Validation des interleukines et d'autres cytokines avec l'imagerie OCT pour l'évaluation rapide de la kératite infectieuse (VICTORIA)

Les processus infectieux ou inflammatoires de la cornée (kératite) sont courants et menacent la vision. Elles sont la 5ème cause de cécité et surtout les kératites infectieuses sont responsables de 2 000 000 de nouveaux yeux aveugles par an (dans le monde). Généralement, la présence et la nature des agents pathogènes bactériens sont déterminées en prélevant des égratignures sur la cornée, une coloration de Gram ultérieure et l'examen de cultures microbiologiques. Des problèmes majeurs dans la prise de décision thérapeutique posent la longue durée de culture bactérienne pour la détection des agents pathogènes (environ une semaine), une sensibilité relativement faible et des résistances bactériennes de plus en plus fréquentes aux agents antibiotiques.

Dans de petites études antérieures, la tomographie par cohérence optique (OCT) combinée à l'analyse des cytokines lacrymales s'est avérée utile pour distinguer les différents agents pathogènes responsables de la kératite. Ces études semblent changer la donne dans le domaine des tests rapides de kératite. Cependant, le problème de ces études est la petite taille de l'échantillon et l'utilisation d'équipements partiellement obsolètes.

Évaluation des avantages/risques Bien qu'il n'y ait aucun avantage direct pour les sujets participants, les résultats de l'étude peuvent aider à mieux comprendre l'évolution de la kératite et pourraient encore améliorer les utilités diagnostiques dans la gestion de la maladie.

Aucun autre médicament n'est utilisé dans cette étude. Les résultats de la présente étude pourraient aider à établir une meilleure compréhension de la kératite et pourraient permettre une thérapie plus rapide et ciblée. Toutes les techniques de mesure appliquées sont indolores.

Ainsi, le rapport bénéfice/risque semble acceptable.

Objectifs de l'étude

Primaire:

• Comparaison des différences de taux de TNF-alpha dans le film lacrymal (pg/ml) entre les bactéries Gram+ et Gram- provoquant des kératites (test z pour échantillons non appariés).

Secondaire:

• Développer un algorithme qui devrait aider à distinguer les différents agents pathogènes responsables de la kératite en utilisant les niveaux de cytokines et les résultats de l'OCT. Cette partie de l'étude sera expérimentale (régression partielle des moindres carrés et régression des parcelles forestières aléatoires)
• Niveaux d'IL-1alpha, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alpha dans la kératite
• Constatations morphologiques en tomographie par cohérence optique : épaisseur cornéenne (µm), épaisseur de l'infiltrat (µm), réflectivité de l'infiltrat (niveau de gris, où 0 est noir et 255 est blanc).

Conception : essai prospectif monocentrique Les participants seront recrutés dans les ambulances de la clinique universitaire Kepler, ophtalmologie, Linz, Autriche. Au total, 392 patients seront inclus dans cette étude. Puissance visée : seuil de signification de 0,8 après correction de Bonferroni pour 7 variables explicatives (7 cytokines différentes) : 0,07 Valeurs utilisées (TNF alpha 2) : Groupe 1 : 18,8 (26,36) et Groupe 2 : 50,12 (103,83) Paramètres Résultats Puissance 0,800 alpha 0,007 Moyenne (Groupe 1) 18,8 Moyenne (Groupe 2) 50,12 Std. écart (Groupe 1) 26,36 Std. écart (Groupe 2) 103,83 Taille de l'échantillon 1 146 Taille de l'échantillon 2 146 Puissance (obtenue) 0,798 Pour corriger une erreur d'arrondi potentielle (puissance calculée 0,798), un cas doit être ajouté à chaque groupe.

Bien qu'il n'y ait pas de suivi de l'étude, l'investigateur s'attend toujours à un taux d'abandon de 30 % pour la raison suivante : comme publié précédemment, 67 % de toutes les biopsies cornéennes aboutissent à une culture positive. 13 Dans les cas où la culture ne donne pas de résultats positifs, le patient devra être exclu de l'analyse.

Par conséquent, l'investigateur inclura 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 yeux -> 392 yeux L'analyse des données n'est possible que si la biopsie cornéenne est positive (un agent pathogène responsable de la kératite est trouvé). Par conséquent, l'investigateur s'attend à ce qu'environ 30 % des patients ne soient pas inclus dans l'analyse. Dans ces cas, les images OCT seront toujours évaluées, mais l'échantillon de film lacrymal sera soit éliminé selon le protocole des déchets tissulaires, soit si l'ophtalmologiste enquêteur s'attend à un type de kératite non infectieuse (comme un ulcère neurotrophique), la cytokine une quantification sera effectuée.

Techniques de mesure CASIA 2 (Tomey, Japon) est un biomètre ss-OCT qui permet une imagerie haute résolution du segment antérieur de l'œil.

Prélèvement de larmes et analyse des cytokines Les échantillons seront prélevés par lavage conjonctival de l'œil affecté sans anesthésie topique. Une solution saline normale stérile sera perfusée à température ambiante dans le sac conjonctival inférieur en tirant doucement sur la paupière inférieure et avec une seringue à insuline sans aiguille. Après quelques secondes, le liquide de lavage sera réaspiré dans la même seringue sans que la seringue ne touche la conjonctive. Ensuite, l'échantillon sera stocké à -80° Celsius jusqu'à ce que tous les échantillons soient collectés. Comme mentionné dans ces échantillons, où la biopsie cornéenne était négative, ils seront soit éliminés, soit (si l'ophtalmologie s'attend à un type de kératite non infectieux) encore analysés. Par conséquent, le liquide conjonctival des seringues sera mis en commun et centrifugé dans une centrifugeuse (400xg pendant 10 min à 4°C). Les surnageants seront analysés à l'aide du kit de test multiplex pro-inflammatoire de Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, USA) pour les niveaux des cytokines et chimiokines suivantes : IL-1alpha, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alpha. Quatre-vingts échantillons seront analysés en même temps.