Evaluación de un análisis de sangre para medir la función inmunológica en personas VIH positivas en comparación con personas VIH negativas (QFM)

Las pruebas virológicas e inmunológicas de rutina para monitorear el VIH-1 en personas infectadas que reciben terapia antirretroviral altamente activa (TARGA) incluyen la enumeración de células T CD4, la carga viral en plasma del VIH-1 y la prueba de resistencia genotípica del VIH-1 al inicio para pacientes sin tratamiento previo y después del fracaso virológico durante HAART.

El recuento de células T CD4 es una medida de la cantidad de linfocitos T auxiliares y, junto con la relación CD4/grupo de diferenciación 8 (CD8), son marcadores sustitutos para evaluar el estado del sistema inmunitario y se utilizan para monitorear la progresión. y definir las etapas de la enfermedad del VIH en sujetos infectados con o sin tratamiento. Un recuento de CD4 en aumento o alto y una proporción de CD4/CD8 entre 1 y 4 sugiere el control de la replicación del virus como resultado de TARGA (o de la actividad inmunitaria inherente en sujetos no tratados), mientras que un recuento de CD4 decreciente o bajo y una proporción de CD4/CD8 <1 sugiere falla HAART y/o un sistema inmunológico deteriorado.

La carga viral del VIH-1 en plasma mide el número de copias de ARN del VIH-1 derivadas de las partículas del virus en el plasma. Una carga viral plasmática detectable indica la replicación del VIH-1, mientras que una carga viral plasmática indetectable sugiere el control de la replicación del VIH-1. Sin embargo, con el límite inferior de detección de 50 copias de ARN del VIH-1/mL para los ensayos comerciales, estos ensayos pueden no detectar niveles más bajos de virus en plasma, pero detectarlos en aproximadamente el 70 % de los pacientes que reciben TARGA utilizando ensayos de investigación con un punto de corte de <50 copias de ARN del VIH-1/ml. Dichos ensayos de carga viral en plasma basados ​​en investigaciones nunca se utilizan para el control de rutina en la atención clínica de sujetos infectados.

Si bien los recuentos de CD4 y la carga viral plasmática del VIH-1 están inextricablemente relacionados en el contexto de la enfermedad del VIH-1 y actualmente las pruebas aprobadas para determinar la respuesta del VIH-1 a la HAART, estos ensayos tienen deficiencias significativas para el tratamiento eficaz del VIH, como se define a continuación:

• Recuentos de CD4 y disfunción inmunitaria. Los recuentos de CD4 elevados o en aumento o las proporciones normales de CD4/CD8 como resultado de HAART no necesariamente representan un sistema inmunitario no comprometido, pero pueden representar un estado de disfunción inmunitaria como resultado de la activación inmunitaria de la replicación continua del VIH.
• Reservorios celulares de VIH: niveles bajos de replicación del VIH asociada a células no detectados en el plasma mediante un ensayo estándar de carga viral en plasma. La replicación del VIH asociado a la célula se determina mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del VIH a partir del ARN total asociado a la célula extraído y purificado o la hibridación in situ con el ARN del VIH-1 asociado a la célula en células intactas, y se detecta en aproximadamente el 62 % al 80 % de los pacientes con TARGA con una carga viral plasmática de <50 copias de ARN del VIH-1/mL. El tratamiento dirigido, la eficacia del fármaco contra el VIH asociado a las células, la resistencia al VIH asociada a las células y la identificación de la fuente celular del VIH pueden determinarse mediante ensayos de reservorios de células del VIH y no mediante la carga viral en plasma.
• Diferencias en la respuesta inmunitaria funcional basadas en la actividad transcripcional del VIH-1 asociada a las células y no en una carga viral plasmática indetectable. Las respuestas inmunitarias en pacientes que reciben TARGA con replicación crónica del VIH de bajo nivel en los linfocitos T circulantes y carga viral plasmática indetectable incluyen una proliferación in vitro significativa al antígeno p24 del VIH-1, ninguna respuesta significativa al antígeno de recuerdo toxoide tetánico y respuestas más altas a los antígenos patógenos en comparación a pacientes en TARGA con replicación del VIH indetectable en linfocitos T de memoria y carga viral plasmática indetectable.
• Adherencia de viriones de VIH-1 derivados de plasma a eritrocitos. Los eritrocitos secuestran viriones de VIH-1 asociados al plasma en la sangre total de algunos pacientes que reciben TARGA. Si bien estos pacientes tienen una carga viral en plasma indetectable, la sangre completa correspondiente tiene valores de carga viral que van desde 234 a 82 878 copias de ARN del VIH-1/mL de sangre completa. Estos pacientes con carga viral detectable en sangre total pero con carga viral plasmática indetectable presentan una infección por VIH clínicamente avanzada.
• Recuentos de CD4 y respuesta inexplicable a HAART. Una disminución en los recuentos de CD4 con una carga viral plasmática indetectable puede explicarse por el secuestro del virus plasmático del VIH en los eritrocitos o por los bajos niveles de replicación del VIH asociada a las células.
• Viriones defectuosos/no infecciosos: los ensayos de carga viral en plasma del VIH-1 no se pueden utilizar para diferenciar entre partículas virales infecciosas y no infecciosas o defectuosas, ya que <0,2 % de los viriones del VIH-1 circulantes (o de 1:477 a 1:117 803) son infeccioso. En consecuencia, los ensayos de resistencia a fármacos genotípicos y fenotípicos y los ensayos de tropismo del VIH-1 que utilizan ARN del VIH-1 derivado del ARN del VIH-1 del virus del plasma generarán resultados de virus en su mayoría no infecciosos o defectuosos. La diferencia en las secuencias de ácidos nucleicos entre virus infecciosos y no infecciosos o defectuosos no se ha investigado adecuadamente en relación con las pruebas de diagnóstico y seguimiento. Se desconocen las implicaciones de utilizar secuencias virales de partículas virales predominantemente no infecciosas o defectuosas en oposición a partículas virales infecciosas para pruebas de resistencia a fármacos y tropismo en el cuidado clínico de pacientes infectados por VIH.

