Vyhodnocení krevního testu k měření imunitní funkce u HIV pozitivních lidí ve srovnání s HIV negativními lidmi (QFM)

Rutinní virologické a imunologické testy k monitorování HIV-1 u infikovaných jedinců na vysoce aktivní antiretrovirové terapii (HAART) zahrnují stanovení počtu CD4 T-buněk, virové nálože HIV-1 v plazmě a testování genotypové rezistence HIV-1 na začátku léčby u dosud neléčených pacientů a po virologickém selhání během HAART.

Počet CD4 T-buněk je měřením počtu pomocných T lymfocytů a ve spojení s poměrem CD4/shluk diferenciace 8 (CD8) jsou náhradními markery pro hodnocení stavu imunitního systému a používají se ke sledování progrese. a definovat stádia onemocnění HIV u infikovaných subjektů buď při léčbě, nebo mimo ni. Zvyšující se nebo vysoký počet CD4 a poměr CD4/CD8 mezi 1 a 4 naznačuje kontrolu replikace viru jako výsledek HAART (nebo z vlastní imunitní aktivity u neléčených subjektů), zatímco klesající nebo nízký počet CD4 a poměr CD4/CD8 <1 naznačuje selhání HAART a/nebo zhoršující se imunitní systém.

Virová nálož HIV-1 v plazmě měří počet kopií RNA HIV-1 pocházejících z virových částic v plazmě. Detekovatelná plazmatická virová zátěž indikuje replikaci HIV-1, zatímco nedetekovatelná plazmatická virová zátěž naznačuje kontrolu replikace HIV-1. Nicméně se spodním limitem detekce 50 kopií HIV-1 RNA/ml pro komerční testy mohou nižší hladiny plazmatického viru zůstat těmito testy nedetekovány, ale detekovatelné u přibližně 70 % pacientů na HAART pomocí výzkumných testů s mezní hodnotou <50 kopií HIV-1 RNA/ml. Takovéto výzkumné testy plazmatické virové zátěže se nikdy nepoužívají pro rutinní monitorování v klinické péči o infikované subjekty.

Zatímco počty CD4 a virová nálož HIV-1 v plazmě jsou v kontextu onemocnění HIV-1 neoddělitelně spjaty a v současnosti schválené testy ke stanovení odpovědi HIV-1 na HAART mají tyto testy významné nedostatky pro účinnou léčbu HIV, jak je definováno níže:

• Počet CD4 a imunitní dysfunkce. Zvyšující se nebo vysoké počty CD4 nebo normální poměry CD4/CD8 v důsledku HAART nemusí nutně představovat nekompromitovaný imunitní systém, ale mohou představovat stav imunitní dysfunkce v důsledku imunitní aktivace z pokračující replikace HIV.
• HIV Buněčné rezervoáry: Nízké hladiny replikace HIV spojené s buňkami nedetekované v plazmě standardním testem virové zátěže v plazmě. Replikace HIV asociovaná s buňkami se určuje pomocí polymerázové řetězové reakce HIV (PCR) z extrahované a purifikované celkové buněčně asociované RNA nebo in-situ hybridizace s buněčně asociovanou HIV-1 RNA v intaktních buňkách a je detekována u přibližně 62 % až 80 % pacientů na HAART s plazmatickou virovou náloží <50 kopií HIV-1 RNA/ml. Cílená léčba, účinnost léčiva na HIV související s buňkami, rezistence na HIV související s buňkami a identifikace buněčného zdroje HIV mohou být stanoveny testy na rezervoárech buněk HIV, a nikoli plazmatickou virovou zátěží.
• Rozdíly ve funkční imunitní odpovědi založené na transkripční aktivitě HIV-1 spojené s buňkami a nedetekovatelné plazmatické virové zátěži. Imunitní reakce u pacientů na HAART s chronickou, nízkou úrovní replikace HIV v cirkulujících T lymfocytech a nedetekovatelnou plazmatickou virovou zátěží zahrnují významnou in-vitro proliferaci na HIV-1 p24 antigen, žádnou významnou odezvu na reminiscenční antigen tetanický toxoid a vyšší odezvy na patogenní antigeny ve srovnání pacientům na HAART s nedetekovatelnou replikací HIV v paměťových T lymfocytech a nedetekovatelnou plazmatickou virovou zátěží.
• Adherence virionů HIV-1 pocházejících z plazmy k erytrocytům. Erytrocyty sekvestrují viriony HIV-1 spojené s plazmou v plné krvi od některých pacientů na HAART. Zatímco tito pacienti mají nedetekovatelnou plazmatickou virovou zátěž, odpovídající plná krev má hodnoty virové zátěže v rozmezí od 234 do 82 878 kopií HIV-1 RNA/ml plné krve. Tito pacienti s detekovatelnou virovou náloží plné krve, ale s nedetekovatelnou plazmatickou virovou náloží vykazují klinicky pokročilou infekci HIV.
• Počet CD4 a nevysvětlitelná odpověď na HAART. Snížení počtu CD4 s nedetekovatelnou plazmatickou virovou náloží může být vysvětleno sekvestrací HIV plazmatického viru do erytrocytů nebo nízkými hladinami replikace HIV spojené s buňkami.
• Defektní/neinfekční viriony: Testy virové zátěže v plazmě HIV-1 nelze použít k rozlišení infekčních a neinfekčních nebo defektních virových částic, protože <0,2 % cirkulujících virionů HIV-1 (nebo od 1:477 do 1:117 803) je infekční. V důsledku toho tyto testy genotypové a fenotypové lékové rezistence a testy tropismu HIV-1, které využívají HIV-1 RNA odvozenou z plazmatického viru HIV-1 RNA, budou generovat výsledky z většinou neinfekčního nebo defektního viru. Rozdíl v sekvencích nukleových kyselin mezi infekčním a neinfekčním nebo defektním virem nebyl náležitě zkoumán ve vztahu k diagnostickým a monitorovacím testům. Důsledky využití virových sekvencí z převážně neinfekčních nebo defektních virových částic na rozdíl od infekčních virových částic pro testy lékové rezistence a tropismu v klinické péči o pacienty infikované HIV nejsou známy.

