Evaluatie van een bloedtest om de immuunfunctie te meten bij hiv-positieve mensen in vergelijking met hiv-negatieve mensen (QFM)

Routinematige virologische en immunologische tests om HIV-1 te monitoren bij geïnfecteerde personen die zeer actieve antiretrovirale therapie (HAART) krijgen, omvatten CD4 T-celtelling, HIV-1 plasma viral load en HIV-1 genotypische resistentietesten bij baseline voor behandelingsnaïeve patiënten en na virologisch falen tijdens HAART.

Het aantal CD4 T-cellen is een meting van het aantal T-helperlymfocyten en, in combinatie met de CD4/cluster van differentiatie 8 (CD8)-ratio, zijn het surrogaatmarkers om de status van het immuunsysteem te evalueren en worden ze gebruikt om de progressie te volgen en definieer stadia van HIV-ziekte bij geïnfecteerde proefpersonen, al dan niet in behandeling. Een stijgend of hoog CD4-aantal en CD4/CD8-ratio tussen 1 en 4 suggereert controle van virusreplicatie als gevolg van HAART (of door inherente immuunactiviteit bij onbehandelde proefpersonen), terwijl een dalend of laag CD4-aantal en een CD4/CD8-ratio <1 suggereert HAART-falen en/of een verslechterend immuunsysteem.

HIV-1 plasma viral load meet het aantal HIV-1 RNA-kopieën afkomstig van virusdeeltjes in plasma. Een detecteerbare virale lading in plasma duidt op HIV-1-replicatie, terwijl een niet-detecteerbare virale lading in plasma duidt op controle van HIV-1-replicatie. Desalniettemin, met de ondergrens van detectie van 50 kopieën HIV-1 RNA/ml voor commerciële assays, kunnen lagere niveaus van plasmavirus onopgemerkt blijven door deze assays, maar detecteerbaar bij ongeveer 70% patiënten op HAART met behulp van onderzoeksassays met een grenswaarde van <50 kopieert HIV-1 RNA/ml. Dergelijke op onderzoek gebaseerde plasma viral load assays worden nooit gebruikt voor routinematige monitoring in de klinische zorg van geïnfecteerde proefpersonen.

Hoewel CD4-tellingen en hiv-1-plasmavirale belasting onlosmakelijk met elkaar verbonden zijn in de context van de hiv-1-ziekte en momenteel de goedgekeurde tests om de hiv-1-respons op HAART te bepalen, hebben deze assays een significante tekortkoming voor de effectieve behandeling van hiv, zoals hieronder gedefinieerd:

• CD4-tellingen en immuundisfunctie. Stijgende of hoge CD4-tellingen of normale CD4/CD8-ratio's als gevolg van HAART hoeven niet noodzakelijkerwijs een onaangetast immuunsysteem te vertegenwoordigen, maar kunnen een toestand van immuundisfunctie vertegenwoordigen als gevolg van immuunactivering door voortdurende HIV-replicatie.
• Cellulaire HIV-reservoirs: Lage niveaus van cel-geassocieerde HIV-replicatie niet gedetecteerd in plasma door standaard plasma viral load assay. Cel-geassocieerde HIV-replicatie wordt bepaald door HIV-polymerasekettingreactie (PCR) van geëxtraheerd en gezuiverd totaal cel-geassocieerd RNA of in-situ hybridisatie met cel-geassocieerd HIV-1 RNA in intacte cellen, en gedetecteerd bij ongeveer 62% tot 80% van de patiënten op HAART met een plasma viral load van <50 kopieën hiv-1 RNA/ml. Gerichte behandeling, cel-geassocieerde hiv-geneesmiddelwerkzaamheid, cel-geassocieerde hiv-resistentie en identificatie van de cellulaire bron van hiv kunnen worden bepaald door hiv-celreservoirassays en niet door plasma viral load.
• Functionele verschillen in immuunrespons op basis van cel-geassocieerde HIV-1-transcriptieactiviteit en niet-detecteerbare virale belasting in plasma. Immuunresponsen bij patiënten op HAART met chronische hiv-replicatie op laag niveau in circulerende T-lymfocyten en niet-detecteerbare virale lading in het plasma omvatten significante in-vitro proliferatie van HIV-1 p24-antigeen, geen significante respons om antigeen tetanus-toxoïde terug te roepen en hogere respons op pathogene antigenen vergeleken aan patiënten op HAART met niet-detecteerbare HIV-replicatie in geheugen-T-lymfocyten en niet-detecteerbare virale belasting in plasma.
• Hechting van plasma-afgeleide HIV-1-virionen aan erytrocyten. Erytrocyten scheiden plasma-geassocieerde HIV-1-virionen af ​​in volbloed van sommige patiënten die HAART gebruiken. Hoewel deze patiënten een niet-detecteerbare virale belasting in het plasma hebben, heeft het overeenkomstige volbloed waarden voor de virale belasting variërend van 234 tot 82.878 kopieën HIV-1 RNA/ml volbloed. Deze patiënten met een detecteerbare virale lading in volbloed, maar met een niet-detecteerbare virale lading in plasma, vertonen een klinisch gevorderde hiv-infectie.
• CD4-tellingen en onverklaarbare reactie op HAART. Een afname van het aantal CD4-cellen met een niet-detecteerbare virale belasting in het plasma kan worden verklaard door de sekwestratie van het HIV-plasmavirus in erytrocyten of door lage niveaus van cel-geassocieerde HIV-replicatie.
• Defecte/niet-infectieuze virionen: HIV-1 plasma viral load assays kunnen niet worden gebruikt om onderscheid te maken tussen infectieuze en niet-infectieuze of defecte virusdeeltjes aangezien <0,2% circulerende HIV-1 virionen (of van 1:477 tot 1:117.803) zijn besmettelijk. Dientengevolge zullen die genotypische en fenotypische geneesmiddelresistentie-assays en HIV-1-tropisme-assays die gebruikmaken van HIV-1-RNA dat is afgeleid van plasmavirus HIV-1-RNA, resultaten opleveren van meestal niet-infectieus of defectief virus. Het verschil in nucleïnezuursequenties tussen infectieus en niet-infectieus of defectief virus is niet goed onderzocht met betrekking tot diagnostische en controletests. De implicaties van het gebruik van virale sequenties van overwegend niet-infectieuze of defecte virale deeltjes in tegenstelling tot infectieuze virusdeeltjes voor geneesmiddelenresistentie- en tropismetests in de klinische zorg van HIV-geïnfecteerde patiënten is onbekend.

