A HIV-pozitív emberek immunfunkciójának mérésére szolgáló vérvizsgálat értékelése HIV-negatív emberekkel összehasonlítva (QFM)

A nagyon aktív antiretrovirális terápiában (HAART) részesülő fertőzött egyének HIV-1-ellenőrzésére szolgáló rutin virológiai és immunológiai tesztek közé tartozik a CD4 T-sejt-számlálás, a HIV-1 plazma vírusterhelése és a HIV-1 genotípusos rezisztencia vizsgálata kiinduláskor a kezelésben nem részesült betegeknél és virológiai kudarc után a HAART során.

A CD4 T-sejtszám a T helper limfociták számának mérése, és a CD4/Cluster of Differenciation 8 (CD8) aránnyal együtt helyettesítő markerek az immunrendszer állapotának értékelésére, és a progresszió nyomon követésére használják. és meghatározza a HIV-betegség stádiumait a fertőzött alanyoknál akár a kezelés alatt, akár azon kívül. A növekvő vagy magas CD4-szám és CD4/CD8-arány 1 és 4 között a vírusreplikáció szabályozására utal a HAART eredményeként (vagy a nem kezelt alanyok inherens immunaktivitása miatt), míg a csökkenő vagy alacsony CD4-szám és a CD4/CD8 arány <1 a HAART sikertelenségére és/vagy az immunrendszer romlására utal.

A HIV-1 plazma vírusterhelése a plazmában lévő vírusrészecskékből származó HIV-1 RNS másolatok számát méri. A kimutatható plazma vírusterhelés a HIV-1 replikációját jelzi, míg a nem detektálható plazma vírusterhelés a HIV-1 replikáció szabályozására utal. Mindazonáltal, a kereskedelmi vizsgálatoknál alkalmazott alsó kimutatási határ 50 kópia HIV-1 RNS/ml, a plazmavírus alacsonyabb szintje nem mutatható ki ezekben a vizsgálatokban, de a HAART-ban szenvedő betegek körülbelül 70%-ánál kimutatható, 50-nél kisebb határértékkel végzett kutatási tesztekkel. HIV-1 RNS/ml másolatokat készít. Az ilyen kutatáson alapuló plazma vírusterhelési vizsgálatokat soha nem használják rutin monitorozásra a fertőzött alanyok klinikai ellátásában.

Míg a CD4-szám és a HIV-1 plazma vírusterhelése elválaszthatatlanul összefügg a HIV-1 betegséggel összefüggésben, és jelenleg a HIV-1 HAART-re adott válaszának meghatározására jóváhagyott tesztek, ezeknek a vizsgálatoknak jelentős hiányosságai vannak a HIV hatékony kezelésében, az alábbiak szerint:

• CD4-szám és immunrendszeri diszfunkció. A HAART eredményeként megnövekedett vagy magas CD4-szám vagy normál CD4/CD8-arány nem feltétlenül jelent veszélytelen immunrendszert, de az immunrendszer működési zavarának állapotát jelezheti a folyamatos HIV-replikációból eredő immunaktiváció eredményeként.
• HIV Celluláris rezervoárok: A plazmában a standard plazma vírusterhelési vizsgálattal nem észlelhető alacsony szintű sejthez kapcsolódó HIV replikáció. A sejthez kapcsolódó HIV replikációt a HIV polimeráz láncreakció (PCR) határozza meg az extrahált és tisztított teljes sejtasszociált RNS-ből vagy in situ hibridizáció a sejthez kapcsolódó HIV-1 RNS-hez ép sejtekben, és körülbelül 62-80%-ban mutatható ki HAART-on. plazma vírusterhelése <50 kópia HIV-1 RNS/ml. A célzott kezelés, a sejthez kapcsolódó HIV-gyógyszer hatékonysága, a sejthez kapcsolódó HIV-rezisztencia és a HIV sejtes forrásának azonosítása HIV-sejt-rezervoár-vizsgálatokkal, és nem a plazma vírusterhelésével határozható meg.
• Funkcionális immunválasz különbségek a sejthez kapcsolódó HIV-1 transzkripciós aktivitás és nem kimutatható plazma vírusterhelés alapján. A keringő T-limfocitákban krónikus, alacsony szintű HIV-replikációval és nem kimutatható plazmavírus-terheléssel rendelkező HAART-kezelésben részesülő betegek immunválaszai közé tartozik a HIV-1 p24 antigén jelentős in vitro proliferációja, a tetanusz toxoid antigén visszahívására való szignifikáns válasz hiánya és a patogén antigénekre adott nagyobb válaszreakciók, mint összehasonlítva HAART-ban szenvedő betegeknek, akiknél a HIV-replikáció nem mutatható ki a memória T-limfocitákban és a plazma vírusterhelése nem mutatható ki.
• A plazmából származó HIV-1 virionok tapadása az eritrocitákhoz. Az eritrociták megkötik a plazmához kapcsolódó HIV-1 virionokat egyes HAART-kezelésben részesülő betegek teljes vérében. Míg ezeknek a betegeknek a plazma vírusterhelése nem mutatható ki, a megfelelő teljes vér vírusterhelési értéke 234 és 82 878 HIV-1 RNS/ml teljes vér kópia között van. Ezek a betegek, akiknél kimutatható a teljes vér vírusterhelése, de a plazma vírusterhelése nem volt kimutatható, klinikailag előrehaladott HIV-fertőzést mutatnak.
• CD4 számok és megmagyarázhatatlan válasz a HAART-ra. A CD4-szám csökkenése a kimutathatatlan plazmavírus-terhelés mellett a HIV-plazmavírus vörösvértestekhez való megkötésével vagy a sejthez kapcsolódó HIV-replikáció alacsony szintjével magyarázható.
• Hibás/nem fertőző virionok: A HIV-1 plazma vírusterhelési tesztjei nem használhatók a fertőző és nem fertőző vagy hibás vírusrészecskék megkülönböztetésére, mivel a keringő HIV-1 virionok <0,2%-a (vagy 1:477 és 1:117 803 között) fertőző. Következésképpen azok a genotípusos és fenotípusos gyógyszerrezisztencia vizsgálatok, valamint a HIV-1 tropizmus vizsgálatok, amelyek a plazmavírus HIV-1 RNS-éből származó HIV-1 RNS-t alkalmazzák, többnyire nem fertőző vagy hibás vírusból hoznak eredményt. A fertőző és nem fertőző vagy hibás vírusok nukleinsavszekvenciái közötti különbséget nem vizsgálták megfelelően a diagnosztikai és monitorozó tesztekkel kapcsolatban. A túlnyomórészt nem fertőző vagy hibás vírusrészecskékből származó vírusszekvenciáknak a fertőző vírusrészecskékkel szembeni felhasználásának következményei a gyógyszerrezisztencia és tropizmustesztek során a HIV-fertőzött betegek klinikai ellátásában nem ismertek.