V důsledku toho stále více důkazů ukazuje, že počty CD4 a plazmatickou virovou zátěž nelze použít k úplné interpretaci odpovědi HIV na HAART. Navíc přibývající data dokazují, že pokračující replikace HIV-1 v nepřítomnosti detekovatelné plazmatické virové zátěže generuje HIV a virový antigen, což vede k imunitní aktivaci, čímž umožňuje patogenezi HIV, jak bylo prokázáno zvýšenými hladinami obratu a proliferace T buněk, apoptózou neinfikovaných T buněk jako stejně jako polyklonální B buňky, přirozené zabíječe (NK) buňky a aktivace monocytů. S patogenezí HIV byly spojeny různé markery založené na buňkách, včetně markerů imunitní aktivace Human Leukocyte Antigen (HLA)-buněčný povrchový receptor (DR) (HLA-DR), shluk diferenciace 38 (CD38), shluk diferenciace 69 (CD69), shluk diferenciace 71 (CD71), shluk markerů senescence diferenciace 57 (CD57), proliferační marker Ki67 a shluk markerů apoptózy diferenciace 95 (CD95) (FasR). Celkově tyto markery patogeneze HIV umožňují zánětlivé reakce, opětovné zasévání rezervoárů, evoluci HIV-1 a lékovou rezistenci a neoportunní onemocnění s postupným zhoršováním imunitního systému.

Testy imunitních funkcí hodnotí funkčnost složky imunitního systému. Obecně jsou to testy založené na in vitro a jsou navrženy k měření výsledku po vystavení lymfocytů specifickým antigenům nebo mitogenům. Výsledkem může být měření imunostimulačního markeru, jako je sekrece gama interferonu, inkorporace tritiovaného thymidinu do buněčné genomové DNA jako výsledek lymfoproliferativní buněčné odpovědi na reminiscenční antigen a/nebo mitogen nebo v případě in- Tuberculin Skin Test založený na vivo, velikost kožní indurace v místě podání tuberkulínového purifikovaného proteinového derivátu.

Společnost Cellestis Limited – společnost Qiagen Company nedávno vyvinula test QuantiFERON® Monitor (QFM nebo CST007) založený na patentované technologii QuantiFERON®, který poskytuje měření buněčně zprostředkované imunitní funkce. Jedná se o in vitro diagnostický test, který využívá kombinaci stimulantů ke specifické stimulaci různých imunitních buněk v plné krvi a měří interferon-gama uvolněný v plazmě pomocí ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay). Proto se cíle této studie zaměří na užitečnost QFM v imunokompromitovaném prostředí HIV, a protože buněčně asociované markery HIV patogeneze ovlivňují imunitní funkci, bude zahrnut krevní test HIV virového rezervoáru, aby bylo možné lépe porozumět úrovni imunitních funkcí v rámci kohort a mezi nimi. .

Jak dlouho to trvá? Jedna návštěva po dobu asi 1 hodiny s Dr. Gatpolintanem a jeho koordinátorem klinické studie k zodpovězení otázek, poté asi 10 minut na odběr krve (devět bloků od kanceláře Dr. Gatpolintana).

Výsledky studie (korelace mezi počty QFM a CD4 a poměry CD4/CD8) budou hodnoceny, včetně prezentace dat, v průměrném období 1 roku po zařazení předmětu studie.