Валидация интерлейкинов и других цитокинов вместе с визуализацией ОКТ для быстрой оценки инфекционного кератита (VICTORIA)

Инфекционные или воспалительные процессы роговицы (кератиты) распространены и угрожают зрению. Они являются 5-й основной причиной слепоты, и особенно инфекционный кератит является причиной 2 000 000 новых слепых глаз в год (во всем мире). Обычно наличие и характер бактериальных возбудителей определяют путем взятия соскобов с роговицы, последующей окраски по Граму и исследования микробиологических культур. Основные проблемы при принятии терапевтических решений связаны с большой продолжительностью культивирования бактерий для выявления возбудителя (приблизительно одна неделя), относительно низкой чувствительностью и все более частой резистентностью бактерий к антибиотикам.

В небольших предыдущих исследованиях было обнаружено, что оптическая когерентная томография (ОКТ) в сочетании с анализом цитокинов слезы помогает различать различные патогены, вызывающие кератит. Эти исследования меняют правила игры в области экспресс-тестирования на кератит. Однако проблемой этих исследований является небольшой размер выборки и использование частично устаревшего оборудования.

Оценка пользы/риска Хотя прямой пользы для участников исследования нет, результаты исследования могут помочь лучше понять течение кератита и могут еще больше улучшить диагностические возможности лечения заболевания.

В этом исследовании не используются дополнительные лекарства. Результаты настоящего исследования могут помочь лучше понять кератит и обеспечить более быструю и целенаправленную терапию. Все применяемые методики измерения безболезненны.

Таким образом, соотношение риска и пользы представляется приемлемым.

Цели исследования

Начальный:

• Сравнение различий уровней ФНО-альфа в слезной пленке (пг/мл) между грамположительными и грамотрицательными бактериями, вызывающими кератит (z-критерий для непарных образцов).

Вторичный:

• Разработать алгоритм, который должен помочь различать различные патогены, вызывающие кератит, по уровням цитокинов и данным ОКТ. Эта часть исследования будет экспериментальной (частичная регрессия методом наименьших квадратов и регрессионные графики случайного леса).
• Уровни ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-17А, ФНО-альфа при кератите
• Морфологические данные оптической когерентной томографии: толщина роговицы (мкм), толщина инфильтрата (мкм), отражательная способность инфильтрата (уровень серого, где 0 — черный, 255 — белый).

Дизайн: проспективное одноцентровое исследование Участники будут набраны из машин скорой помощи офтальмологической клиники Университета Кеплера, Линц, Австрия. Всего в это исследование будет включено 392 пациента. Целевая мощность: уровень значимости 0,8 после поправки Бонферрони для 7 объясняющих переменных (7 различных цитокинов): 0,07 Используемые значения (ФНО альфа 2): Группа 1: 18,8 (26,36) и Группа 2: 50,12 (103,83) Параметры Результаты Мощность 0,800 альфа 0,007 Среднее (группа 1) 18,8 Среднее (группа 2) 50,12 Станд. отклонение (группа 1) 26,36 станд. отклонение (группа 2) 103,83 Объем выборки 1 146 Объем выборки 2 146 Мощность (полученная) 0,798 Для исправления потенциальной ошибки округления (расчетная мощность 0,798) в каждую группу необходимо добавить один случай.

Несмотря на то, что никаких последующих исследований не будет, исследователь по-прежнему ожидает, что показатель отсева составит 30 % по следующей причине: как было опубликовано ранее, 67 % всех биопсий роговицы дают положительный результат посева. 13 В тех случаях, когда посев не дает положительных результатов, пациента придется исключить из анализа.

Следовательно, сыщик включит 147 + 147 + (147+147)*0,33. = 391,02 глаза -> 392 глаза Анализ данных возможен только при положительном результате биопсии роговицы (обнаружен возбудитель, вызывающий кератит). Таким образом, исследователь ожидает, что примерно 30% пациентов не будут включены в анализ. В этих случаях изображения ОКТ по-прежнему будут оцениваться, но образец слезной пленки будет либо утилизирован в соответствии с протоколом отходов ткани, либо, если исследователь-офтальмолог ожидает неинфекционный тип кератита (например, нейротрофическая язва), цитокин будет проведена количественная оценка.

Методы измерения CASIA 2 (Tomey, Япония) представляет собой биометр ss-OCT, который позволяет получать изображения переднего сегмента глаза с высоким разрешением.

Отбор проб слезной жидкости и анализ цитокинов. Образцы будут собираться путем промывания конъюнктивы пораженного глаза без местной анестезии. Стерильный физиологический раствор будет вливаться при комнатной температуре в нижний конъюнктивальный мешок, осторожно оттягивая нижнее веко и с помощью инсулинового шприца без иглы. Через несколько секунд лаважная жидкость будет отсосана обратно в тот же шприц, при этом шприц не будет касаться конъюнктивы. После этого образец будет храниться при температуре -80° по Цельсию до тех пор, пока не будут собраны все образцы. Как уже упоминалось, те образцы, где биопсия роговицы была отрицательной, будут либо утилизированы, либо (если офтальмология предполагает неинфекционный тип кератита) все же будут подвергнуты анализу. Таким образом, конъюнктивальная жидкость из шприцев будет объединена и центрифугирована в центрифуге (400xg в течение 10 мин при 4°C). Супернатанты будут проанализированы с использованием набора для мультиплексного провоспалительного анализа от Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD, USA) на уровни следующих цитокинов и хемокинов: IL-1альфа, IL-1бета, IL-6, IL-8, IL -10, ИЛ-17А, ФНО-альфа. Одновременно будут анализировать восемьдесят образцов.