Az interleukinek és más citokinek validálása OCT képalkotással együtt a fertőző keratitisz gyors felméréséhez (VICTORIA)

A szaruhártya fertőző vagy gyulladásos folyamatai (keratitis) gyakoriak, és veszélyeztetik a látást. Ők a vakság 5. vezető okai, és különösen a fertőző keratitis okozza évente 2 000 000 új vak szemét (világszerte). Általában a bakteriális kórokozók jelenlétét és természetét a szaruhártya karcolásával, majd Gram-festéssel és mikrobiológiai tenyészetek vizsgálatával határozzák meg. A terápiás döntéshozatalban a fő problémákat a kórokozók kimutatására szolgáló baktériumtenyésztés hosszú időtartama (körülbelül egy hét), a viszonylag alacsony érzékenység és az antibiotikumokkal szembeni egyre gyakoribb bakteriális rezisztencia jelenti.

Kisebb korábbi vizsgálatokban az optikai koherencia tomográfia (OCT) a könny citokinek elemzésével kombinálva megállapították, hogy támogatják a keratitist okozó különböző kórokozók megkülönböztetését. Úgy tűnik, hogy ezek a tanulmányok megváltoztatják a keratitis gyorstesztjének területén. E vizsgálatok problémája azonban a kis mintaszám és a részben elavult berendezések használata.

Előny/kockázat értékelése Bár nincs közvetlen haszon a részt vevő alanyok számára, a vizsgálat eredményei segíthetnek jobban betekintést nyerni a keratitis lefolyásába, és tovább javíthatják a diagnosztikai lehetőségeket a betegségkezelésben.

Ebben a vizsgálatban nem használtak további gyógyszert. A jelen tanulmány eredményei segíthetnek a keratitis jobb megértésében, és gyorsabb és célorientált terápiát tesznek lehetővé. Minden alkalmazott mérési technika fájdalommentes.

Így a kockázat/haszon arány elfogadhatónak tűnik.

Tanulmányi célok

Elsődleges:

• A könnyfilmben (pg/ml) lévő TNF-alfa szintkülönbségek összehasonlítása a keratitist okozó Gram+ és Gram- baktériumok között (z teszt nem páros minták esetén).

Másodlagos:

• Olyan algoritmus kidolgozása, amely segít a keratitist okozó különböző kórokozók megkülönböztetésében citokinszintek és OCT-lelet alapján. A tanulmány ezen része kísérleti jellegű (részleges legkisebb négyzetek regressziós és regressziós véletlenszerű erdőrészletei)
• Az IL-1alfa, IL-1béta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alfa szintjei keratitisben
• Morfológiai eredmények optikai koherencia tomográfiában: szaruhártya vastagsága (µm), infiltrátum vastagsága (µm), infiltrátum reflexiós képessége (szürke szint, ahol 0 a fekete és 255 a fehér).

Tervezés: Prospektív egyközpontú vizsgálat A résztvevőket a Kepler Egyetem, Linz, Ausztria Szemészeti Klinika mentőautóiból toborozzák. Összesen 392 beteg vesz részt ebben a vizsgálatban. Célzott teljesítmény: 0,8 szignifikanciaszint Bonferroni-korrekció után 7 magyarázó változóra (7 különböző citokin): 0,07 Felhasznált értékek (TNF alfa 2): 1. csoport: 18,8 (26,36) és 2. csoport: 50,12 (103,83) Paraméterek Eredmények Teljesítmény 0,800 alfa 0,007 Átlag (1. csoport) 18,8 Átlag (2. csoport) 50,12 Szt. eltérés (1. csoport) 26,36 Std. eltérés (2. csoport) 103,83 Mintanagyság 1 146 Minta mérete 2 146 Teljesítmény (megszerzett) 0,798 Egy lehetséges kerekítési hiba kijavításához (számított teljesítmény 0,798) minden csoporthoz hozzá kell adni egy esetet.

Bár a vizsgálatot nem követik nyomon, a vizsgáló továbbra is 30%-os lemorzsolódásra számít a következő okok miatt: Amint azt korábban közzétettük, az összes szaruhártya-biopszia 67%-a pozitív tenyészetet eredményez. 13 Azokban az esetekben, amikor a tenyésztés nem ad pozitív eredményt, a beteget ki kell zárni az elemzésből.

Ezért a vizsgáló 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 szem -> 392 szem Az adatok elemzése csak akkor lehetséges, ha a szaruhártya biopszia pozitív (keratitist okozó kórokozó található). Ezért a vizsgáló arra számít, hogy a betegek megközelítőleg 30%-a nem kerül be az elemzésbe. Ezekben az esetekben az OCT-képeket továbbra is kiértékelik, de a könnyfilmmintát vagy a szövethulladék protokollja szerint ártalmatlanítják, vagy ha a vizsgáló szemész nem fertőző típusú keratitisre (például neurotróf fekélyre) számít, a citokin. számszerűsítésre kerül sor.

Mérési technikák A CASIA 2 (Tomey, Japán) egy ss-OCT biométer, amely lehetővé teszi a szem elülső szegmensének nagy felbontású képalkotását.

Könnymintavétel és citokinanalízis A mintákat az érintett szem kötőhártya-öblítésével veszik, helyi érzéstelenítés nélkül. A steril normál sóoldatot szobahőmérsékleten infundáljuk az alsó kötőhártya-tasakba az alsó szemhéj óvatos lehúzásával és egy tű nélküli inzulinfecskendővel. Néhány másodperc múlva az öblítőfolyadékot visszaszívják ugyanabba a fecskendőbe anélkül, hogy a fecskendő hozzáérne a kötőhártyához. Ezt követően a mintát -80°C-on tárolják az összes minta összegyűjtéséig. Amint az említett mintákban említettük, ahol a szaruhártya biopszia negatív volt, vagy megsemmisítik, vagy (ha a szemészet nem fertőző típusú keratitisre számít) továbbra is elemzik. Ezért a fecskendőkből származó kötőhártya-folyadékot egyesítik, és centrifugában centrifugálják (400xg 10 percig 4 °C-on). A felülúszókat a Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, USA) proinflammatorikus multiplex vizsgálati készletével elemzik a következő citokinek és kemokinek szintjére: IL-1alfa, IL-1béta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Nyolcvan minta elemzésére egyidejűleg kerül sor.