Következésképpen egyre több bizonyíték bizonyítja, hogy a CD4-szám és a plazma vírusterhelés nem használható fel a HIV HAART-re adott válaszának teljes értelmezésére. Ezen túlmenően egyre több adat bizonyítja, hogy a HIV-1 folyamatos replikációja kimutatható plazma vírusterhelés hiányában HIV-t és vírusantigént generál, ami immunaktivációt eredményez, ezáltal lehetővé teszi a HIV patogenezisét, amint azt a megnövekedett T-sejt-forgalom és -proliferáció, valamint a nem fertőzött T-sejtek apoptózisa mutatja. valamint poliklonális B-sejt, természetes gyilkos (NK) sejt és monocita aktiválás. Különféle sejtalapú markereket társítottak a HIV patogeneziséhez, beleértve az immunaktivációs markereket: Humán Leukocita Antigén (HLA)-Sejtfelszíni Receptor (DR) (HLA-DR), 38-as differenciálódási klaszter (CD38), 69-es differenciálódási klaszter (CD69), klaszter a 71-es differenciálódás (CD71), az 57-es differenciálódás öregedési marker klasztere (CD57), a Ki67 proliferációs marker és a 95-ös differenciálódás apoptózis marker klasztere (CD95) (FasR). Összességében ezek a HIV patogenezis markerei lehetővé teszik a gyulladásos válaszokat, az újratelepülést, a HIV-1 evolúcióját és a gyógyszerrezisztenciát, valamint az immunrendszer fokozatos romlásával járó, nem opportunista betegségeket.

Az immunfunkciós tesztek értékelik az immunrendszer egy összetevőjének működőképességét. Ezek általában in vitro alapú vizsgálatok, és a limfociták specifikus antigéneknek vagy mitogéneknek való expozícióját követő kimenetel mérésére szolgálnak. Ennek eredménye lehet egy immunstimulációs marker mérése, mint például a gamma-interferon szekréciója, a tríciált timidin beépülése a sejt genomiális DNS-ébe az antigén és/vagy mitogén visszahívására adott limfoproliferatív sejtválasz eredményeként, vagy in- vivo alapú Tuberculin Skin Test, a bőr indurációjának mérete a tuberkulinból tisztított fehérjeszármazék beadása helyén.

A Cellestis Limited – a Qiagen vállalat nemrégiben kifejlesztette a QuantiFERON® Monitor (QFM vagy CST007) tesztet, amely a szabadalmaztatott QuantiFERON® technológián alapul, hogy mérje a sejt által közvetített immunfunkciót. Ez egy in vitro diagnosztikai teszt, amely stimulánsok kombinációjával specifikusan stimulálja a különböző immunsejteket a teljes vérben, és méri a plazmában felszabaduló gamma-interferon mennyiségét ELISA-val (Enzyme-linked immunosorbent assay). Ezért ennek a tanulmánynak a célja a QFM hasznosságával foglalkozik HIV-fertőzött környezetben, és mivel a HIV-patogenezis a sejtekkel kapcsolatos markerek befolyásolják az immunfunkciót, a HIV Viral Reservoir assay vérvizsgálatot is bevonják, hogy jobban megértsék az immunfunkció szintjét a kohorszokon belül és azok között. .

Mennyi időbe telik? Egy körülbelül 1 órás látogatás Dr. Gatpolintannal és klinikai vizsgálati koordinátorával, hogy válaszoljon a kérdésekre, majd körülbelül 10 perc vérvételre (kilenc háztömbnyire Dr. Gatpolintan irodájától).

A vizsgálati eredményeket (a QFM és a CD4 számok és a CD4/CD8 arányok közötti összefüggést) a vizsgálati alany felvételét követő átlagosan 1 éven belül értékelik, beleértve az adatok bemutatását is.