Validace interleukinů a dalších cytokinů společně s OCT zobrazením pro rychlé vyhodnocení infekční keratitidy (VICTORIA)

Infekční nebo zánětlivé procesy rohovky (keratitida) jsou běžné a ohrožují zrak. Jsou 5. hlavní příčinou slepoty a zvláště infekční keratitida je zodpovědná za 2 000 000 nových slepých očí ročně (celosvětově). Běžně se přítomnost a povaha bakteriálních patogenů zjišťuje odebráním škrábanců z rohovky, následným Gramovým barvením a vyšetřením mikrobiologických kultur. Hlavní problémy při rozhodování o léčbě představují dlouhé trvání kultivace bakterií pro detekci patogenů (přibližně jeden týden), relativně nízká citlivost a stále častější rezistence bakterií na antibiotika.

V malých předchozích studiích bylo zjištěno, že optická koherentní tomografie (OCT) kombinovaná s analýzou cytokinů slz podporuje rozlišení mezi různými patogeny způsobujícími keratitidu. Tyto studie se zdají být zásadní změnou v oblasti rychlého testování keratitidy. Problémem těchto studií je však malá velikost vzorku a použití částečně zastaralého vybavení.

Posouzení přínosu/rizika Přestože neexistuje žádný přímý přínos pro zúčastněné subjekty, výsledky studie mohou pomoci získat lepší přehled o průběhu keratitidy a mohly by dále zlepšit diagnostické využití při léčbě onemocnění.

V této studii není použita žádná další medikace. Zjištění této studie by mohla pomoci k lepšímu pochopení keratitidy a mohla by umožnit rychlejší a cíleně orientovanou terapii. Všechny použité měřicí techniky jsou bezbolestné.

Poměr rizika a přínosu se tedy zdá být přijatelný.

Cíle studia

Hlavní:

• Porovnání rozdílů hladin TNF-alfa v slzném filmu (pg/ml) mezi Gram+ a Gram- bakteriemi způsobujícími keratitidu (z test pro nepárové vzorky).

Sekundární:

• Vyvinout algoritmus, který by měl pomoci odlišit různé patogeny způsobující keratitidu pomocí hladin cytokinů a OCT nálezů. Tato část studie bude experimentální (částečná regrese nejmenších čtverců a regrese náhodných lesních ploch)
• Hladiny IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alfa u keratitidy
• Morfologické nálezy v optické koherentní tomografii: tloušťka rohovky (µm), tloušťka infiltrátu (µm), odrazivost infiltrátu (úroveň šedé, kde 0 je černá a 255 je bílá).

Design: Prospektivní studie s jedním centrem Účastníci se budou rekrutovat z ambulancí kliniky Kepler University, oftalmologie, Linz, Rakousko. Do této studie bude zahrnuto celkem 392 pacientů. Cílená síla: 0,8 hladina významnosti po Bonferroniho korekci pro 7 vysvětlujících proměnných (7 různých cytokinů): 0,07 Použité hodnoty (TNF alfa 2): Skupina 1: 18,8 (26,36) a Skupina 2: 50,12 (103,83) Parametry Výsledky Výkon 0,800 alfa 0,007 Průměr (Skupina 1) 18,8 Průměr (Skupina 2) 50,12 Std. odchylka (Skupina 1) 26,36 Std. odchylka (Skupina 2) 103,83 Velikost vzorku 1 146 Velikost vzorku 2 146 Mocnina (získaná) 0,798 Pro opravu potenciální chyby zaokrouhlení (vypočítaná mocnina 0,798) by se měl do každé skupiny přidat jeden případ.

Ačkoli nebudou následovat žádné studie, výzkumník stále očekává 30% míru vyřazení z následujícího důvodu: Jak bylo publikováno dříve, 67 % všech biopsií rohovky vede k pozitivní kultivaci. 13 V případech, kdy kultivace neposkytuje pozitivní výsledky, bude muset být pacient z analýzy vyloučen.

Proto vyšetřovatel zahrne 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 oči -> 392 očí Analýza dat je možná pouze v případě, že je biopsie rohovky pozitivní (je nalezen patogen způsobující keratitidu). Zkoušející proto očekává, že přibližně 30 % pacientů nebude zahrnuto do analýzy. V těchto případech budou snímky OCT stále vyhodnoceny, ale vzorek slzného filmu bude buď zlikvidován podle protokolu o tkáňovém odpadu, nebo pokud vyšetřující oftalmolog očekává neinfekční typ keratitidy (jako je neurotrofický vřed), cytokin bude provedena kvantifikace.

Měřicí techniky CASIA 2 (Tomey, Japonsko) je ss-OCT biometr, který umožňuje zobrazení předního segmentu oka s vysokým rozlišením.

Odběry slz a analýza cytokinů Vzorky budou odebírány výplachem spojivky postiženého oka bez topické anestezie. Sterilní normální fyziologický roztok bude při pokojové teplotě podán infuzí do spodního spojivkového vaku jemným stažením spodního víčka a pomocí inzulínové stříkačky bez jehly. Po několika sekundách bude výplachová tekutina nasáta zpět do stejné stříkačky, aniž by se stříkačka dotkla spojivky. Poté bude vzorek uložen při -80° Celsia, dokud nebudou odebrány všechny vzorky. Jak je uvedeno u těch vzorků, kde byla biopsie rohovky negativní, budou buď zlikvidovány, nebo (pokud oftalmologie očekává neinfekční typ keratitidy) budou stále analyzovány. Konjunktivální tekutina z injekčních stříkaček se proto shromáždí a odstředí v odstředivce (400 x g po dobu 10 minut při 4 °C). Supernatanty budou analyzovány pomocí prozánětlivé multiplexní testovací soupravy od Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, USA) na hladiny následujících cytokinů a chemokinů: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Současně bude analyzováno osmdesát vzorků.