A Zimbabwei Egyetem Egészségtudományi Főiskolai Karának (UZ-CHS) SZÜLETÉSI KOHORSZ-tanulmánya (UZ-CHS-BC)

Évente több mint egymillió csecsemő születik HIV-1-fertőzött nőknek a Szaharától délre fekvő Afrikában. Zimbabwéban az éves születések száma eléri a 379 000-et, és évente körülbelül 48 000 csecsemő születik HIV-1-fertőzött nőknél, akik élethosszig tartó, rendkívül aktív antiretrovirális terápiában (HAART) részesülnek. Aggodalmakat fejeztek ki a HIV-1-nek kitett, de nem fertőzött (HEU) csecsemők általános egészségi és fejlődési eredményeivel kapcsolatban, akik HIV-1-fertőzött nőktől születtek. Annak ellenére, hogy HIV-negatívak, a HEU-s gyermekek halálozási aránya 3,9-szer, illetve 2,0-szer magasabb, mint a HIV-fertőzetlen és nem fertőzött (HUU) csecsemők élete első és második évében. HUU társaikhoz képest a HEU-s gyermekek kedvezőtlen születési kimenetelűek, károsodhatnak a növekedésben, fejlődésben és egyéb egészségügyi hiányosságokban. Ez jelentős közegészségügyi probléma, mivel felnőttkorban az alacsony születési súllyal (LBW) született csecsemők nagyobb valószínűséggel halnak meg olyan nem fertőző betegségekben (NCD), mint például a magas vérnyomás, a stroke és a 2-es típusú cukorbetegség. Zimbabwéban a HEU-csecsemőket alaposan tanulmányozták a HAART előtti korszakban; azonban hiányoznak a korabeli bizonyítékok. Ezenkívül a korábbi tanulmányok nem jellemezték a terhesség alatt álló nőket, és az eredményt nem ellenőrizték más gyakori születés előtti fertőzéses kórokozók esetében, beleértve az olyan további kockázati tényezőket, mint a koraszülés, az alacsony testsúly, a szoptatás időtartama, a szegénység és az anyai pszichoszociális stresszorok. Ezért a HEU-csecsemők mélyreható és átfogó jellemzésére van szükség nemcsak a HIV-fertőzés elkerülése érdekében, hanem a kitett személyek rövid és hosszú távú egészségügyi eredményeinek javítása érdekében is.

A HAART kockázatai terhesség alatt Zimbabwéban a HIV-fertőzött nők ellátásának jelenlegi standardja a HIV anyáról gyermekre történő átvitelének (MTCT) megelőzésére tenofovirból, lamivudinból és efavirenzből (TENOLAM-E) áll. Az antiretrovirális szerek azonban felhalmozódhatnak a magzatvízben, így kockázatot jelentenek az embrionális és magzati fejlődés érzékenysége során. A HAART időzítése is fontos lehet, mivel egy dél-afrikai tanulmány kimutatta, hogy azoknál az anyáknál, akik a fogantatás előtt elkezdték a zidovudin alapú HAART-ot, kétszer akkora volt a koraszülés esélye, mint azoknál az anyáknál, akik a fogantatás után kezdték el a HAART-ot. A HIV-ellenes gyógyszerek toxikus mechanizmusai közé tartozik a mitokondriális toxicitás és a mitokondriális DNS-mutációk anyáknál és esetleg csecsemőknél is. A mitokondriális diszfunkció viszont fokozza a reaktív oxigénfajták termelését és aktiválja az IL-1 termelést. A HAART toxicitás másik mechanizmusa a lipid metabolizmus zavarása. Az efavirenz-alapú HAART korai expozícióját idegrendszeri fejlődési és szocio-emocionális kihívásokkal hozták összefüggésbe, amelyek viselkedési zavarokhoz vezethetnek. Ezen túlmenően a tartós fertőzések, a társadalmi-gazdasági helyzet káros hatásai és az anyai étrendi szennyeződések, például a dioxinok vagy a klórozott peszticidek is szerepet játszhatnak.

