DNAメチル化と自己免疫性甲状腺疾患 (THYRODNA)

橋本甲状腺炎 (HT) とバセドウ病 (GD) は、自己の細胞や組織に対する異常な免疫応答によって引き起こされることが知られています。 HT は、甲状腺の細胞性自己免疫破壊を伴い、甲状腺機能低下症を引き起こします。 GD は、免疫細胞が甲状腺の甲状腺刺激ホルモン (TSH) 受容体に対する刺激抗体を作るプロセスによって引き起こされ、甲状腺機能亢進症を引き起こします。 遺伝的要因が自己免疫疾患を発症するリスクを高めるという実質的な証拠がありますが、一卵性双生児は依然として疾患に関して不一致のままであり (疾患の一致は決して 100% ではありません)、環境要因とエピジェネティクスの役割を示唆しています。

エピジェネティクスは、環境が遺伝子型と相互作用して、DNA 配列を直接変化させないクロマチンの修飾を通じてさまざまな表現型を生成するメカニズムを研究する生物学の新しい分野です。 これらの修飾は、遺伝子発現の変化と反復要素のサイレンシングに関連しており、有糸分裂的に継承される可能性があります。 エピジェネティックなメカニズムには、DNA メチル化、ヒストン修飾、または miRNA 転写後調節が含まれます。 DNA メチル化は、メチル供与体である S-アデノシルメチオニンからの CpG ジヌクレオチドの炭素 5 位へのメチル基の共有結合による付加を伴い、DNA メチルトランスフェラーゼ (DNMT) と呼ばれる酵素群によって媒介されます。 CpG ジヌクレオチドは通常、CGI (島) として知られる領域にグループ化されます。 CGI は遺伝子のプロモーター領域に見られ、これらの遺伝子プロモーターの CpG メチル化は転写サイレンシングに関連しています。 対照的に、高メチル化遺伝子は転写活性があることがわかっています。

これまでのところ、HT および GD 患者を対象とした非常に限られた数のエピジェネティック研究が発表されています。 したがって、この研究の目的は、CD40L、FOXP3、CTLA4 などの自己免疫性甲状腺疾患の感受性遺伝子座または部位として以前に同定されたゲノム部位のプロモーター領域内の白血球 (WBC) の DNA メチル化状態を分析することです。 、PTPN22、IL2RA、FCRL3、およびHLADRB1遺伝子。

最初に、患者とコントロールの募集、および血液サンプルの収集が行われます。 研究に含まれるすべての参加者に対して完全な身体検査も実施され、詳細な個人、家族、妊娠および周産期の病歴も含まれる前に取得されます。 すべての参加者からの血液サンプルが収集され、遠心分離された後、白血球 (WBC)、血漿、および血清が分離され、急速冷凍庫に保存されます。

研究室での分析が続きます。 製造元の指示に従って、QIAamp DNA Blood Mini Kit を使用して末梢白血球から DNA を分離します。 その後、再び製造元のプロトコルに従って、Zymo EZ DNA Methylation-Gold Kit を使用して亜硫酸水素ナトリウムで処理します。 したがって、非メチル化シトシンはウラシルに変換されますが、メチル化シトシンは変化しません。 研究中の遺伝子プロモーター領域での DNA のメチル化状態の定量化は、改変された DNA を検出する特定のプライマーを使用して、リアルタイム PCR および選択された DNA 断片の融解曲線の分析によって行われます。 アンプリコンも電気泳動によって分析され、紫外線透過照明によって視覚化されます。

電子データベースが構築され、統計分析が続きます。 結果と結論は査読ジャーナルに掲載され、国際会議で発表されます。