DNA-methylatie en auto-immuunziekten van de schildklier (THYRODNA)

Van Hashimoto Thyroiditis (HT) en de ziekte van Graves (GD) is bekend dat ze worden veroorzaakt door een abnormale immuunrespons tegen eigen cellen en weefsels. HT omvat een celgemedieerde auto-immuunvernietiging van de schildklier die leidt tot hypothyreoïdie. GD wordt veroorzaakt door een proces waarbij immuuncellen stimulerende antilichamen maken tegen de thyroïdstimulerend hormoon (TSH)-receptor op de schildklier, wat leidt tot hyperthyreoïdie. Hoewel er substantieel bewijs is dat genetische factoren het risico op het ontwikkelen van auto-immuunziekten vergroten, blijven monozygote tweelingen nog steeds dissonant voor ziekte (ziekteconcordantie is nooit 100%), wat suggereert dat er een rol is weggelegd voor omgevingsfactoren en epigenetica.

Epigenetica is een nieuw gebied van de biologie dat de mechanismen bestudeert waarmee de omgeving interageert met het genotype om een ​​verscheidenheid aan fenotypes te produceren door modificaties aan chromatine die de DNA-sequentie niet direct veranderen. Deze modificaties zijn in verband gebracht met veranderde genexpressie en het tot zwijgen brengen van repetitieve elementen en kunnen mitotisch worden overgeërfd. Epigenetische mechanismen omvatten DNA-methylatie, histon-modificaties of miRNA post-transcriptionele regulatie. DNA-methylering omvat de covalente toevoeging van een methylgroep aan de koolstof-5-positie in het CpG-dinucleotide van de methyldonor S-adenosylmethionine en wordt gemedieerd door een groep enzymen die DNA-methyltransferasen (DNMT's) worden genoemd. CpG-dinucleotiden zijn typisch gegroepeerd in regio's die bekend staan ​​als CGI's (eilanden). CGI's kunnen worden gevonden in de promotorregio's van genen, en CpG-methylering van deze genpromotors wordt geassocieerd met transcriptionele silencing. Daarentegen is gevonden dat gehypermethyleerde genen transcriptioneel actief zijn.

Tot dusver is een zeer beperkt aantal epigenetische onderzoeken gepubliceerd bij patiënten met HT en GD. Daarom is het doel van deze studie het analyseren van de DNA-methylatiestatus in witte bloedcellen (WBC's) binnen de promotorregio's van genomische locaties die eerder zijn geïdentificeerd als gevoeligheidsloci of locaties voor auto-immuunziekte van de schildklier, zoals de CD40L, FOXP3, CTLA4. , PTPN22-, IL2RA-, FCRL3- en HLADRB1-genen.

In eerste instantie zullen patiënten en controles worden geworven en zullen bloedmonsters worden afgenomen. Er zal ook een volledig lichamelijk onderzoek worden uitgevoerd bij alle deelnemers die aan het onderzoek deelnemen, en er zal ook een gedetailleerde persoonlijke, familiale, zwangerschaps- en perinatale geschiedenis worden verkregen voordat ze worden opgenomen. Bloedmonsters van alle deelnemers worden verzameld en gecentrifugeerd en vervolgens worden witte bloedcellen (WBC's), plasma en serum gescheiden en opgeslagen in een diepvriezer.

Laboratoriumanalyses volgen. DNA wordt geïsoleerd uit perifere leukocyten met behulp van de QIAamp DNA Blood Mini Kit, volgens de instructies van de fabrikant. Vervolgens wordt het behandeld met natriumbisulfiet met behulp van de Zymo EZ DNA Methylation-Gold Kit, opnieuw volgens het protocol van de fabrikant. Daarom zullen niet-gemethyleerde cytosines worden omgezet in uracylen, terwijl gemethyleerde cytosines onveranderd blijven. Kwantificering van de methylatiestatus van DNA in de genpromotorregio's die worden bestudeerd, zal worden gemaakt met behulp van specifieke primers die gemodificeerd DNA detecteren, door middel van real-time PCR en analyse van de smeltkrommen van de geselecteerde DNA-fragmenten. Amplicons zullen ook worden geanalyseerd door elektroforese en gevisualiseerd door ultraviolette trans-belichting.

Er zal een elektronische databank worden aangelegd en statistische analyse zal volgen. De resultaten en conclusies zullen worden gepubliceerd in vaktijdschriften en worden gepresenteerd tijdens internationale bijeenkomsten.