A HEU-s csecsemők megfigyelt káros egészségügyi következményeinek okai az immunrendszer megváltozott állapotával hozhatók összefüggésbe. A HEU-s gyermekek egy éven túli immunprofilja azonban nagyrészt feltáratlan. Zimbabwéban a csecsemők aktív immunizálására irányuló oltási kampányokat a kiterjesztett immunizálási program (EPI) támogatja. Annak ellenére, hogy egyes EPI-vakcinák után az antitest-titerek csúcsértékei normálisak HEU-csecsemőknél, nem végeztek tanulmányokat ezen immunválaszok élettartamáról. A méhen belüli HIV-expozíció növeli a placentasejtek által termelt gyulladást elősegítő citokinszinteket. A társfertőzések fontosnak tűnnek, mivel a kenyai HEU-újszülötteknél (nagy számú anyai társfertőzésnél) magasabb volt a gyulladásos plazmamarkerek szintje, mint az USA-ban végzett vizsgálatokból származó HEU-kontrollokban. Ezenkívül a HEU-csecsemőknek nagyobb a CMV-terhelése, amelyet részben az anyai virémia okozhat, és hozzájárulhat az immunaktivációhoz. Így a HEU-s csecsemők továbbra is kiindulási gyulladásban szenvednek, ami rossz rövid- és hosszú távú kimenetelhez köthető, és a gyulladásgátló beavatkozások javíthatják a csecsemők egészségét. A HAART-kezeléssel terhes nőkön végzett intervenciós vizsgálatok etikailag kihívást jelentenek; a HAART neuro-/immunfejlődésre gyakorolt ​​hatását azonban olyan vizsgálatokban lehetett értékelni, mint az UZ-CHS születési kohorsz, ahol a gazdasági kihívások miatt az anyák gyakrabban késik a szülés előtt, és néhányan a harmadik trimeszterben naivák a HAART-ot. A B+ opció korszakában a HAART-expozíció kockázatára vonatkozó bizonyítékok továbbra is korlátozottak a HEU-csecsemők rövid és hosszú távú kimenetelére vonatkozóan. Legjobb tudomásunk szerint azonban egyetlen tanulmány sem mutatott összefüggést a HAART-szintekkel az anyai magzatvízben, a vizeletben, a plazmában és a hosszanti anyatejben, és nem mutatott összefüggést a terhesség kedvezőtlen kimenetelével, a csecsemő növekedésével, anyagcseréjével és (immun/neuro) fejlődésével.

Módszerek A Zimbabwei Egyetem Egészségtudományi Főiskola (UZ-CHS) születési kohorsz vizsgálata egy prospektív megfigyeléses kohorsz vizsgálat, amelyben HIV-fertőzött és nem HIV-fertőzött nők csecsemőit hasonlítják össze Harare elsődleges egészségügyi poliklinikáinak nagy sűrűségű nyugati külvárosában, alacsony erőforrások között. . 2016 januárja és 2019 júniusa között 1200 terhes nőt (600 HIV-fertőzött anyát és 600 HIV-fertőzetlen kontrollt) vettek fel a harmadik trimeszterben. A résztvevőket anya-baba párként követik születésükkor, 6, 10, 14, 24, 48, 72 és 96 hetes életkortól számított 10 napon belül. Minden látogatás alkalmával klinikai vizsgálatokat végeznek az egészség és a környezeti tényezők hatásának felmérésére. Ezen kívül kérdőíveket adnak ki, és biomintákat vesznek a laboratóriumi vizsgálatokhoz. A tanulmány felépítése nem intervenciós kohorsz, de a résztvevők tanácsokat kapnak az egészséggel és a higiéniával kapcsolatban.

A tanulmány célja Ennek a tanulmánynak az a célja, hogy megvizsgálja az anya HIV-státuszának, a méhen belüli és a szoptatás alatti kumulatív HAART-expozíciónak, az immunszuppressziónak és az immunaktivációnak, valamint a környezeti változóknak a csecsemők rövid és hosszú távú kimenetelére gyakorolt ​​hatását alacsony erőforrásokkal rendelkező környezetben. Vizsgálatunk középpontjában a HEU-s csecsemők mortalitása és morbiditása áll, tesztelve a korábbi kohorszok megállapított rizikófaktorait. Az adatokat és a bioanyagokat előretekintően gyűjtik anyáktól és csecsemőktől a terhességtől a 2 éves korig, és összehasonlítják a HEU-t az ugyanabból a közösségből származó HUU-csecsemőkkel. Az átfogó értékeléshez az anya társadalmi-gazdasági státuszának, a háztartási tényezőknek, a társbetegségeknek, beleértve a perzisztens vírusokkal, például citomegalovírussal (CMV), hepatitis b/c-vel (HBV)/(HCV), bakteriális betegségek, például szifilisz és tuberkulózis együttes fertőzéseit. (TB), bélbélférgek, új nem fertőző betegségek, például terhességi diabetes mellitus (GDM) és magas vérnyomású rendellenességek, valamint az anya táplálkozási állapota a terhesség kimenetelére, a csecsemőhalandóságra és -fejlődésre, az immunitásra és az egészségre vonatkozóan tesztelésre kerül. Az UZ-CHS lehetőséget kínál olyan referenciatartományok megállapítására, amelyek jelenleg nem állnak rendelkezésre, a várandós nők különböző alcsoportjai számára kedvező terhességi kimenetelű, klinikai felhasználásra a jövőbeni betegek számára.