Bijgevolg toont toenemend bewijs aan dat CD4-tellingen en virale belasting in plasma niet kunnen worden gebruikt om de respons van HIV op HAART volledig te interpreteren. Bovendien bewijzen steeds meer gegevens dat voortdurende hiv-1-replicatie in afwezigheid van een detecteerbare virale belasting in plasma hiv en viraal antigeen genereert, wat resulteert in immuunactivering, waardoor hiv-pathogenese mogelijk wordt, zoals aangetoond door verhoogde niveaus van T-celvernieuwing en -proliferatie, apoptose van niet-geïnfecteerde T-cellen als evenals activering van polyklonale B-cellen, natuurlijke killercellen (NK-cellen) en monocyten. Verschillende op cellen gebaseerde markers zijn in verband gebracht met HIV-pathogenese, waaronder markers voor immuunactivatie. van differentiatie 71 (CD71), senescentie marker cluster van differentiatie 57 (CD57), proliferatie marker Ki67 en apoptose marker cluster van differentiatie 95 (CD95) (FasR). Al met al maken deze markers van HIV-pathogenese ontstekingsreacties, herzaaien van reservoirs, HIV-1-evolutie en medicijnresistentie mogelijk, en niet-opportunistische ziekten met een geleidelijke verslechtering van het immuunsysteem.

Immuunfunctietesten evalueren de functionaliteit van een onderdeel van het immuunsysteem. Het zijn over het algemeen op in-vitro gebaseerde assays en zijn ontworpen om het resultaat te meten na blootstelling van lymfocyten aan specifieke antigenen of mitogenen. Het resultaat kan de meting zijn van een merker voor immuunstimulatie, zoals uitscheiding van gamma-interferon, opname van getritieerd thymidine in cellulair genomisch DNA als resultaat van een lymfoproliferatieve celrespons om antigeen en/of mitogeen terug te roepen of, in het geval van de in- op vivo gebaseerde tuberculinehuidtest, de grootte van huidverharding op de plaats van toediening van tuberculine-gezuiverd eiwitderivaat.

Cellestis Limited - Een bedrijf van Qiagen, heeft onlangs de QuantiFERON® Monitor (QFM of CST007)-test ontwikkeld op basis van de gepatenteerde QuantiFERON®-technologie om de celgemedieerde immuunfunctie te meten. Het is een diagnostische in-vitrotest die een combinatie van stimulerende middelen gebruikt om specifiek verschillende immuuncellen in het volbloed te stimuleren en het interferon-gamma meet dat in het plasma wordt afgegeven door middel van ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay). Daarom zullen de doelstellingen van deze studie gericht zijn op het nut van QFM in de HIV-immunogecompromitteerde setting en aangezien cel-geassocieerde markers HIV-pathogenese de immuunfunctie beïnvloeden, zal de HIV Viral Reservoir-assay bloedtest worden opgenomen om het niveau van immuunfunctie binnen en tussen cohorten beter te begrijpen. .

Hoelang zal het duren? Een bezoek van ongeveer 1 uur met Dr. Gatpolintan en zijn coördinator van de klinische studie om vragen te beantwoorden, daarna ongeveer 10 minuten voor een bloedafname (negen blokken verwijderd van het kantoor van Dr. Gatpolintan).

Studie-uitkomstmaten (correlatie tussen QFM en CD4-tellingen en CD4/CD8-ratio's) zullen worden beoordeeld, inclusief gegevenspresentatie, binnen een gemiddelde periode van 1 jaar na inschrijving van de proefpersoon.