En consecuencia, la creciente evidencia demuestra que los recuentos de CD4 y la carga viral en plasma no se pueden utilizar para interpretar completamente la respuesta del VIH a la TARGA. Además, cada vez más datos prueban que la replicación continua del VIH-1 en ausencia de una carga viral plasmática detectable genera VIH y antígenos virales que dan como resultado una activación inmunitaria que permite la patogénesis del VIH, como se demuestra a partir del aumento de los niveles de recambio y proliferación de células T, la apoptosis de las células T no infectadas como así como la activación de células B policlonales, células asesinas naturales (NK) y monocitos. Varios marcadores basados ​​en células se han asociado con la patogénesis del VIH, incluidos los marcadores de activación inmunitaria Antígeno leucocitario humano (HLA)-Receptor de superficie celular (DR) (HLA-DR), grupo de diferenciación 38 (CD38), grupo de diferenciación 69 (CD69), grupo de diferenciación 71 (CD71), grupo de marcadores de senescencia de diferenciación 57 (CD57), marcador de proliferación Ki67 y grupo de marcadores de apoptosis de diferenciación 95 (CD95) (FasR). En conjunto, estos marcadores de la patogenia del VIH permiten respuestas inflamatorias, resiembra de reservorios, evolución del VIH-1 y resistencia a los medicamentos, y enfermedades no oportunistas con un deterioro gradual del sistema inmunitario.

Las pruebas de función inmunitaria evalúan la funcionalidad de un componente del sistema inmunitario. Por lo general, son ensayos basados ​​en in vitro y están diseñados para medir un resultado después de la exposición de los linfocitos a antígenos o mitógenos específicos. El resultado puede ser la medición de un marcador de estimulación inmunitaria, como la secreción de interferón gamma, la incorporación de timidina tritiada en el ADN genómico celular como resultado de una respuesta celular linfoproliferativa para recuperar el antígeno y/o el mitógeno o, en el caso de la in- Prueba cutánea de tuberculina basada en vivo, el tamaño de la induración de la piel en el sitio de administración del derivado de proteína purificada de tuberculina.

Cellestis Limited, una empresa de Qiagen, ha desarrollado recientemente la prueba QuantiFERON® Monitor (QFM o CST007) basada en la tecnología patentada QuantiFERON® para proporcionar una medida de la función inmunitaria mediada por células. Es una prueba de diagnóstico in vitro que utiliza una combinación de estimulantes para estimular específicamente diferentes células inmunitarias en la sangre total y mide el interferón-gamma liberado en el plasma mediante ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas). Por lo tanto, los objetivos de este estudio abordarán la utilidad de QFM en el entorno inmunocomprometido del VIH y, como marcadores asociados a las células, la patogenia del VIH influye en la función inmune. Se incluirá el análisis de sangre del ensayo del reservorio viral del VIH para comprender mejor el nivel de función inmune dentro y entre las cohortes. .

¿Cuánto tiempo tardará? Una visita de aproximadamente 1 hora con el Dr. Gatpolintan y su coordinador de estudios clínicos para responder preguntas, luego aproximadamente 10 minutos para una extracción de sangre (a nueve cuadras de la oficina del Dr. Gatpolintan).

Se evaluarán las medidas de resultado del estudio (correlación entre QFM y recuentos de CD4 y proporciones de CD4/CD8), incluida la presentación de datos, dentro de un período promedio de 1 año después de la inscripción del sujeto del estudio.