Tanulóhelyek és helyi önkormányzati szerepvállalás Harare önkormányzata 12 poliklinikát hozott létre, amelyek mindegyike az egészségügyi alapellátást, a szülést, a szülés utáni gondozást és a családegészségügyi szolgáltatásokat nyújtja. Az orvosi szolgáltatások közé tartozik a HIV-tanácsadás és a gyorsteszt, valamint a HAART kezdeményezése és beadása. Egyéb krónikus állapotok, köztük a GDM és az artériás hipertónia monitorozása és nyomon követése is rendelkezésre áll. Helyszínenként hetente kétszer jön orvos a bonyolult esetek ellátására. A szülési szolgáltatások magukban foglalják a terhesgondozást, az utóvizsgálatokat, valamint a HIV- és szifiliszszűrést és -kezelést. Egy anyának 25 amerikai dollárba kerül, hogy a szülés után 10 napig hozzáférjen a várandós szolgáltatásokhoz, míg az egészségügyi szolgáltatások a csecsemő számára 5 éves korig ingyenesek. Az anyákat arra biztatjuk, hogy a terhesség korai szakaszában (a 4-12. héten) foglaljanak időpontot, és házastársukkal együtt végezzenek HIV-tesztet. Jelenleg a társadalmi-gazdasági kihívások miatt a legtöbb várandós terhesség előrehaladott stádiumában jelentkezik terhesgondozásra a poliklinikán, ez a helyzet veszélyezteti születendő babáit a HIV-fertőzésben, tovább tartva a szegénység és a HIV-fertőzés ördögi körét. A helyszíni megvalósíthatósági felmérést követően a 12 poliklinika közül Kuwadzanát, Dzivaresekwát (Rujeko), Glenview-t és Budiriro-t választották ki az anya- és gyermekegészségügyi szolgáltatások nagyobb mennyisége, a HIV-pozitivitás gyakorisága és a témát célzó versengő kutatások hiánya alapján. ugyanaz a népesség. A kiválasztott négy poliklinika vonzáskörzetében viszonylag stabil közösségek találhatók, amelyek nem gyakran változtatják bérelt szállásukat. Ezekben az intézményekben az önkormányzati ápolónők és szülésznők segítenek olyan tanulmányi eljárásokban, mint például a késő éjszakai szülés közbeni adatgyűjtés. Valamennyi résztvevő Harare délnyugati, sűrűn lakott területein lakik. E közösség lakói viszonylag rossz társadalmi-gazdasági státuszúak, magas a munkanélküliségi ráta. A legtöbb ember általában nem engedheti meg magának napi 3 megfelelő étkezést. A legtöbb család (72%) kevesebb, mint napi 1 dollárból él, és étrendjét a háza körüli kisméretű kertészkedéssel egészíti ki. A családok hasonló szerkezetű és méretű (200 négyzetméteres) házakban élnek. Átlagosan 2-6 család él ezekben a viszonylag kis méretű házakban, és extrém helyzetekben akár 5 családtag is osztozik egy szobán. A vízellátás rendszertelen, ezért 200-1500 méteres távolságban kommunális fúrások alkalmazása szükséges. Ezt a manuálisan letöltött vizet ivásra, főzésre, fürdésre és WC-öblítésre használják. A szennyvíz törések gyakoriak, és előfordulhatnak a fúrólyukak közelében. Négy vizsgálati helyszínünk közül kettőn, Budiriro és Glenview szennyezett fúrásai a közelmúltban kitört 2018-as kolerajárvány epicentrumai voltak. E nagy népsűrűségű területek lakosai aránytalanul nagy terhet viselnek mind a fertőző betegségek, mind a nem fertőző betegségek miatt, mint az azonos város alacsony népsűrűségű területein élők.

Mintanagyság és statisztikai teljesítmény Vizsgálatunk elsődleges végpontja a HEU és a HUU csecsemők csecsemőhalandóságának összehasonlítása két éves korig. Zimbabwéban az első életévben 50, a második életévben pedig 5 csecsemőhalálra számítanak. A HAART előtti korszakban 3,2-3,9-szeres az első életévben magasabb, a második életévben pedig 2-szer magasabb mortalitást vártak. A HEU mortalitása a HAART korszakban hatékonyabb HIV-kezeléssel most már javulhat, és konzervatív becslések szerint a HEU-s csecsemők mortalitása kétszeresére nőtt az első két életévben. Ezért a HUU-csecsemőknél 5,5%-os, a HEU-csecsemőknél 11%-os mortalitást vártunk. A G*Power3-mal végzett erőelemzésünk szerint 1198 nőből álló mintára volt szükség ahhoz, hogy egy kétoldalas analízisben 90%-os hatványt és 0,05 szignifikanciaszintet tudjunk kimutatni. Ezért egy 1200 anyából álló mintát választottunk, 600 HIV-fertőzött és 600 nem HIV-fertőzött anyát. A potenciális résztvevőket a rutin ante-natal care (ANC) látogatások során azonosították a négy Harare Városi Poliklinika bármelyikén. A potenciális résztvevők tájékoztatást kaptak a vizsgálatról, és azok, akik szóban beleegyeztek a részvételbe, megkapták a résztvevői tájékoztató lapot angol nyelven vagy a népi shona nyelvre lefordítva, hogy biztosítsák a vizsgálat céljainak és tevékenységeinek teljes megértését azon a nyelven, amelyet a résztvevő a legjobban ért. A részvétel önkéntes, és a nőknek lehetőségük van a vizsgálat során bármikor visszalépni. Az írástudás szinte egyetemes Zimbabwéban, és minden potenciális résztvevőnek el kell tudnia olvasni és meg kell értenie a beleegyező nyilatkozatot.

Anyák kérdőíves eljárásai és mérései A beiratkozáskor minden anya válaszolt egy átfogó klinikai, viselkedési és környezeti jellemzést célzó strukturált kérdőívre. A konkrét kérdések a szexuális viselkedéssel és a reproduktív egészséggel kapcsolatos problémákkal foglalkoznak, beleértve a szexuális úton terjedő betegségeket és a fogamzásgátlás használatát. Felmérik az általános egészségi állapotot, az egészségre törekvő magatartást, az anyai stresszt és a drog-/gyógynövényhasználatot. HIV-pozitív anyáknál rögzítik a HAART alkalmazását és időtartamát, a társbetegségeket és a HIV-státusz feltárásával és megbélyegzésével kapcsolatos problémákat.

