Validación de interleucinas y otras citocinas junto con imágenes OCT para la evaluación rápida de queratitis infecciosa (VICTORIA)

Los procesos infecciosos o inflamatorios de la córnea (queratitis) son comunes y amenazan la visión. Son la quinta causa principal de ceguera y especialmente la queratitis infecciosa es responsable de 2.000.000 de nuevos ojos ciegos por año (en todo el mundo). Comúnmente, la presencia y la naturaleza de los patógenos bacterianos se determina tomando raspaduras de la córnea, tinción de Gram posterior y examen de cultivos microbiológicos. Los principales problemas en la toma de decisiones terapéuticas plantean la larga duración del cultivo bacteriano para la detección de patógenos (aproximadamente una semana), la sensibilidad relativamente baja y las resistencias bacterianas cada vez más frecuentes a los agentes antibióticos.

En pequeños estudios previos, se encontró que la tomografía de coherencia óptica (OCT) combinada con el análisis de las citoquinas lagrimales ayudó a distinguir entre los diferentes patógenos que causan la queratitis. Estos estudios parecen cambiar las reglas del juego en el campo de las pruebas rápidas para la queratitis. Sin embargo, el problema de estos estudios es un tamaño de muestra pequeño y el uso de equipos parcialmente obsoletos.

Evaluación de beneficios/riesgos Aunque no hay un beneficio directo para los sujetos participantes, los resultados del estudio pueden ayudar a comprender mejor el curso de la queratitis y podrían mejorar aún más las utilidades de diagnóstico en el manejo de la enfermedad.

No se utilizan medicamentos adicionales en este estudio. Los hallazgos del presente estudio podrían ayudar a establecer una mejor comprensión de la queratitis y podrían permitir una terapia más rápida y orientada al objetivo. Todas las técnicas de medición aplicadas son indoloras.

Por lo tanto, la relación riesgo-beneficio parece ser aceptable.

Objetivos del estudio

Primario:

• Comparación de las diferencias de nivel de TNF-alfa en la película lagrimal (pg/ml) entre bacterias Gram+ y Gram- causantes de queratitis (prueba z para muestras no apareadas).

Secundario:

• Desarrollar un algoritmo que debería ayudar a distinguir entre diferentes patógenos que causan queratitis utilizando los niveles de citoquinas y los hallazgos de OCT. Esta parte del estudio será experimental (regresión de mínimos cuadrados parciales y diagramas de bosque aleatorio de regresión)
• Niveles de IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-alfa en queratitis
• Hallazgos morfológicos en tomografía de coherencia óptica: espesor corneal (µm), espesor del infiltrado (µm), reflectividad del infiltrado (nivel de gris, donde 0 es negro y 255 es blanco).

Diseño: ensayo prospectivo de centro único Los participantes serán reclutados de las ambulancias de la clínica de oftalmología de la Universidad de Kepler, Linz, Austria. En este estudio se incluirá un total de 392 pacientes. Potencia buscada: 0,8 nivel de significación tras una corrección de Bonferroni para 7 variables explicativas (7 citocinas diferentes): 0,07 Valores utilizados (TNF alfa 2): Grupo 1: 18,8 (26,36) y Grupo 2: 50,12 (103,83) Parámetros Resultados Potencia 0,800 alfa 0,007 Media (Grupo 1) 18,8 Media (Grupo 2) 50,12 Desv. Desviación (Grupo 1) 26,36 Desv. desviación (Grupo 2) 103,83 Tamaño de muestra 1 146 Tamaño de muestra 2 146 Potencia (obtenida) 0,798 Para la corrección de un posible error de redondeo (potencia calculada 0,798) se debe agregar un caso a cada grupo.

Aunque no habrá ningún seguimiento del estudio, el investigador aún espera una tasa de abandono del 30 % por la siguiente razón: como se publicó anteriormente, el 67 % de todas las biopsias de córnea dan como resultado un cultivo positivo. 13 En aquellos casos en que el cultivo no proporcione resultados positivos, el paciente deberá ser excluido del análisis.

Por lo tanto, el investigador incluirá 147 + 147 + (147+147)*0,33 = 391.02 ojos -> 392 ojos El análisis de los datos solo es posible si la biopsia corneal es positiva (se encuentra un patógeno que causa la queratitis). Por lo tanto, el investigador espera que aproximadamente el 30 % de los pacientes no se incluyan en el análisis. En estos casos, las imágenes de OCT aún se evaluarán, pero la muestra de la película lagrimal se eliminará de acuerdo con el protocolo de desechos de tejido o si el oftalmólogo investigador espera un tipo de queratitis no infecciosa (como una úlcera neurotrófica), la citoquina se realizará la cuantificación.

Técnicas de medición CASIA 2 (Tomey, Japón) es un biómetro ss-OCT que permite obtener imágenes de alta resolución del segmento anterior del ojo.

Muestreo de lágrimas y análisis de citocinas Las muestras se recogerán mediante lavado conjuntival del ojo afectado sin anestesia tópica. Se infundirá solución salina normal estéril a temperatura ambiente en el saco conjuntival inferior tirando suavemente hacia abajo del párpado inferior y con una jeringa de insulina sin aguja. Después de unos segundos, el líquido de lavado se volverá a aspirar en la misma jeringa sin que la jeringa toque la conjuntiva. Posteriormente, la muestra se almacenará a -80 ° Celsius hasta que se recolecten todas las muestras. Como se mencionó en esas muestras, donde la biopsia de córnea fue negativa, se desecharán o (si el oftalmólogo espera un tipo de queratitis no infecciosa) aún se analizarán. Por lo tanto, el líquido conjuntival de las jeringas se combinará y se centrifugará en una centrífuga (400xg durante 10 min a 4 °C). Los sobrenadantes se analizarán utilizando el kit de ensayo multiplex proinflamatorio de Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, EE. UU.) para determinar los niveles de las siguientes citocinas y quimiocinas: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL -10, IL-17A, TNF-alfa. Ochenta muestras serán analizadas al mismo tiempo.