Convalida di interleuchine e altre citochine insieme all'imaging OCT per una rapida valutazione della cheratite infettiva (VICTORIA)

I processi infettivi o infiammatori della cornea (cheratite) sono comuni e minacciosi per la vista. Sono la quinta causa principale di cecità e in particolare la cheratite infettiva è responsabile di 2.000.000 di nuovi occhi ciechi all'anno (in tutto il mondo). Comunemente, la presenza e la natura dei patogeni batterici viene determinata prelevando graffi dalla cornea, successiva colorazione di Gram ed esame delle colture microbiologiche. I principali problemi nel processo decisionale terapeutico pongono la lunga durata della coltura batterica per il rilevamento dei patogeni (circa una settimana), la sensibilità relativamente bassa e le resistenze batteriche sempre più frequenti agli agenti antibiotici.

In piccoli studi precedenti, la tomografia a coerenza ottica (OCT) combinata con l'analisi delle citochine lacrimali si è rivelata di supporto nella distinzione tra diversi agenti patogeni che causano la cheratite. Questi studi sembrano essere un punto di svolta nel campo dei test rapidi per la cheratite. Tuttavia, il problema di questi studi è una piccola dimensione del campione e l'uso di apparecchiature parzialmente obsolete.

Valutazione rischio/beneficio Sebbene non vi sia alcun beneficio diretto per i soggetti partecipanti, i risultati dello studio possono aiutare a ottenere maggiori informazioni sul decorso della cheratite e potrebbero migliorare ulteriormente le utilità diagnostiche nella gestione della malattia.

Non ci sono farmaci aggiuntivi utilizzati in questo studio. I risultati del presente studio potrebbero aiutare a stabilire una migliore comprensione della cheratite e potrebbero consentire una terapia più rapida e mirata. Tutte le tecniche di misurazione applicate sono indolori.

Pertanto, il rapporto rischio/beneficio sembra essere accettabile.

Obiettivi dello studio

Primario:

• Confronto delle differenze del livello di TNF-alfa nel film lacrimale (pg/ml) tra batteri Gram+ e Gram- che causano cheratite (test z per campioni non appaiati).

Secondario:

• Sviluppare un algoritmo, che dovrebbe aiutare a distinguere tra diversi agenti patogeni che causano la cheratite utilizzando i livelli di citochine e i risultati dell'OCT. Questa parte dello studio sarà sperimentale (regressione ai minimi quadrati parziali e grafici forestali casuali di regressione)
• Livelli di IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alfa nella cheratite
• Risultati morfologici nella tomografia a coerenza ottica: spessore corneale (µm), spessore dell'infiltrato (µm), riflettività dell'infiltrato (livello di grigio, dove 0 è nero e 255 è bianco).

Design: studio prospettico a centro singolo I partecipanti saranno reclutati dalle ambulanze della clinica universitaria Kepler, oftalmologia, Linz, Austria. In questo studio saranno inclusi un totale di 392 pazienti. Potenza mirata: livello di significatività 0,8 dopo una correzione di Bonferroni per 7 variabili esplicative (7 diverse citochine): 0,07 Valori utilizzati (TNF alfa 2): Gruppo 1: 18,8 (26,36) e Gruppo 2: 50,12 (103,83) Parametri Risultati Potenza 0,800 alfa 0,007 Media (Gruppo 1) 18,8 Media (Gruppo 2) 50,12 Std. deviazione (Gruppo 1) 26.36 Std. deviazione (Gruppo 2) 103,83 Dimensione del campione 1 146 Dimensione del campione 2 146 Potenza (ottenuta) 0,798 Per la correzione di un potenziale errore di arrotondamento (potenza calcolata 0,798) è necessario aggiungere un caso a ciascun gruppo.

Sebbene non ci saranno follow-up dello studio, il ricercatore prevede comunque un tasso di abbandono del 30% per il seguente motivo: come pubblicato in precedenza, il 67% di tutte le biopsie corneali risulta in una coltura positiva. 13 Nei casi in cui la coltura non dia risultati positivi, il paziente dovrà essere escluso dall'analisi.

Pertanto, lo sperimentatore includerà 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 occhi -> 392 occhi L'analisi dei dati è possibile solo se la biopsia corneale è positiva (è stato trovato un patogeno che causa la cheratite). Pertanto, lo sperimentatore prevede che circa il 30% dei pazienti non sarà incluso per l'analisi. In questi casi, le immagini OCT verranno comunque valutate, ma il campione di film lacrimale verrà smaltito secondo il protocollo dei rifiuti tissutali o se l'oftalmologo indagatore si aspetta un tipo non infettivo di cheratite (come un'ulcera neurotrofica) la citochina verrà eseguita la quantificazione

Tecniche di misurazione CASIA 2 (Tomey, Giappone) è un biometro ss-OCT che consente l'imaging ad alta risoluzione del segmento anteriore dell'occhio.

Campionamento lacrimale e analisi delle citochine I campioni saranno raccolti mediante lavaggio congiuntivale dell'occhio affetto senza anestesia topica. La normale soluzione fisiologica sterile verrà infusa a temperatura ambiente nel sacco congiuntivale inferiore abbassando delicatamente la palpebra inferiore e con una siringa da insulina senza ago. Dopo pochi secondi, il fluido di lavaggio verrà aspirato nuovamente nella stessa siringa senza che la siringa tocchi la congiuntiva. Successivamente, il campione verrà conservato a -80° Celsius fino a quando non saranno raccolti tutti i campioni. Come accennato in quei campioni, in cui la biopsia corneale è risultata negativa, verranno smaltiti o (se l'oftalmologia prevede un tipo di cheratite non infettivo) saranno ancora analizzati. Pertanto, il fluido congiuntivale delle siringhe verrà raccolto e centrifugato in una centrifuga (400xg per 10 min a 4°C). I supernatanti saranno analizzati utilizzando il kit di test multiplex pro-infiammatorio di Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, USA) per i livelli delle seguenti citochine e chemochine: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Saranno analizzati ottanta campioni contemporaneamente.