A higiéniával kapcsolatos konkrét kérdések a higiéniával (vécék típusa és száma, csatornarendszer), az ivóvízzel, a felhasznált energia típusával (beltéri szennyezés), a ház típusával, a család által alvásra használt szobák számával és a közös használatú egyének számával kapcsolatos kérdések. egyágyas szobát kérnek. Felmérik a foglalkoztatási helyzetet, a családi havi jövedelmet, az élelmezésbiztonságot, az étrendet, az élelmiszerre, az egészségügyre, az üzemanyagra és a megtakarításokra vonatkozó gazdasági információkat. A mezőgazdasági földterület vagy a háztartási eszközök, például rádiók, televíziók, mobiltelefonok/vezetékes telefonok, hűtőszekrények, kerékpárok, motorkerékpárok/robogók és autók tulajdonjoga további információkat szolgáltat a társadalom-gazdasági helyzetről. A további kérdések az anyai életmódra vonatkoznak, mint például az alkoholfogyasztás, a dohányzás, az alvási szokások, a fizikai tevékenységek, a családon belüli erőszak és a partner támogatása, beleértve a tudást, a hiedelmeket és a gyakorlatokat.

Fizikális vizsgálat és gondozási vizsgálat A beiratkozáskor a vizsgálati szülésznő teljes fizikális vizsgálatot, vérnyomás-ellenőrzést, ödéma és antropometria felmérést végzett. A WHO klinikai vizsgálatát minden HIV-pozitív nő esetében elvégzik. A tápláltsági állapot értékelése standard antropometriai mutatókkal történik, beleértve a testtömeg-indexet (BMI). A középső felkar kerületét (MUAC) az alultápláltság vagy az elhízás indikátoraként fogják használni. A MUAC-t az (acromion és olecranon. Egy dél-afrikai tanulmány kimutatta, hogy a 23 cm-nél kisebb MUAC 18,5 kg/m2 alatti terhesség előtti BMI-t jósol. Gyakorlati okokból a ≤25 cm-es anyai MUAC határértéket használják az alultápláltság jelzőjeként.

A vérnyomást (BP) mérik meg, miután az anyának legalább 5 perc pihenőt biztosítottak. Tenso MED BP gépet használnak, normál vagy nagy mandzsettával, amely legalább a karhossz felét fedi. A terhesség alatti magas vérnyomást a ≥140/90 Hgmm vérnyomás határozza meg, legalább 2 külön méréssel, 4 órás időközzel, a terhesség alatt bármikor. Az enyhe vagy közepesen súlyos magas vérnyomás, mint 140-159 Hgmm szisztolés vérnyomás vagy 90-109 Hgmm diasztolés vérnyomás súlyos magas vérnyomás esetén legalább 160 Hgmm szisztolés vérnyomást vagy legalább 110 Hgmm diasztolés vérnyomást jelent. A krónikus magas vérnyomást a 20. terhességi hét előtt diagnosztizált magas vérnyomás, vagy a terhesség alatt diagnosztizálják, és a szülés után 12 héten túl is fennáll. Minden vizeletmérő pálcika alapján proteinuriában szenvedő anyát a kórházba utalnak preeclampsia kivizsgálására. A pre-eclampsia diagnózisa meghatározott kritériumok szerint történik.

Anya és csecsemő utánkövető látogatások Az anyákat telefonhívással vagy szöveges üzenettel emlékeztetik a közelgő utóvizsgálatokra. Az elmulasztott látogatások esetén továbbra is gyűjthetők adatok, feltéve, hogy a résztvevő a tervezett látogatások hét napján belül megjelenik. Ha egy anya nem jelenik meg a megbeszélt utóellenőrzési időpontjukon, a legközelebbi hozzátartozójával telefonon és/vagy a kutatónővér otthoni látogatásán próbálja meg felvenni a kapcsolatot, szigorúan az anya beiratkozáskor dokumentált preferenciáit követve. A beteg csecsemőket a gyermekorvos látja majd el. Információkat gyűjtenek a szülés helyéről, dátumáról és módjáról, a longitudinális csecsemőtáplálási gyakorlatokról, valamint átfogó információkat az egészségről, a fejlődésről és a környezetről. A beiratkozáshoz hasonló kiterjedt kérdőíveket 6, 12, 18 és 24 hónap elteltével ismételten ki kell tölteni. Az anyák és csecsemőik fizikális vizsgálatát az anyáknál a 6. hétig, a babáknál pedig minden vizit alkalmával végezzük. A vizsgálati eljárások közé tartozik a vér, az anyatej és a széklet kiterjedt biológiai mintavétele is. Minden látogatás alkalmával a klinikán való részvétel szállítási költségtérítését, valamint néhány frissítőt biztosítanak. Az anyát megkérhetik, hogy hagyja abba, ha egymást követően legalább két egymást követő tervezett tanulmányi látogatásra ok(ok) vagy kommunikáció nélkül nem jelenik meg.

