Interleukiinien ja muiden sytokiinien validointi yhdessä OCT-kuvauksen kanssa tarttuvan keratiitin nopeaa arviointia varten (VICTORIA)

Sarveiskalvon tarttuvat tai tulehdukselliset prosessit (keratiitti) ovat yleisiä ja näköä uhkaavia. Ne ovat viidenneksi yleisin sokeuden aiheuttaja, ja erityisesti tarttuva keratiitti aiheuttaa 2 000 000 uutta sokeaa silmää vuodessa (maailmanlaajuisesti). Yleisesti bakteeripatogeenien esiintyminen ja luonne määritetään ottamalla naarmuja sarveiskalvosta, myöhemmin Gram-värjäyksellä ja tutkimalla mikrobiologisia viljelmiä. Suurimmat ongelmat terapeuttisessa päätöksenteossa ovat bakteeriviljelyn pitkä kesto patogeenien havaitsemiseksi (noin yksi viikko), suhteellisen alhainen herkkyys ja lisääntyvä bakteerien vastustuskyky antibioottiaineille.

Pienissä aikaisemmissa tutkimuksissa optisen koherenssitomografian (OCT) yhdistettynä kyynelsytokiinien analyysiin havaittiin auttavan erottamaan eri keratiittia aiheuttavat patogeenit. Nämä tutkimukset näyttävät muuttavan pelin keratiitin pikatestauksen alalla. Näiden tutkimusten ongelmana on kuitenkin pieni otoskoko ja osittain vanhentuneiden laitteiden käyttö.

Hyöty/riskiarvio Vaikkei siitä ole suoraa hyötyä osallistuville koehenkilöille, tutkimuksen tulokset voivat auttaa saamaan paremman käsityksen keratiitin kulusta ja voivat edelleen parantaa diagnostisia hyötyjä taudin hallinnassa.

Tässä tutkimuksessa ei käytetä lisälääkkeitä. Tämän tutkimuksen tulokset voivat auttaa ymmärtämään paremmin keratiitin ja mahdollistavat nopeamman ja kohdennetun hoidon. Kaikki käytetyt mittaustekniikat ovat kivuttomia.

Näin ollen riski-hyötysuhde näyttää olevan hyväksyttävä.

Opiskelun tavoitteet

Ensisijainen:

• Kyynelkalvon (pg/ml) TNF-alfa-tasoerojen vertailu keratiittia aiheuttavien Gram+- ja Gram-bakteerien välillä (z-testi parittomille näytteille).

Toissijainen:

• Algoritmin kehittäminen, jonka pitäisi auttaa erottamaan eri keratiittia aiheuttavat patogeenit sytokiinitasojen ja OCT-löydösten avulla. Tämä osa tutkimuksesta on kokeellinen (osittainen pienimmän neliösumman regressio ja regressio satunnaiset metsäpalstat)
• IL-1alfan, IL-1beetan, IL-6:n, IL-8:n, IL-10:n, IL-17A:n, TNF-alfan tasot keratiitissa
• Morfologiset löydökset optisessa koherenssitomografiassa: sarveiskalvon paksuus (µm), infiltraatin paksuus (µm), infiltraatin heijastavuus (harmaataso, jossa 0 on musta ja 255 on valkoinen).

Suunnittelu: Tuleva yhden keskuksen tutkimus Osallistujat rekrytoidaan Keplerin yliopiston klinikan silmätautien ambulansseista, Linz, Itävalta. Tähän tutkimukseen osallistuu yhteensä 392 potilasta. Tavoiteteho: 0,8 merkitsevyystaso Bonferroni-korjauksen jälkeen 7 selittävälle muuttujalle (7 eri sytokiinia): 0,07 Käytetyt arvot (TNF alfa 2): Ryhmä 1: 18,8 (26,36) ja ryhmä 2: 50,12 (103,83) Parametrit Tulokset Teho 0,800 alfa 0,007 Keskiarvo (Ryhmä 1) 18,8 Keskiarvo (Ryhmä 2) 50,12 Std. poikkeama (ryhmä 1) 26,36 Std. poikkeama (Ryhmä 2) 103,83 Otoskoko 1 146 Otoskoko 2 146 Teho (saatu) 0,798 Mahdollisen pyöristysvirheen (laskettu teho 0,798) korjaamiseksi kuhunkin ryhmään on lisättävä yksi tapaus.

Vaikka tutkimuksen seurantaa ei tehdä, tutkija odottaa silti 30 %:n keskeyttämisastetta seuraavasta syystä: Kuten aiemmin on julkaistu, 67 % kaikista sarveiskalvon biopsioista johtaa positiiviseen viljelmään. 13 Niissä tapauksissa, joissa viljelmä ei anna positiivisia tuloksia, potilas on suljettava pois analyysistä.

Siksi tutkija sisältää 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391,02 silmät -> 392 silmät Tietojen analysointi on mahdollista vain, jos sarveiskalvon biopsia on positiivinen (keratiittia aiheuttava patogeeni löytyy). Siksi tutkija olettaa, että noin 30 % potilaista ei oteta mukaan analyysiin. Näissä tapauksissa OCT-kuvat arvioidaan edelleen, mutta kyynelkalvonäyte joko hävitetään kudosjätteen protokollan mukaisesti tai jos tutkiva silmälääkäri odottaa ei-tarttuvaa keratiittia (kuten neurotrofista haavaumaa) sytokiini kvantifiointi suoritetaan.

Mittaustekniikat CASIA 2 (Tomey, Japani) on ss-OCT-biometri, joka mahdollistaa silmän etuosan korkearesoluutioisen kuvantamisen.

Kyynelnäytteenotto ja sytokiinianalyysi Näytteet kerätään sairaan silmän sidekalvohuuhtelulla ilman paikallispuudutusta. Steriiliä normaalia suolaliuosta infusoidaan huoneenlämmössä alempaan sidekalvopussiin vetämällä varovasti alaluomea alas neulattomalla insuliiniruiskulla. Muutaman sekunnin kuluttua huuhteluneste imetään takaisin samaan ruiskuun ilman, että ruisku kosketa sidekalvoa. Sen jälkeen näytettä säilytetään -80 °C:ssa, kunnes kaikki näytteet on kerätty. Kuten näissä näytteissä mainittiin, jos sarveiskalvon biopsia oli negatiivinen, ne joko hävitetään tai (jos silmälääkäri odottaa ei-tarttuvaa keratiittia) analysoidaan edelleen. Siksi ruiskuista tuleva sidekalvoneste yhdistetään ja sentrifugoidaan sentrifugissa (400 x g 10 minuuttia 4 °C:ssa). Supernatantit analysoidaan käyttämällä Meso Scale Discoveryn (Gaithersburg, MD, USA) pro-inflammatorista multipleksimäärityspakkausta seuraavien sytokiinien ja kemokiinien määrittämiseksi: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Kahdeksankymmentä näytettä analysoidaan samanaikaisesti.