Valutazione di un esame del sangue per misurare la funzione immunitaria nelle persone sieropositive rispetto alle persone sieronegative (QFM)

I test virologici e immunologici di routine per monitorare l'HIV-1 in individui infetti in terapia antiretrovirale altamente attiva (HAART) includono il conteggio delle cellule T CD4, la carica virale plasmatica dell'HIV-1 e il test di resistenza genotipica dell'HIV-1 al basale per pazienti naive al trattamento e a seguito di fallimento virologico durante HAART.

La conta delle cellule T CD4 è una misura del numero di linfociti T helper e, insieme al rapporto CD4/cluster of differenziation 8 (CD8), sono marcatori surrogati per valutare lo stato del sistema immunitario e utilizzati per monitorare la progressione e definire gli stadi della malattia da HIV nei soggetti infetti durante o meno il trattamento. Un aumento o un aumento della conta dei CD4 e un rapporto CD4/CD8 compreso tra 1 e 4 suggerisce il controllo della replicazione del virus come risultato della HAART (o dall'attività immunitaria intrinseca nei soggetti non trattati) mentre una diminuzione o un basso conteggio dei CD4 e un rapporto CD4/CD8 <1 suggerisce il fallimento della HAART e/o un deterioramento del sistema immunitario.

La carica virale plasmatica dell'HIV-1 misura il numero di copie dell'RNA dell'HIV-1 derivate dalle particelle virali nel plasma. Una carica virale plasmatica rilevabile indica la replicazione dell'HIV-1, mentre una carica virale plasmatica non rilevabile suggerisce il controllo della replicazione dell'HIV-1. Tuttavia, con il limite inferiore di rilevamento di 50 copie di HIV-1 RNA/mL per i test commerciali, livelli inferiori di virus plasmatico possono non essere rilevati da questi test ma rilevabili in circa il 70% dei pazienti sottoposti a HAART utilizzando test di ricerca con un cutoff <50 copia l'HIV-1 RNA/ml. Tali analisi della carica virale plasmatica basate sulla ricerca non vengono mai utilizzate per il monitoraggio di routine nella cura clinica di soggetti infetti.

Sebbene la conta dei CD4 e la carica virale plasmatica dell'HIV-1 siano indissolubilmente correlate nel contesto della malattia da HIV-1 e attualmente i test approvati per determinare la risposta dell'HIV-1 alla HAART, questi test presentano carenze significative per il trattamento efficace dell'HIV come definito di seguito:

• Conta dei CD4 e disfunzione immunitaria. L'aumento o l'alto numero di CD4 oi normali rapporti CD4/CD8 come risultato della HAART possono non rappresentare necessariamente un sistema immunitario non compromesso, ma possono rappresentare uno stato di disfunzione immunitaria come risultato dell'attivazione immunitaria dovuta alla continua replicazione dell'HIV.
• Serbatoi cellulari dell'HIV: bassi livelli di replicazione dell'HIV associata alle cellule non rilevati nel plasma dal dosaggio standard della carica virale plasmatica. La replicazione dell'HIV associata alle cellule è determinata dalla reazione a catena della polimerasi dell'HIV (PCR) dall'RNA totale associato alle cellule estratto e purificato o dall'ibridazione in situ all'RNA dell'HIV-1 associato alle cellule in cellule intatte e rilevata in circa il 62-80% dei pazienti sottoposti a HAART con una carica virale plasmatica <50 copie HIV-1 RNA/mL. Il trattamento mirato, l'efficacia del farmaco per l'HIV associato alle cellule, la resistenza all'HIV associata alle cellule e l'identificazione della fonte cellulare dell'HIV possono essere determinati mediante analisi dei serbatoi di cellule dell'HIV e non dalla carica virale plasmatica.
• Differenze di risposta immunitaria funzionale basate sull'attività trascrizionale dell'HIV-1 associata alle cellule e sulla carica virale plasmatica non rilevabile. Le risposte immunitarie nei pazienti sottoposti a HAART con replicazione cronica dell'HIV a basso livello nei linfociti T circolanti e carica virale plasmatica non rilevabile includono una significativa proliferazione in vitro dell'antigene p24 dell'HIV-1, nessuna risposta significativa al richiamo del tossoide tetanico dell'antigene e risposte più elevate agli antigeni patogeni rispetto a pazienti in HAART con replicazione dell'HIV non rilevabile nei linfociti T di memoria e carica virale plasmatica non rilevabile.
• Aderenza dei virioni dell'HIV-1 derivati ​​dal plasma agli eritrociti. Gli eritrociti sequestrano i virioni dell'HIV-1 associati al plasma nel sangue intero di alcuni pazienti sottoposti a HAART. Sebbene questi pazienti abbiano una carica virale plasmatica non rilevabile, il sangue intero corrispondente ha valori di carica virale compresi tra 234 e 82.878 copie di HIV-1 RNA/mL di sangue intero. Questi pazienti con carica virale rilevabile nel sangue intero ma con carica virale plasmatica non rilevabile mostrano un'infezione da HIV clinicamente avanzata.
• Conta dei CD4 e risposta inspiegabile alla HAART. Una diminuzione della conta dei CD4 con una carica virale plasmatica non rilevabile può essere spiegata dal sequestro del virus plasmatico dell'HIV negli eritrociti o da bassi livelli di replicazione dell'HIV associata alle cellule.
• Virioni difettosi/non infettivi: i test della carica virale plasmatica dell'HIV-1 non possono essere utilizzati per distinguere tra particelle virali infettive e non infettive o difettose poiché <0,2% di virioni HIV-1 circolanti (o da 1:477 a 1: 117.803) sono contagioso. Di conseguenza, i test di resistenza ai farmaci genotipici e fenotipici e i test di tropismo dell'HIV-1 che utilizzano l'RNA dell'HIV-1 derivato dall'RNA dell'HIV-1 del virus plasmatico genereranno risultati da virus per lo più non infettivi o difettosi. La differenza nelle sequenze di acido nucleico tra virus infettivo e non infettivo o difettoso non è stata adeguatamente studiata in relazione ai test diagnostici e di monitoraggio. Le implicazioni dell'utilizzo di sequenze virali da particelle virali prevalentemente non infettive o difettose opposte a particelle virali infettive per test di resistenza ai farmaci e tropismo nella cura clinica dei pazienti con infezione da HIV sono sconosciute.