Csecsemőhalandóság Ennek a vizsgálatnak a kulcsfontosságú eredménye a „csecsemőhalál” összetett végpontja, amelyet halvaszületésként (születési terhességi kor ≥20 hét) és életük első két évében meghalt csecsemőkként határoznak meg. Az újszülöttkori halálozások (0-364 nap) további három alcsoportra oszthatók: korai újszülöttkori halálozás (0-6 nap), késői újszülöttkori halálozás (7-27 nap) és poszt-neonatális halál (28-364 nap). A késői elhalálozásokat (365-730 nap) is rögzítik. A halálozást külön kell értékelni a HIV-nek kitett és fertőzött (HEI), a HEU és a HUU csecsemők esetében.

A szülés során jelentkező káros következmények közé tartozik a koraszülés. A terhességi kort korai koraszülöttre (≤31 hét), késői koraszülöttre (32-36 hét), termésre (legalább 37 hét) és koraszülés utánira (>42 hét terhesség) osztják. A kedvezőtlen születési kimenetelek közé tartozik, hogy születéskor újraélesztésre van szükség a születési fulladás vagy légzési distressz szindróma miatt. A születési asphyxia minden olyan egészségügyi állapot, amely az újszülött oxigénellátásának csökkenéséből vagy megszakításából ered a születés előtt, alatt vagy röviddel azután. További nemkívánatos kimenetelek az alacsony Apgar-érték 5 percnél (<7), a terhességi korhoz képest kicsi, azaz a terhességi korhoz tartozó 10. percentilis alatti testtömeg/hosszúság, LBW (<2500 g, az élet első órájában mérve, nagyon LBW (<1000) g), magzati makroszómia (születési súly > 4000 g, mikrokefália <2 SD az átlagtól, születési rendellenességek (rendellenességek, extra ujjak) és ikerszülés.

A csecsemő növekedését a WHO definíciói szerint Z-pontszámként fejezik ki: életkor szerinti súly (WAZ), magasság-életkor (HAZ), súly-magasság (WHZ) és fejkörfogat-életkor (HCAZ) ). A növekedési eredményeket folyamatos változóként értékeljük (az elért Z-pontszám és a Z-pontszám változása a látogatások között). Ezen kívül kategorikus eredmények; a mérsékelt soványság, a satnyaság, a súlyos csökevény, az alulsúly és a mikrokefália értékelése HAZ <-2, HAZ <-3, WAZ <-2; és HCAZ <-2. A csecsemők növekedésének biológiai markereként a plazma inzulinszerű növekedési faktor-1 szérumszintjét 6 hetes korban ELISA-vizsgálatokkal, a Minneapolis R&D Systems vállalattal.

A csecsemők MUAC-ját 6 hetes kortól, valamint a MUAC érzékenységét, specifitását, pozitív prediktív értékét és negatív prediktív értékeit mérik a 0-6 hónapos korú HEI, HEU és HUU csecsemők satnya, alulsúly, soványság, vérszegénység és káros idegrendszeri fejlődés tekintetében. , 6-<12 hónap és 12-24 hónap kerül meghatározásra. A pazarlás aranystandardjaként a WHZ-t fogják használni.

A csecsemőmorbiditás felmérése Szüléskor az anyáknak morbiditási naplót adnak ki. Az egészségügyi szakemberek beteglátogatás vagy kórházi kezelés során dokumentálják az orvosi jelentéseket a morbiditási naplóban. Ezek a következők: újszülöttkori hipoglikémia, újszülöttkori sárgaság, csecsemőkori vérszegénység, bőrkiütések, veleszületett fertőzések, a fertőzés függőleges átvitele 2 éven keresztül, bármilyen kórházi kezelés (gyakorisága és időtartama), beteglátogatások (dátumok és időtartam), dokumentált helyi fekvőbeteg-kezelések, satnyaságok , sorvadás és rendellenes idegrendszeri fejlődés. A megbetegedések után a nyomon követési feljegyzések rögzítésre kerülnek a naplóban. Az anyák folyamatosan szubjektíven értékelik a csecsemő jóllétét, és arra ösztönzik, hogy minden gyermekbetegséget dokumentáljanak a naplóban az átfogó dokumentáció érdekében. A naplót a kilépéskor, 24 hónapos korban benyújtják a vizsgálathoz.

Csecsemőfejlődés Az idegfejlődési eredményeket hat héttől két éves korig értékelik a Denver II szűrőeszköz segítségével. Ez az eszköz felméri a durva és finom motoros képességeket, a nyelv fejlődését, a szociális készségeket, a figyelem mértékét, az általános megfelelést és a félelmet. Ezenkívül a csecsemők fejlődésének mérföldkövei (pl. fogzás, első ülés, séta vagy beszéd ideje) rögzítésre kerül.

Anyai biominták Minden vizit alkalmával biológiai mintákat vesznek, beleértve a teljes vért, plazmát és szérumot, vizeletet és anyatejet; a székletet, a köldökzsinórvért, a magzatvizet és a méhlepényt a szüléskor gyűjtik. Az érzékeny mintákat (széklet, tej, vizelet) a feldolgozás előtt legfeljebb 4 órára 4°C-ra helyezzük. Minden mintát biobankban tárolnak -80°C-on a felvételt követő legfeljebb 6 órán belül.

