Validação de interleucinas e outras citocinas junto com a imagem OCT para avaliação rápida de ceratite infecciosa (VICTORIA)

Processos infecciosos ou inflamatórios da córnea (ceratite) são comuns e ameaçam a visão. Eles são a 5ª principal causa de cegueira e, especialmente, a ceratite infecciosa é responsável por 2.000.000 novos olhos cegos por ano (em todo o mundo). Comumente, a presença e a natureza dos patógenos bacterianos são determinadas por arranhões da córnea, posterior coloração de Gram e exame de culturas microbiológicas. Os principais problemas na tomada de decisões terapêuticas são a longa duração da cultura bacteriana para detecção de patógenos (aproximadamente uma semana), sensibilidade relativamente baixa e resistências bacterianas cada vez mais frequentes aos agentes antibióticos.

Em pequenos estudos anteriores, a tomografia de coerência óptica (OCT) combinada com a análise de citocinas lacrimais foi útil na distinção entre diferentes patógenos que causam ceratite. Esses estudos parecem ser um divisor de águas no campo dos testes rápidos para ceratite. No entanto, o problema desses estudos é um pequeno tamanho amostral e o uso de equipamentos parcialmente desatualizados.

Avaliação de benefício/risco Embora não haja benefício direto para os indivíduos participantes, os resultados do estudo podem ajudar a obter mais informações sobre o curso da ceratite e melhorar ainda mais as utilidades diagnósticas no manejo da doença.

Não há medicação adicional utilizada neste estudo. Os achados do presente estudo podem ajudar a estabelecer uma melhor compreensão da ceratite e permitir uma terapia mais rápida e direcionada. Todas as técnicas de medição aplicadas são indolores.

Assim, a relação risco/benefício parece ser aceitável.

Objetivos do estudo

Primário:

• Comparação das diferenças dos níveis de TNF-alfa no filme lacrimal (pg/ml) entre as bactérias Gram+ e Gram- causadoras de ceratite (teste z para amostras não pareadas).

Secundário:

• Desenvolver um algoritmo que ajude a distinguir entre diferentes patógenos que causam ceratite usando níveis de citocinas e achados de OCT. Esta parte do estudo será experimental (regressão de mínimos quadrados parciais e gráficos de floresta aleatória de regressão)
• Níveis de IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alfa na ceratite
• Achados morfológicos na tomografia de coerência óptica: espessura da córnea (µm), espessura do infiltrado (µm), refletividade do infiltrado (nível cinza, onde 0 é preto e 255 é branco).

Projeto: Estudo prospectivo de centro único Os participantes serão recrutados nas ambulâncias da clínica da Universidade Kepler, oftalmologia, Linz, Áustria Um total de 392 pacientes será incluído neste estudo. Potência pretendida: nível de significância de 0,8 após correção de Bonferroni para 7 variáveis ​​explicativas (7 diferentes citocinas): 0,07 Valores usados ​​(TNF alfa 2): Grupo 1: 18,8 (26,36) e Grupo 2: 50,12 (103,83) Parâmetros Resultados Potência 0,800 alfa 0,007 Média (Grupo 1) 18,8 Média (Grupo 2) 50,12 Std. desvio (Grupo 1) 26,36 Std. desvio (Grupo 2) 103,83 Tamanho da amostra 1 146 Tamanho da amostra 2 146 Potência (obtida) 0,798 Para correção de um erro de arredondamento potencial (potência calculada 0,798), um caso deve ser adicionado a cada grupo.

Embora não haja nenhum acompanhamento do estudo, o investigador ainda espera uma taxa de desistência de 30% pelo seguinte motivo: Conforme publicado anteriormente, 67% de todas as biópsias de córnea resultam em uma cultura positiva. 13 Nos casos em que a cultura não der resultado positivo, o paciente deverá ser excluído da análise.

Portanto, o investigador incluirá 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 olhos -> 392 olhos A análise dos dados só é possível, se a biópsia da córnea for positiva (foi encontrado um patógeno causador da ceratite). Portanto, o investigador espera que aproximadamente 30% dos pacientes não sejam incluídos para análise. Nesses casos, as imagens de OCT ainda serão avaliadas, mas a amostra de filme lacrimal será descartada de acordo com o protocolo de desperdício de tecido ou se o oftalmologista investigador esperar um tipo não infeccioso de ceratite (como uma úlcera neurotrófica), a citocina quantificação será realizada.

Técnicas de medição O CASIA 2 (Tomey, Japão) é um biômetro ss-OCT que permite imagens de alta resolução do segmento anterior do olho.

Amostragem de lágrima e análise de citocinas As amostras serão coletadas por lavagem conjuntival do olho afetado sem anestesia tópica. Salina normal estéril será infundida em temperatura ambiente no saco conjuntival inferior, puxando suavemente para baixo a pálpebra inferior e com uma seringa de insulina sem agulha. Após alguns segundos, o fluido de lavagem será aspirado de volta para a mesma seringa sem que a seringa toque na conjuntiva. Posteriormente, a amostra será armazenada a -80° Celsius até que todas as amostras sejam coletadas. Conforme mencionado nessas amostras, onde a biópsia da córnea foi negativa, será descartada ou (se a oftalmologia esperar um tipo de ceratite não infecciosa) ainda será analisada. Portanto, o fluido conjuntival das seringas será reunido e centrifugado em uma centrífuga (400xg por 10 min a 4°C). Os sobrenadantes serão analisados ​​usando o kit de ensaio multiplex pró-inflamatório da Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, EUA) para os níveis das seguintes citocinas e quimiocinas: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Oitenta amostras serão analisadas ao mesmo tempo.