Walidacja interleukin i innych cytokin wraz z obrazowaniem OCT w celu szybkiej oceny zakaźnego zapalenia rogówki (VICTORIA)

Zakaźne lub zapalne procesy rogówki (zapalenie rogówki) są częste i zagrażają widzeniu. Są piątą najczęstszą przyczyną ślepoty, a zwłaszcza zakaźne zapalenie rogówki jest odpowiedzialne za 2 000 000 nowych ślepych oczu rocznie (na całym świecie). Powszechnie obecność i charakter patogenów bakteryjnych określa się poprzez pobranie rys z rogówki, następnie barwienie metodą Grama i badanie posiewów mikrobiologicznych. Głównymi problemami w podejmowaniu decyzji terapeutycznych są długi czas hodowli bakterii do wykrywania patogenów (około tygodnia), stosunkowo niska czułość i coraz częstsze występowanie oporności bakterii na antybiotyki.

W niewielkich wcześniejszych badaniach optyczna koherentna tomografia (OCT) połączona z analizą cytokin łzowych okazała się pomocna w rozróżnianiu różnych patogenów powodujących zapalenie rogówki. Badania te wydają się być przełomem w dziedzinie szybkich testów na zapalenie rogówki. Problemem tych badań jest jednak mała liczebność próby i wykorzystanie częściowo przestarzałej aparatury.

Ocena stosunku korzyści do ryzyka Chociaż nie ma bezpośrednich korzyści dla uczestników badania, wyniki badania mogą pomóc uzyskać lepszy wgląd w przebieg zapalenia rogówki i mogą jeszcze bardziej udoskonalić narzędzia diagnostyczne w leczeniu chorób.

W tym badaniu nie stosuje się żadnych dodatkowych leków. Wyniki niniejszego badania mogą pomóc w lepszym zrozumieniu zapalenia rogówki i mogą umożliwić szybszą i ukierunkowaną na cel terapię. Wszystkie stosowane techniki pomiarowe są bezbolesne.

Stosunek ryzyka do korzyści wydaje się zatem akceptowalny.

Cele studiów

Podstawowy:

• Porównanie różnic poziomów TNF-alfa w filmie łzowym (pg/ml) między bakteriami Gram+ i Gram- powodującymi zapalenie rogówki (test z dla próbek niesparowanych).

Wtórny:

• Opracowanie algorytmu, który powinien pomóc w rozróżnieniu różnych patogenów powodujących zapalenie rogówki na podstawie poziomów cytokin i wyników OCT. Ta część badań będzie miała charakter eksperymentalny (regresja cząstkowych najmniejszych kwadratów i regresja losowych powierzchni leśnych)
• Poziomy IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alfa w zapaleniu rogówki
• Wyniki morfologiczne w optycznej koherentnej tomografii: grubość rogówki (µm), grubość nacieku (µm), współczynnik odbicia nacieku (poziom szarości, gdzie 0 to czerń, a 255 to biel).

Projekt: Prospektywne jednoośrodkowe badanie Uczestnicy będą rekrutowani z karetek kliniki okulistycznej Uniwersytetu Keplera, Linz, Austria. Do tego badania zostanie włączonych łącznie 392 pacjentów. Docelowa moc: poziom istotności 0,8 po korekcie Bonferroniego dla 7 zmiennych objaśniających (7 różnych cytokin): 0,07 Użyte wartości (TNF alfa 2): Grupa 1: 18,8 (26,36) i Grupa 2: 50,12 (103,83) Parametry Wyniki Moc 0,800 alfa 0,007 Średnia (Grupa 1) 18,8 Średnia (Grupa 2) 50,12 Std. odchylenie (Grupa 1) 26,36 Std. odchylenie (Grupa 2) 103,83 Liczebność próby 1 146 Liczebność próby 2 146 Moc (uzyskana) 0,798 W celu skorygowania potencjalnego błędu zaokrąglenia (moc obliczeniowa 0,798) do każdej grupy należy dodać jeden przypadek.

Chociaż nie będzie żadnych dalszych badań, badacz nadal oczekuje, że wskaźnik rezygnacji wyniesie 30% z następującego powodu: Jak opublikowano wcześniej, 67% wszystkich biopsji rogówki daje posiew pozytywny. 13 W przypadkach, gdy posiew nie daje pozytywnych wyników, pacjent będzie musiał zostać wykluczony z analizy.

Dlatego badacz uwzględni 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 oczy -> 392 oczy Analiza danych jest możliwa tylko w przypadku pozytywnego wyniku biopsji rogówki (wykryto patogen wywołujący zapalenie rogówki). Dlatego badacz spodziewa się, że około 30% pacjentów nie zostanie włączonych do analizy. W takich przypadkach obrazy OCT będą nadal oceniane, ale próbka filmu łzowego zostanie usunięta zgodnie z protokołem dotyczącym odpadów tkankowych lub jeśli prowadzący badanie okulista spodziewa się niezakaźnego typu zapalenia rogówki (takiego jak wrzód neurotroficzny), cytokiny zostanie przeprowadzona kwantyfikacja.

Techniki pomiarowe CASIA 2 (Tomey, Japonia) to biometr ss-OCT, który umożliwia obrazowanie przedniego odcinka oka w wysokiej rozdzielczości.

Pobieranie próbek łez i analiza cytokin Próbki zostaną pobrane przez płukanie spojówki chorego oka bez znieczulenia miejscowego. Sterylna sól fizjologiczna zostanie wprowadzona w temperaturze pokojowej do dolnego worka spojówkowego poprzez delikatne odciągnięcie dolnej powieki i bezigłową strzykawką insulinową. Po kilku sekundach płyn popłuczynowy zostanie zassany z powrotem do tej samej strzykawki bez dotykania spojówki. Następnie próbka będzie przechowywana w temperaturze -80°C do momentu zebrania wszystkich próbek. Jak wspomniano w tych próbkach, w przypadku których biopsja rogówki była ujemna, zostaną albo usunięte, albo (jeśli okuliści spodziewają się niezakaźnego zapalenia rogówki) nadal będą analizowane. Dlatego płyn spojówkowy ze strzykawek zostanie zebrany i odwirowany w wirówce (400xg przez 10 min w 4°C). Supernatanty będą analizowane przy użyciu zestawu prozapalnego multipleksowego testu firmy Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, USA) pod kątem poziomów następujących cytokin i chemokin: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Jednocześnie analizowanych będzie osiemdziesiąt próbek.