Az anyai székletmintákat a bélprotozoák és a helminthes trophozoiták és a petesejtek kimutatására direkt nedves mikroszkóppal és formal-éter koncentrációs technikával szűrik.

Az anyák teljes vérképének meghatározása A teljes vérkép (FBC) értékeléséhez a vénás vért 5 ml-es etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) csövekbe gyűjtik vacutainer rendszerrel, és egy Mindray© Hematology 3-részes differenciálművel, 16 paraméteres BC3600 Analyser segítségével elemzik. Kína teljes vér felhasználásával. A terhesség alatti vérszegénység diagnosztizálására a WHO definícióját kell alkalmazni (a hemoglobin koncentrációja <11,0 g/dl). Csecsemők vérmintái A csecsemők vénás vérét lehetőség szerint 7-10 napon belül gyűjtik az FBC-hez. Amikor csak lehetséges, a plazmamintákat tároljuk. Az összegyűjtött vér mennyisége a csecsemő súlyától függően az ajánlott mennyiségen belül marad (pl. a teljes vértérfogat ≤ 1-5%-a 24 óra alatt és ≤ 10% 8 hét alatt). A súlyosan beteg csecsemőktől és a súlyos vérszegénység gyanúja esetén a klinikai értékelés szerint nem vesznek vért. A kiszáradt vérfoltokat minden vizit alkalmával gyűjtik teljes vérmintával vagy a sarok tűszúrásával. 3-5 csepp vért összegyűjtünk, Whatman szűrőpapíron szárítjuk és -80 ◦ Celsius-on tároljuk.

Anyák vércukorszintje A terhességi cukorbetegség szűrése a szérum nem éhgyomri vércukorszintje alapján történik a nők egy alcsoportján a Mindray BS200 Chemistry Analyzer (Mindray, Kína) segítségével, beleértve a glikozilált hemoglobulin (HbA1c) szintjét is. A HbA1c 6,5%-os határértéke azonosítja a nem diagnosztizált cukorbetegséget, míg a ≥5,6%-os HbA1c azt jelzi, hogy a WHO irányelvei szerint fokozott a jövőbeni cukorbetegség kockázata.

Anyai vese- és májfunkciós profilok A kreatinint, a karbamidot és az elektrolitokat (nátrium, kálium és klorid) az anyák szérummintáin a Beckman Coulter AU680 kémiai elemzővel (Németország) határozzák meg. A kreatininszinteket az anya glomeruláris filtrációs sebességének becslésére használják a Modified for Diet in vesebetegségben egyenlet segítségével. A májfunkciót és a kolesztázist szérumalbumin, fibrinogén, bilirubin, laktát-dehidrogenáz (LDH), alanin-transzamináz (ALT), aszpartát-aminotranszferáz (AST), alkalikus foszfatáz (ALP) és gamma-glutamil-transzferáz (GGT) segítségével értékelik.

A csecsemők máj- és vesefunkciós tesztjeit minden 6. és 24. hónapos csecsemőnél értékelik, feltéve, hogy elegendő anyag áll rendelkezésre.

Az anyai lipid- és csontprofilok A nagy sűrűségű lipoprotein koleszterin (HDL-C), az alacsony sűrűségű lipoprotein koleszterin (LDL-C), az összkoleszterin (TC) és a kiindulási TC/HDL-C arány meghatározása szérum felhasználásával történik a beiratkozáskor és a 24. hónap után. nyomon követése. A TC-t használjuk az LDL-C kiszámításához, ha a koncentráció 4,4 mmol/l alatt van. Az anyai csontprofilok tekintetében a szérum ionizált kalcium-, foszfor-, albumin- és ALP-szintjének longitudinális mérését végzik el terhesség alatt és az elválasztáskor.

A HIV anyai diagnózisa A HIV-fertőzés anyai szűrése a zimbabwei nemzeti HIV-tesztelési és tanácsadási irányelvek szerinti sorozatos tesztelési algoritmussal történik. Kvalitatív gyors immunkromatográfiás vizsgálatokat, Standard Diagnostics (SD) Bioline HIV-1/2 3.0 (SD Inc., Kyonggi-Do, Dél-Korea) használják a kezdeti szűréshez. A pozitív teszteket az Alere DetermineTM HIV-1/2 kit (Abbott Diagnostics, USA) segítségével igazoljuk. A Western-blot módszert a határozatlan vizsgálati eredményekhez használják. A HIV-vel nem fertőzött anyák HIV-tesztjét 6 hónapos időközönként megismétlik a szero-konvertálók azonosítása érdekében.

A csecsemők HIV diagnosztizálása Minden HIV-nek kitett csecsemőnél a HIV korai felismerése a COBAS1 AmpliPrep/COBAS1 TaqMan1 HIV-1 kvalitatív teszt (Roche Molecular System) segítségével történik a gyártó utasításainak megfelelően. A szüléstől az elválasztásig vagy a HIV-fertőzés diagnosztizálásáig minden vizit alkalmával teszteket végeznek.

