом ПЦР в реальном времени и анализом кривых плавления выбранных фрагментов ДНК. Ампликоны также будут проанализированы с помощью электрофореза и визуализированы с помощью ультрафиолетового транслюминирования.

Будет создана электронная база данных, после чего будет проведен статистический анализ. Результаты и выводы будут опубликованы в рецензируемых журналах и представлены на международных встречах.