Organes endommagés par la septicémie-double-marqueurs Identification de la défaillance d'un organe à l'aide de l'analyse de suivi des nanoparticules fluorescentes

Contexte : La septicémie, définie comme un dysfonctionnement organique potentiellement mortel en raison d'une réponse dérégulée de l'hôte à l'infection, continue d'être une source de morbidité et de mortalité considérables. 19 millions de cas sont observés dans le monde chaque année. De nombreux modèles animaux de septicémie avaient montré que la septicémie induisait une défaillance multiviscérale. L'ubiquitination, l'autophagie, l'apoptose peuvent impliquer le processus de défaillance multiviscérale liée à la septicémie. Les études de protéomique basées sur la spectrométrie de masse dans les populations cliniques et dans les modèles animaux de rongeurs et de mammifères avaient commencé par la découverte de nombreux nouveaux biomarqueurs de la septicémie. Des ésoxomes retrouvés dans le sang ou les urines présentaient le signal de l'autophagie et de l'apoptose. Récemment, l'analyse de suivi des nanoparticules (NTA) a été utilisée comme nouvelle méthode d'analyse directe et en temps réel des exosomes. Celles-ci permettent d'étudier les biomarqueurs des exosomes pour analyser les patients septiques présentant une défaillance multiviscérale.

Objectifs de l'étude : Cette recherche sera la première étude non seulement à mettre en place des macrophages co-cultivés avec des modèles de cellules d'organes humains pour les sécrétions d'exosomes, mais également à collecter des exosomes purifiés dans le sang et l'urine de patients septiques. Études de protéomique dans les exosomes de culture cellulaire et d'échantillons cliniques. Analysez les biomarqueurs liés à l'ubiquitination, à l'autophage et à l'apoptose des exosomes par la bioinformatique. Utilisez NTA pour mettre en place de nouvelles méthodes de diagnostic, pour juger des lésions organiques spécifiques d'un patient septique par des biomarqueurs d'autophagie-apoptose exosomes.

Matériels et Méthodes : En 1ère année, des macrophages stimulés par du LPS (lipopolysaccharide) co-cultivés avec des cellules d'organes humains seront mis en place. Les exosomes seront isolés et purifiés à partir de différents groupes. ScFv (fragments d'anticorps à chaîne unique) sera sélectionné pour bloquer la transmission des exosomes liés à l'infection. La 2ème année, un total de 60 patients infectés et avec des résultats de culture positifs seront inclus, dont 30 patients septiques ont eu au moins une défaillance d'organe, les autres n'auront qu'une infection. Tous les patients inclus et classés selon les critères de sepsis-3. Les échantillons cliniques seront prélevés d'août 2017 à juillet 2019. L'exosome sera isolé et purifié. La purification par billes magnétiques, l'électrophorèse sur gel 2D, le MALDI-TOF et la bioinformatique seront utilisés pour analyser la protéomique des exosomes et l'association de marqueurs spécifiques d'organes, d'autophagie et de marqueurs d'apoptose. Western blot sera fait pour prouver les protéines trouvées par la protéomique. Le réseau de cytokines dans le sang confirme et corrèle également à l'autophagie. Enfin, nous utiliserons l'analyse de suivi des nanoparticules avec identification de marqueurs doubles pour comprendre les sous-populations d'exosomes de biomarqueurs spécifiques d'organes et d'autophagie-apoptose.

Effet possible : L'établissement systématique de la protéomique des exosomes dans le milieu de co-culture et les échantillons cliniques de septicémie sera effectué. Étude in vitro, l'exploration de ScFv aidera à bloquer l'absorption des exsomes comme méthode thérapeutique possible. Des biomarqueurs d'ubiquitination-autophagie-apoptose dans les exosomes seront détectés et corrélés à une défaillance d'organe spécifique dans le sepsis. Le processus inflammatoire sera également validé par l'analyse des cytokines. L'identification des marqueurs doubles NTA sera une méthode intelligente pour comprendre les sous-populations d'exosomes.