HIV-1 RNS terhelés számszerűsítése Az anyai és csecsemő plazmamintáiban a HIV-1 RNS terhelést a beiratkozáskor, illetve 24 hónapos korban, egy automata TaqMan Cobas AmpliPrep Roche Diagnostics (Branchburg NJ) segítségével határozzák meg, a gyártó utasításai szerint. A vizsgálat alsó kimutatási határa 20 kópia/ml.

Az anya-csecsemő immunállapotának értékelése Az anyai abszolút CD4+ T-limfocitaszámot az összes HIV-pozitív EDTA vérmintáiban a Partec Cyflow számláló (Németország) segítségével számlálják a felvételkor és 12 hónapos időközönként. Az elemzéseket a vérvételt követő 6 órán belül elvégzik.

HAART-szintek Az efavirenz, a lamivudin és a tenofovir szintjét a különböző anyai kompartmentekben, beleértve a plazmát, az anyatejben, a vizeletben és a magzatvízben, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával kell mérni.

Az anyai társfertőzések értékelése Minden anya és minden expozíciónak kitett csecsemő HBV-szűrése a HBV felszíni antigén (HBsAg) mérésével történik, az anti-HBsAg és anti-core antitestek kimutatása immunkromatográfiás, Pointecare Diagnostics, USA készletekkel történik a gyártó utasításai szerint. . Az anyai szérum CMV DNS-terhelését és a veleszületett CMV-t a RealStar CMV PCR kit v1.0 Germany segítségével mérjük, a vírus DNS izolálását követően a QIAamp MinElute Virus Spin Kit Germany segítségével.

A csecsemők kiszáradt vérfoltjait minden expozíciónak kitett csecsemő esetében értékelik fertőzésmarkerek, CMV, HBV, HCV és HIV szempontjából. Az SD Bioline 3.0 kvalitatív immunkromatográfiás készlet használatával az anti-Treponema pallidum antitest izotípusokat használják az anyai szifilisz profilalkotásához. A Rapid Plasma Reagin (RPR) tesztet a nemi betegségek kutatólaboratóriumának (VDRL) mikroszemcsés szenet tartalmazó antigénjének kimutatására fogják használni. A szifilisz szerológiát 24 hónapos korban csecsemők plazmáján végzik el expozíciónak kitett csecsemőknél az SD Bioline 3.0 kvalitatív immunkromatográfiás készlet segítségével.

A HIV-vel és társfertőzésekkel szembeni fogékonyság immunogenetikája A humán leukocita antigén (HLA) és a gyilkos sejt immunglobulin-szerű receptorok (KIR-ek) tipizálását anyai és csecsemői DNS-mintákon DNS-szekvenálás és szekvencia-specifikus primer polimeráz láncreakció (PCR) segítségével végzik el. korábban leírták. A HLA és KIR variánsok összefüggésben állnak az anya virológiai állapotával, immunállapotával és klinikai kimenetelével.

A csecsemők humorális immunválaszai az EPI-vakcinákra A fertőző betegségek elleni immunitás összefüggései a HEU-csecsemők körében továbbra is kevéssé ismertek. A kanyaró, rubeola, rotavírus, poliovírus, hepatitis B vírus (HBV), diftéria, tetanusz toxoid, pertussis, pneumococcus és b típusú Haemophilus influenza (Hib) elleni antitest-titereket kereskedelmi ELISA-alapú módszerekkel fogják mérni. A méréseket az oltás után 12, 18 és/vagy 24 hónapos korban kell elvégezni. A védelemmel korreláló szérumtiterek (pl. A rotavírus elleni immunglobulin A ≥20 U/mL értékét HUU, HEI és HEU csecsemőkben értékelik.

A csecsemők atópiás megnyilvánulásainak és szenzibilizációjának értékelése Az atópiás dermatitisz okai és időzítése továbbra is rosszul van leírva az SSA-ban. Az anyák allergiás állapotait a harmadik trimeszterben egy részletes kérdőívvel értékelik az anyák étrendjére vonatkozóan, beleértve az étkezési vágyat, az anyai droghasználatot, valamint az allergiás és bélrendszeri tüneteket. Szüléstől kezdődően a kutató szülésznő vagy ápolónő minden csecsemőt fizikálisan megvizsgál az atópiás dermatitisz jelenlétére, amelyet viszkető kiütés és/vagy látható hajlékony bőrgyulladás jelenléte határoz meg. A pelenkakiütés, a szem körüli bőrkiütés és/vagy a fejbőr hámlása nem tekinthető az ekcéma diagnosztikájának. A kiválasztott csecsemővérminták teljes és specifikus szérum immunglobulin E-jét (IgE) egy Immuno-assay analizátorral (Thermofisher, Freiburg, Németország) mérik az atópiás állapot klinikai diagnózisának alátámasztására, a korábban leírtak szerint. Konkrétan a tyúktojás, tehéntej, földimogyoró, aeroallergén, fű pollen, macska-, kutyaszőr és háziporatka elleni IgE antitesteket értékelik. Szenzitizáltnak minősülnek azok a csecsemők, akiknek specifikus szérum IgE-szintje >0,3 NE/ml a vizsgált élelmiszerek vagy inhalációs allergének közül egy vagy több ellen. Az ételallergiák összefüggésbe hozhatók a csecsemők morbiditásával, a terhesség előtti kábítószer-használattal és a táplálkozással, beleértve azt az ételt is, amelyre az anyák vágytak a terhesség alatt.