Di conseguenza, prove crescenti dimostrano che la conta dei CD4 e la carica virale plasmatica non possono essere utilizzate per interpretare completamente la risposta dell'HIV alla HAART. Inoltre, i dati crescenti dimostrano che la continua replicazione dell'HIV-1 in assenza di una carica virale plasmatica rilevabile genera HIV e antigene virale con conseguente attivazione immunitaria, consentendo così la patogenesi dell'HIV, come dimostrato dall'aumento dei livelli di turnover e proliferazione delle cellule T, apoptosi delle cellule T non infette come così come l'attivazione delle cellule B policlonali, delle cellule natural killer (NK) e dei monociti. Vari marcatori cellulari sono stati associati alla patogenesi dell'HIV, compresi i marcatori di attivazione immunitaria Antigene leucocitario umano (HLA)-Cell Surface Receptor (DR) (HLA-DR), cluster di differenziazione 38 (CD38), cluster di differenziazione 69 (CD69), cluster di differenziazione 71 (CD71), cluster di marcatori di senescenza di differenziazione 57 (CD57), marcatore di proliferazione Ki67 e cluster di marcatori di apoptosi di differenziazione 95 (CD95) (FasR). Complessivamente questi marcatori della patogenesi dell'HIV consentono risposte infiammatorie, risemina dei serbatoi, evoluzione dell'HIV-1 e resistenza ai farmaci e malattie non opportunistiche con un graduale deterioramento del sistema immunitario.

I test di funzionalità immunitaria valutano la funzionalità di un componente del sistema immunitario. Sono generalmente test in vitro e sono progettati per misurare un risultato dopo l'esposizione dei linfociti a specifici antigeni o mitogeni. Il risultato può essere la misurazione di un marker di stimolazione immunitaria come la secrezione di interferone gamma, l'incorporazione di timidina triziata nel DNA genomico cellulare come risultato di una risposta cellulare linfoproliferativa per richiamare l'antigene e/o il mitogeno o, nel caso dell'in- Test cutaneo alla tubercolina basato su vivo, la dimensione dell'indurimento della pelle nel sito di somministrazione del derivato proteico purificato della tubercolina.

Cellestis Limited - Una società Qiagen, ha recentemente sviluppato il test QuantiFERON® Monitor (QFM o CST007) basato sulla tecnologia brevettata QuantiFERON® per fornire una misura della funzione immunitaria cellulo-mediata. È un test diagnostico in vitro che utilizza una combinazione di stimolanti per stimolare in modo specifico diverse cellule immunitarie nel sangue intero e misura l'interferone-gamma rilasciato nel plasma mediante ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay). Pertanto, gli obiettivi di questo studio affronteranno l'utilità del QFM nell'impostazione immunocompromessa dell'HIV e poiché i marcatori associati alle cellule la patogenesi dell'HIV influenza la funzione immunitaria sarà incluso l'esame del sangue del test del serbatoio virale dell'HIV per comprendere meglio il livello della funzione immunitaria all'interno e tra le coorti .

Quanto tempo ci vorrà? Una visita per circa 1 ora con il Dr. Gatpolintan e il suo coordinatore dello studio clinico per rispondere alle domande, quindi circa 10 minuti per un prelievo di sangue (nove isolati dall'ufficio del Dr. Gatpolintan).

Le misure dei risultati dello studio (correlazione tra QFM e conta CD4 e rapporti CD4/CD8) saranno valutate, inclusa la presentazione dei dati, entro un periodo medio di 1 anno dopo l'arruolamento del soggetto dello studio.