A résztanulmányok összefoglalása

1. A bélmikrobióta alvizsgálat Ennek az altanulmánynak az a célja, hogy felmérje, hogyan befolyásolja a HIV-fertőzés és a HAART-használat a bélmikrobióta érését, hogy megértsük a környezeti enterális diszfunkció (EED) patogenezisét. A terhességtől 24 hónapos korig szekvenciális anya-csecsemő székletmintákat használnak fel 16 kis alegység (S) riboszomális ribonukleinsav (rRNS) szekvenálás elvégzésére a törzs és a működési taxonómiai egység összetételének 97%-nál nagyobb szekvenciaazonossággal, valamint mikrobiális szekvencia meghatározására. sokféleség. A kiválasztott mintákban bakteriális teljes genom metagenomikai shotgun szekvenálást végeznek a mikrobiota metabolikus potenciáljának azonosítására. Továbbá tömegspektrometriát kell végezni a metabolomra vonatkozóan, beleértve a mikrobiális transzlokáció markereinek értékelését a sérült bélfalon keresztül, mint például a lipopoliszacharidokat (LPS) és az endotoxin magantitestet (EndoCAb), valamint a bélben található zsírsavkötő fehérjét (I-FABP) az enterocita markereként. kár. A mikrobióta és a metabolit markerek összefüggésben állnak a csecsemő növekedésével, fejlődésével és a fertőző betegségekre való fogékonyságával.
2. Immunometabolomikai alvizsgálat Ennek az alvizsgálatnak a célja, hogy legalább 24 plazmagyulladásos immunaktivációs markert vizsgáljon meg ELISA-alapú, Luminex technológiával végzett multiplex vizsgálattal, mint kockázati tényezőt a HIV-fertőzött nőknél a kedvezőtlen terhességi kimenetelek és az ezt követő károsodott csecsemőnövekedés és -fejlődés kockázati tényezőiként. Ebbe a vizsgálati vizsgálatba 50 ≥50 HIV-fertőzött nőt választunk ki, akik hosszú távú (>7 hónap), középtávú (1-7 hónap) és nem/rövid távú (nincs vagy <1 hónap) HAART-expozícióban szenvednek, és nem fertőzöttek. nők mint kontrollok. A metabolom és a mitokondriális diszfunkció értékelésére tömegspektrometriás technikákat alkalmaznak a metabolitok széles skálájának mérésére, beleértve az aminosavakat, a reaktív oxigénfajtákat, a triglicerideket, a diacilglicerideket, a koleszterint, a foszfolipideket, a zsírsavakat, a peroxidált lipideket és az oxilipideket.
3. Sejtmediált immunitás alvizsgálat Feltételezzük, hogy az NK-sejtek számának és működésének megváltozása fordulhat elő HEU-csecsemőkben, és hajlamosíthatja őket a perzisztens vírusokkal összefüggő súlyos fertőzésekre és rosszindulatú daganatokra. Elegendő ≥2 ml vértérfogatú csecsemőknél a perifériás vérből származó mononukleáris sejteket izoláljuk rövid, közepes és hosszú távú anyai HAART expozícióval rendelkező HUU és HEU csecsemőkből 24 hónapos korban, hogy meghatározzuk a T-sejtek és az NK számát és funkcióját. sejteket a korábban leírtak szerint.
4. Látens TB társfertőzés alvizsgálat Feltételezzük, hogy a nem diagnosztizált látens tbc részben megmagyarázhatja a csecsemők megnövekedett csecsemőhalálozását alacsony erőforrások mellett. A TST-t a látens tuberkulózis szűrésére használták; azonban a Zimbabwéban rutinszerűen beadott BCG-vakcinával való interakció miatt a TST-specifitás nagymértékben csökkenhet a mi vizsgálati populációnkban. TB, IGRA-k) a látens tbc-nek a terhesség alatti és a szülés utáni 6 héttel a nők alcsoportjában történő tesztelésére fogják használni, és a TST-vel szemben értékelik. Ezenkívül a placenta mintákat megvizsgálják a tbc-gyulladásra utaló szövettani elváltozások szempontjából. Az IGRA mérései és a TST elváltozások mérete korrelál a káros anyai és csecsemői kimenetelekkel.
5. Anyai stressz alvizsgálat Ez az anyai stressz prevalenciáját, kockázati tényezőit és megküzdési mechanizmusait fogja felmérni az észlelt stressz kérdőív segítségével a beiratkozáskor és 6 héttel a szülés után.
6. HIV/HAART expozíció és idegfejlődési eredmények Ez az alvizsgálat a HIV-fertőzéssel és a meghosszabbított HAART-expozícióval kapcsolatos lehetséges hosszú távú idegrendszeri fejlődési következményeket értékeli a Mullen-eszköz segítségével 12 és 24 hónapos korban.

A jövőbeli tanulmányok követhetik a csecsemőket a serdülőkorig. Egy párhuzamos vidéki megfigyelési kohorsz kívánatos a jelenlegi városi alapú tanulmányhoz kapcsolódó háztartási és környezeti zavarok ellenőrzésére.